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DOI: 10.3791/66930-v
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Hier wird ein Protokoll zum Assay von Nukleinsäure-metabolisierenden Enzymen vorgestellt, wobei Beispiele von Ligasen-, Nuklease- und Polymerase-Enzymen verwendet werden. Der Assay verwendet fluoreszenzmarkierte und unmarkierte Oligonukleotide, die zu Duplexen kombiniert werden können, die RNA- und/oder DNA-Schäden oder Signalwegzwischenstufen nachahmen, was die Charakterisierung des Enzymverhaltens ermöglicht.
In meiner Forschungsgruppe interessieren wir uns sehr für Enzyme, die an der DNA-Replikation und -Reparatur beteiligt sind. Insbesondere untersuchen wir Enzyme aus extremophilen Mikroorganismen und auch aus Krankheitserregern, weil wir verstehen wollen, wie diese Enzyme es diesen Organismen ermöglichen, Umwelteinflüsse zu überleben. Wir interessieren uns sowohl für die biologische Funktion der Enzyme als auch für die biotechnologischen Anwendungen.
Wir arbeiten also viel mit DNA- und RNA-Ligasen, und wir haben kürzlich die Rolle einer minimalen Art von DNA-Ligase etabliert, die anscheinend nach außen transportiert wird. Und wir haben festgestellt, dass dies eine Rolle bei der Biofilmbildung beim Erreger Neisseria gonorrhoeae spielt. Zusammen mit unseren Mitarbeitern von ArcticZymes haben wir auch eine neuartige RNA-zu-DNA-Ligase charakterisiert, die in der Lage ist, DNA-Adapter an beide Enden eines RNA-Stücks zu binden.
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