Die sofortige partielle Entfernung von Kumulus-Eizell-Komplexen: Ein verfeinerter Ansatz für die schnelle Beobachtung der In-vitro-Fertilisation

Unsere Forschung konzentriert sich auf die Verbesserung der IVF-Ergebnisse, indem wir bewerten, ob die sofortige teilweise Entnahme von Kumulus-Eizellen die Befruchtung verbessert. Die Effizienz der Beobachtung wirkt sich auf die Qualität der Befruchtungsrasse und des Embryos aus und optimiert die Laborverfahren. Unser Ziel ist es, IVF-Techniken zu verfeinern, um bessere klinische Ergebnisse zu erzielen.

Wir haben festgestellt, dass bei der medialen teilweisen Entfernung von Kumulus-Eizellkompressen die Effizienz der Befruchtungsbeobachtung bei der IVF signifikant erhöht wird. Dies führt zu einem besseren Timing bei der Beurteilung von Befruchtungsereignissen und optimiert möglicherweise die Embryoqualität und die IVF-Ergebnisse. Unser Protokoll verbessert die Effizienz der IVF, indem es die Hands-in-Zeit reduziert und die Umweltbelastung minimiert und möglicherweise die Embryonenqualität verbessert.

Es bietet einen schlanken und effektiven Ansatz im Vergleich zu herkömmlichen Techniken. Stellen Sie zu Beginn die Eizellaufnahmeschalen über Nacht bei 37 Grad Celsius in den Inkubator. Inkubieren Sie über Nacht 12 Milliliter Follikelmanipulationsmedium in 14-Milliliter-Reagenzgläsern mit rundem Boden bei 37 Grad Celsius.

Übertragen Sie dann die Röhrchen 30 Minuten vor der Eizellentnahme in das vorgewärmte Reagenzglasgestell. Geben Sie als nächstes neun Milliliter Follikelmanipulationsmedium in ein 14-Milliliter-Reagenzglas mit rundem Boden und inkubieren Sie es über Nacht bei 37 Grad Celsius. Am Tag der Eizellentnahme werden 4,5 Milliliter des Mediums in eine vorinkubierte Eizellaufnahmeschale gegeben, die mit zwei Millilitern 100%igem Paraffinöl bedeckt ist.

Geben Sie dann 4,5 Milliliter Befruchtungsmedium in eine Eizellaufnahmeschale und inkubieren Sie über Nacht bei 37 Grad Celsius. Geben Sie anschließend einen Milliliter Düngemittel in eine sechs Zentimeter große Schale, die mit 100 % Paraffinöl bedeckt ist. Um die Spitzen der Glaspasteurpipetten abzustumpfen und abzurunden, brennen Sie sie etwa fünf Sekunden lang auf einer Alkohollampe.

Befestigen Sie einen Saugkopf an der Spitze der Pasteurpipetten, so dass er den Boden der Schüssel berühren kann, ohne zu zerkratzen. Spülen Sie das Glas an Ihren Pipetten vorbei in 10-Zentimeter-Schalen mit Follikelmanipulationsmedium. Kurz gesagt, verwenden Sie eine 17-Gauge-Nadel, um die Eizellen unter transvaginaler Ultraschallkontrolle zu entnehmen.

Gießen Sie die im 14-Milliliter-Reagenzglas mit rundem Boden gesammelte Follikelflüssigkeit in eine 10 Zentimeter große Schale. Stellen Sie das Gericht auf eine Plattform mit konstanter Temperatur. Beobachten Sie das OCCC unter einem Stereomikroskop, um das Vorhandensein von Eizellen zu bestätigen und ihre Reife zu beurteilen.

Bestätigen Sie, ob sich Eizellen im OCCC befinden, und nehmen Sie eine vorläufige Beurteilung der Eizellreife vor. Bereiten Sie eine Silikon-Aspirationspipette mit einer runden, flammpolierten Pasteurpipette vor. Aspirieren Sie den OCCC, während Sie die Kulturschale mit dem linken Ringfinger vorsichtig in der Position von neun bis 10:00 Uhr anheben und um etwa 15 Grad nach links neigen.

Beim Ausspucken des aspirierten OCCC in der 11:00-Position der Schüssel vorsichtig horizontal nach rechts verlängert. Beobachten Sie dann die Größe der Granulosazellen um das expandierte OCCC. Verwenden Sie nun eine Pasteurpipette, um überschüssige Granulosezellen vorsichtig mit einem schnellen Schnitt nach unten an der entsprechenden Stelle auf dem länglichen OCCC zu entfernen.

Den geschnittenen OCCC in eine Auffangschale mit OCCC-Spüllösung geben. Gießen Sie die restliche Follikelflüssigkeit in einen sterilen Probenbehälter. Bewerten Sie zunächst die Spermienkonzentration, Beweglichkeit und Morphologie der entnommenen Samenprobe unter einem Lichtmikroskop.

Füllen Sie dann das Samenpellet in ein neues Zentrifugenröhrchen um und waschen Sie es zweimal im Düngemedium. Inkubieren Sie sie bei 6 % Kohlendioxid und 37 Grad Celsius, bis sie benötigt werden. Nachdem Sie überschüssige Granulosezellen entfernt haben, geben Sie sechs bis acht OCCC und einen Milliliter Befruchtungsmedium in die Befruchtungsschale.

Befruchten Sie OCCCs mit modalen Spermien in einem einzigen Tröpfchen, etwa zwei bis drei Stunden nach der Entnahme in der Befruchtungsschale. Für eine kurzfristige Befruchtung inkubieren Sie OCCCs vier bis sechs Stunden lang gemeinsam mit Spermien. Nach der Inkubation werden die Kumuluszellen, die die Eizellen umgeben, mechanisch entfernt.

Aspirieren Sie die Eizellen mit einer Pipette mit einem Innendurchmesser, der etwas kleiner als die Eizellen ist, um eine vollständige Entnahme der Zellen zu gewährleisten. Um die Befruchtung zu bestätigen, beobachten Sie das Vorhandensein von zwei Polkörpern. Eizellen, die einen zweiten Polkörper aufweisen, gelten als befruchtet.

Für eine regelmäßige Befruchtung entnehmen Sie Kumuluszellen mit den Pipetten nach 18 bis 20 Stunden Co-Inkubation zur Beurteilung der Befruchtung. Kultivieren Sie die befruchteten Eizellen drei bis fünf Tage lang nach der Eizellentnahme. Beurteilen Sie die Befruchtung 20 Stunden nach der Insemination, um die Anzahl der Vorkerne zu bestimmen.

Anschließend kultivieren Sie jede Zygote einzeln in einem Mediumtröpfchen und übertragen Sie die Embryonen nach der Befruchtung auf ein Spaltmedium. Übertragen Sie die Embryonen am dritten Tag in das Blastozytenmedium und beurteilen Sie sie am fünften Tag. Geben Sie kontinuierliche Daten als Mittelwert und Standardabweichung an, und drücken Sie ordinale Daten als Proportionen aus.

Von 47 Patientinnen, die eine kurzfristige Insemination erhielten, wurden keine signifikanten Unterschiede in Bezug auf das Alter der Patientinnen und die Anzahl der entnommenen Eizellen beobachtet. Die durchschnittliche Eingriffszeit war bei der teilweisen Entfernung der OCC-Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant kürzer, obwohl keine signifikanten Unterschiede in der Spaltungsrate, der optimalen Embryonenrate und der optimalen Blastozytenrate festgestellt wurden. Bei Patientinnen, die sich einer traditionellen IVF unterzogen, wurden Ähnlichkeiten im Alter der Patientinnen und der Anzahl der entnommenen Eizellen zwischen den beiden Gruppen festgestellt.

Obwohl bei der teilweisen Entfernung der OCCC-Gruppe eine etwas kürzere durchschnittliche Operationszeit festgestellt wurde, war kein statistisch signifikanter Unterschied erkennbar. Wie in der vorherigen Gruppe wurden keine signifikanten Diskrepanzen in der Spaltungsrate, der optimalen Embryonenrate und der optimalen Blastozytenrate festgestellt.