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Verwendung modifizierter synthetischer Oligonukleotide zum Assay von Nukleinsäure-metabolisierend...
Verwendung modifizierter synthetischer Oligonukleotide zum Assay von Nukleinsäure-metabolisierend...
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Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Using Modified Synthetic Oligonucleotides to Assay Nucleic Acid-Metabolizing Enzymes

Verwendung modifizierter synthetischer Oligonukleotide zum Assay von Nukleinsäure-metabolisierenden Enzymen

Full Text
1,444 Views
05:33 min
July 5, 2024

DOI: 10.3791/66930-v

Ronja Stelzer1, Elizabeth Rzoska-Smith1, Sigurd Gundesø2, Ulli Rothweiler2, Adele Williamson1

1University of Waikato, 2ArcticZymes Technologies ASA

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Hier wird ein Protokoll zum Assay von Nukleinsäure-metabolisierenden Enzymen vorgestellt, wobei Beispiele von Ligasen-, Nuklease- und Polymerase-Enzymen verwendet werden. Der Assay verwendet fluoreszenzmarkierte und unmarkierte Oligonukleotide, die zu Duplexen kombiniert werden können, die RNA- und/oder DNA-Schäden oder Signalwegzwischenstufen nachahmen, was die Charakterisierung des Enzymverhaltens ermöglicht.

In meiner Forschungsgruppe interessieren wir uns sehr für Enzyme, die an der DNA-Replikation und -Reparatur beteiligt sind. Insbesondere untersuchen wir Enzyme aus extremophilen Mikroorganismen und auch aus Krankheitserregern, weil wir verstehen wollen, wie diese Enzyme es diesen Organismen ermöglichen, Umwelteinflüsse zu überleben. Wir interessieren uns sowohl für die biologische Funktion der Enzyme als auch für die biotechnologischen Anwendungen.

Wir arbeiten also viel mit DNA- und RNA-Ligasen, und wir haben kürzlich die Rolle einer minimalen Art von DNA-Ligase etabliert, die anscheinend nach außen transportiert wird. Und wir haben festgestellt, dass dies eine Rolle bei der Biofilmbildung beim Erreger Neisseria gonorrhoeae spielt. Zusammen mit unseren Mitarbeitern von ArcticZymes haben wir auch eine neuartige RNA-zu-DNA-Ligase charakterisiert, die in der Lage ist, DNA-Adapter an beide Enden eines RNA-Stücks zu binden.

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