Name: Eine modifizierte Modellpräparation für die Reperfusion des Verschlusses der mittleren Hirnarterie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 18 s
Description: Erfahren Sie eine modifizierte Präparation für die Reperfusion nach Verschluss der mittleren Hirnarterie über die Arteria carotis communis. Diese Methode vereinfacht den komplexen Eingriff und erleichtert die Erforschung von Hirnischämie und neuroprotektiven Wirkstoffen.

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Diese Arbeit wurde unterstützt von der National Natural Science Foundation of China (82173781 und 82373835), dem Postdoktoranden-Forschungsprojekt (BKS212055), dem Science and Technology Innovation Project des Foshan Science and Technology Bureau (2320001007331), der Guangdong Basic and Applied Basic Research Foundation (2019A1515010806), Key Field Projects (Intelligent Manufacturing) der General Universities in der Provinz Guangdong (2020ZDZX2057) und den Scientific Research Projects (Charakteristische Innovation) der General Universitäten in der Provinz Guangdong (2019KTSCX195).

Das Versuchsprotokoll wurde in Übereinstimmung mit den Richtlinien des Ausschusses für die Verwendung von Labortieren und des institutionellen Tierpflege- und -verwendungsausschusses an der Universität für Traditionelle Chinesische Medizin in Chengdu (Aktenzeichen: 2019-DL-002) durchgeführt. Alle Tierforschungsdaten wurden nach den ARRIVE-Richtlinien (Animal Research: Reporting In Vivo Experiments) dokumentiert. Für diese Studie wurden männliche Sprague Dawley (SD) Ratten mit einem Gewicht von 250 g ± 20 g und einem Alter von 6-8 Wochen verwendet. Die Einzelheiten zu den verwendeten Tieren, Reagenzien und Geräten sind in der Materialtabelle aufgeführt.
1. Vorbereitung der Tiere
<ol><li>Einleitung und Aufrechterhaltung einer Tiefenanästhesie bei Ratten mit Zoletil 50 (50 mg/kg, IM) und Xylazinhydrochlorid (40 mg/kg, IP). Stellen Sie sicher, dass die Körpertemperatur während des gesamten chirurgischen Eingriffs bei 37 ± 0,5 °C gehalten wird, indem Sie eine Rektalsone verwenden, die mit einem Heizkissen verbunden ist. Tragen Sie Veterinärsalbe auf die Augen der Ratte auf, um ein Austrocknen zu verhindern.</li>
	<li>Rasieren Sie die Haare von Kopf und Hals der Ratten. Verwenden Sie Enthaarungscreme, um das Fell von Kopf und Hals zu entfernen, und waschen Sie die Creme dann mit normaler Kochsalzlösung ab. Desinfizieren Sie die Haut an der Operationsstelle, indem Sie Ethanol und Povidon-Jod dreimal mit sterilen Wattebällchen auftragen.</li>
	<li>Machen Sie mit einem Skalpell einen 2 cm langen Schnitt in der Mitte des Rattenkopfes entlang der Sagittalnaht und entfernen Sie vorsichtig die Muskeln, die den Schädel bedecken.</li>
	<li>Verdünne den Schädel auf der ischämischen Seite der Ratte mit einem Schädelbohrer. Verwenden Sie normale Kochsalzlösung, um sich während des Schleifvorgangs abzukühlen und Ablagerungen zu entfernen. Erfassen Sie den Ausgangsblutfluss der Ratten mit Hilfe der Laser-Speckle-Kontrastbildgebung (LSCI).</li>
	<li>Tragen Sie Ethanol und Povidon-Jod dreimal mit sterilen Wattebällchen auf die Haut des Halses auf. Machen Sie mit einer chirurgischen Klinge einen 2 cm langen Schnitt entlang der Mittellinie des Halses. Verwenden Sie Retraktoren, um die Haut und die Speicheldrüsen seitlich zurückzuziehen und die Sternocleidomastoideus- und Halsmuskulatur freizulegen.</li>
	<li>Trennen Sie die Muskeln sternocleidomastoideus und die Halsmuskulatur, um das Halsschlagadergebiet freizulegen. Identifizieren Sie die vaskuläre Anatomie der Arteria carotis communis (CCA), der Arteria carotis interna (ICA) und der Arteria carotis externa (ECA). Trennen Sie basierend auf der Gefäßanatomie die CCA sowie die von CCA abgeleitete ECA und ICA15. HINWEIS: Die anatomische Struktur der Ratte deutet darauf hin, dass die CCA-Region hauptsächlich von den Muskeln sternocleidomastoideus und der Halsmuskulatur bedeckt ist, wobei die ICA und ECA von der CCA abgeleitet sind. Nachdem die Trennung den CCA freigelegt hat, ist eine Y-förmige Gabel entlang des CCA zu sehen, die den ICA und den ECA darstellt. Seien Sie vorsichtig, um den Vagusnerv, der parallel zum CCA verläuft, nicht zu beschädigen.</li>
</ol>2. Okklusion des MCA
<ol><li>Binden Sie einen leicht zu entwirrenden Knoten über die Arteria carotis externa (ECA) und die Arteria carotis communis (CCA) mit einem 3-0 Seidenfaden, um den Blutfluss vorübergehend zu blockieren. Positionieren Sie einen Gefäßclip ca. 0,5 cm vom ersten Knoten entfernt auf dem CCA.<ol><li>Färben Sie die Nadel einer 5-ml-Spritze schwarz. Machen Sie mit der schwarz gefärbten Nadel einen kleinen Einstich in den CCA und markieren Sie die Nadellöcher in schwarz.</li>
	</ol></li>
	<li>Führen Sie das monofile Nylonnaht durch die schwarze Markierung in das CCA ein. Öffnen Sie den Gefäßclip und führen Sie den Nylondraht in die Arteria carotis interna (ICA), bis er mit leichtem Widerstand anhält. Ziehen Sie den zweiten Knoten fest an, um die monofile Nylonnaht in der Arterie an Ort und Stelle zu halten und ein Verschieben aus der Blockierposition zu verhindern.</li>
	<li>Notieren Sie sich zu diesem Zeitpunkt den Zeitpunkt der Ischämie und messen Sie den Blutflusswert auf der ischämischen Seite mittels LSCI. Verabreichen Sie Tropfen Bupivacain auf die Halswunde zur Analgesie und zum Wundverschluss. Entfernen Sie die Anästhesiemaske und lassen Sie die Ratte sich erholen. HINWEIS: Wenn das monofile Nylon-Nahtmaterial Schwierigkeiten beim Eindringen in das ICA hat, ziehen Sie es leicht zurück und versuchen Sie erneut, es einzuführen.</li>
</ol>3. Reperfusion von MCAO
<ol><li>Nach 90 Minuten Ischämie betäuben Sie die Ratten erneut mit Isofluran. Messen Sie den zerebralen Blutfluss von der ischämischen Seite mit LSCI und stellen Sie sicher, dass sich die monofile Nylonnaht nicht verschoben hat.</li>
	<li>Löse die Knoten an der Arteria carotis externa (ECA), um eine Blutreperfusion zu ermöglichen. Lösen Sie den Knoten an der Arteria carotis communis (CCA), befestigen Sie die monofile Naht und ziehen Sie die Naht zurück. Legen Sie einen Gefäßclip vor die feste monofile Naht, um Blutungen zu vermeiden.</li>
	<li>Ersetzen Sie den ersten CCA-Knoten durch einen Gefäßclip. Drehen Sie den Gefäßschnitt mit einer Pinzette seitlich (Abbildung 1). Klemmen Sie den Schnitt mit einer Pinzette und ligieren Sie ihn mit einem 6-0-Faden, um den Schnitt zu reparieren. Entfernen Sie den Gefäßclip, prüfen Sie, ob er undicht ist, und bestätigen Sie die vollständige Reperfusion (Video 1). HINWEIS: Führen Sie eine Ligatur durch, um den Schnitt zu reparieren und eine übermäßige Gefäßklemmung zu vermeiden, die zu einer CCA-Stenose führen könnte.</li>
	<li>Zeichnen Sie die Werte des zerebralen kortikalen Blutflusses mit LSCI nach der Inzisionsligatur auf, um eine erfolgreiche Reperfusion zu bestätigen. Schließen Sie den Halsschnitt mit Nähten und verabreichen Sie 1.00.000 Einheiten Penicillin und 2 ml Kochsalzlösung, um Infektionen und Dehydrierung zu verhindern.</li>
	<li>Halten Sie die Wärme aufrecht, bis die Ratten wieder zu Bewusstsein kommen. Bieten Sie nach der Operation weiches Futter an und überwachen Sie die Vitalfunktionen der Tiere.</li>
</ol>4. Beurteilung der Nervenfunktion und der zerebralen ischämischen Schädigung
<ol><li>Sobald die Ratten vollständig erwacht sind, wird ihre neuronale Funktion von Forschern bewertet, die die Tiergruppe nicht kennen. Verwenden Sie die Longa-Score-Skala (Tabelle 1) und die modifizierte mNSS-Skala (Severity Score) (Tabelle 2), um die neurologische Funktion aller Ratten zu bewerten.</li>
	<li>Nach 24 Stunden nach der Operation werden die Ratten unter Isofluran-induzierter Anästhesie (4 % Isofluran bei 4 l/min Sauerstoff) mittels Zervixdislokation16 eingeschläfert (gemäß den institutionell anerkannten Protokollen). Spülen Sie das Gehirn mit Eiswasser ab, um das restliche Blut zu entfernen.</li>
	<li>Teilen Sie das Hirngewebe in 5 Abschnitte und färben Sie diese mit TTC. Nehmen Sie Bilder von beiden Seiten der Hirngewebeschnitte auf, messen Sie den ischämischen Bereich der Vorder- und Rückseite mit der Image J-Software und berechnen Sie die Infarktrate mit der folgenden Formel: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67060/67060eq01.jpg" style="margin: auto;"> HINWEIS: S1 und S2 stellen den Infarktbereich des proximalen Vorderhirns bzw. der proximalen Hirnstammseite der Hirnschnitte dar. Die Infarktfläche jedes Hirnschnitts wird mit der Swanson-Formel korrigiert, wobei h die Dicke des Hirnschnitts darstellt. Diese Formel, die der Autor bereits in früheren Forschungen17 skizziert hat, ermöglicht eine genauere Berechnung der Größe der Infarktläsion.</li>
	<li>Analysieren Sie die Daten mit Hilfe von Statistik- und Grafiksoftware, um die Erfolgsquote und Stabilität des Modells zu bewerten.</li>
	<li>Die Immunfluoreszenzmethode wird zur Markierung kortikaler Neuronen bei Ratten eingesetzt, um die durch diese Methode verursachten neuronalen Schäden weiter zu validieren. Nach 24 Stunden Ischämie-Reperfusion bei Ratten wurde eine Herzperfusion mit vorgekühltem PBS durchgeführt, um Hirngewebe zu gewinnen.</li>
	<li>Betten Sie das Hirngewebe ein und frieren Sie es in Abschnitte ein. Verwenden Sie neuronale Antikörper wie den unreifen neuronalen Marker Doublecortin (DCX)18, den neuronalen Kernmarker Neuronale Kerne (NeuN)18 und den dendritischen Neuronenmarker Microtubuli-associated protein-2 (MAP-2)19. Beobachten Sie die Expression ischämischer Neuronen mit der konfokalen Lasermikroskopie.</li>
</ol>

Modifiziertes MCAO/R-Modell mit erhaltener ECA für verbesserte Reperfusion und Stabilität

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<li>Feigin, V. L., Owolabi, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pragmatic+solutions+to+reduce+the+global+burden+of+stroke%3A+a+World+Stroke+Organization-Lancet+Neurology+Commission%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Pragmatic solutions to reduce the global burden of stroke: a World Stroke Organization-Lancet Neurology Commission.</a> Lancet Neurol. 22 (12), 1160-1206 (2023).</li>
<li>Putaala, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+Stroke+in+Young+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22Continuum+%28Minneapolis%2C+Minn%29%22%5BJournal%5D)">Ischemic Stroke in Young Adults.</a> Continuum (Minneapolis, Minn). 26 (2), 386-414 (2020).</li>
<li>Girotra, T., Lekoubou, A., Bishu, K. G., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+contemporary+and+comprehensive+analysis+of+the+costs+of+stroke+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">A contemporary and comprehensive analysis of the costs of stroke in the United States.</a> J Neurol Sci. 410, 116643(2020).</li>
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<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema+1.+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Nosotchu%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema 1. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Nosotchu. , 1-7 (1986).</li>
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<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+cerebral+microcirculation+perfusion+in+rat+models+of+middle+cerebral+artery+occlusion+prepared+through+common+carotid+artery+insertion+and+external+carotid+artery+insertion%5BTitle%5D)+AND+%22CJTER%22%5BJournal%5D)">Comparison of cerebral microcirculation perfusion in rat models of middle cerebral artery occlusion prepared through common carotid artery insertion and external carotid artery insertion.</a> CJTER. 27 (11), 1683-1691 (2023).</li>
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<li>Trueman, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+re-examination+of+the+intraluminal+filament+MCAO+model%3A+impact+of+external+carotid+artery+transection%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">A critical re-examination of the intraluminal filament MCAO model: impact of external carotid artery transection.</a> Transl Stroke Res. 2 (4), 651-661 (2011).</li>
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<li>Pitoulis, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodelling+of+adult+cardiac+tissue+subjected+to+physiological+and+pathological+mechanical+load+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Remodelling of adult cardiac tissue subjected to physiological and pathological mechanical load in vitro.</a> Cardiovasc Res. 118 (3), 814-827 (2022).</li>
<li>Ma, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cerebral+ischemia%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Animal models of cerebral ischemia: A review.</a> Biomed Pharmacother. 131, 110686(2020).</li>
<li>Belayev, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Docosanoids+promote+neurogenesis+and+angiogenesis%2C+blood-brain+barrier+integrity%2C+penumbra+protection%2C+and+neurobehavioral+recovery+after+experimental+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Docosanoids promote neurogenesis and angiogenesis, blood-brain barrier integrity, penumbra protection, and neurobehavioral recovery after experimental ischemic stroke.</a> Mol Neurobiol. 55 (8), 7090-7106 (2018).</li>
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</ol>

Das Modell des Verschlusses der mittleren Hirnarterie (MCAO), das durch eine monofile Nylonnaht induziert wird, ist die gebräuchlichste Methode zur Vorbereitung von MCAO-Modellen. Dieser Ansatz wird in präklinischen Studien häufig übernommen und hat aufgrund seiner Einfachheit, der fehlenden Notwendigkeit einer Kraniotomie, des minimalen chirurgischen Traumas und der Fähigkeit, eine Reperfusion zu erreichen, von vielen Praktikern Anerkennung gefunden.
Es gibt zwei klassische Operationstechniken für die intraluminale Filament-MCAO: die Koizumi-Methode8 und die Longa-Methode9. Der Hauptunterschied zwischen diesen Methoden liegt in der Art und Weise, wie die Naht eingeführt wird, um das MCA zu verschließen. Bei der Koizumi-Methode wird die Naht durch den Schnitt der Arteria carotis communis (CCA) in die Arteria carotis interna (ICA) eingeführt. Das vordere Ende der Naht ist mit Silikon beschichtet, um den Startpunkt des MCA zu blockieren. Umgekehrt wird bei der Longa-Methode die Naht durch die durchtrennte Arteria carotis externa (ECA) in die ICA eingeführt. Das vordere Ende der Naht wird zu einer kugelförmigen Form erweitert, um den Startpunkt der MCA zu blockieren (Abbildung 5). Bei der Reperfusion wird die Naht sanft zurückgezogen, um den Blutfluss wiederherzustellen.
Bei der Longa-Methode wird die Naht durch die durchtrennte Arteria carotis externa (ECA) in die Arteria carotis interna (ICA) eingeführt. Dieser Prozess erfordert das Trennen und Trennen der ECA sowie das Trennen und Entfernen von kleinen Ästen, die dann mit einem Elektrokoagulationsstift abgeschnitten werden, um ein Ausbluten zu verhindern. Folglich erfordert diese Methode eine sorgfältige und präzise Bedienung. Darüber hinaus kann das kurze Restende der durchtrennten ECA das Abrutschen der Naht während des Einführens erleichtern, was die Komplexität des Eingriffs weiter erhöht. Diese Herausforderung ist besonders ausgeprägt bei der Vorbereitung eines Mausmodells für zerebrale Ischämie, da sie oft den Einsatz eines Mikroskops erfordert, um die Genauigkeit zu gewährleisten, was die Gesamtkomplexität der Operation erhöht.
Das Hauptanliegen der Koizumi-Methode liegt in der Ligatur der Arteria carotis communis (CCA), die zu einer kompensatorischen Reperfusion des Hirngewebes auf der ischämischen Seite allein durch den Circle of Willis führt. Die CCA ist ein wichtiger Ast des Aortenbogens vom Herzen und dient als Hauptarterie für die Durchblutung des zerebralen Blutflusses. Daher kommt es bei dem nach der Koizumi-Methode erstellten zerebralen Ischämie-Reperfusionsmodell häufig zu einem Zustand der Hypoperfusion. Diese Minderdurchblutung ist nicht auf die mittlere Hirnarterie beschränkt, sondern erstreckt sich auf die gesamte ischämische Hemisphäre auf derselben Seite. Selbst nach 35-tägiger Modellierung kehrt der Blutflusswert nicht zum Ausgangswert zurück, was darauf hindeutet, dass die Koizumi-Methode eher als ischämisches Modell mit chronischer Hypoperfusion als als Ischämie-Reperfusionsmodell angesehen werden sollte10.
Im Gegensatz dazu kann mit der Longa-Methode bei MCAO/R-Tieren ein Blutflusswert von 100 % erreicht werden. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass das Erreichen einer vollständigen Rekanalisation nicht unbedingt bedeutet, dass die Koizumi-Methode aufgegeben werden sollte. Wenn eine klinische Translation in Betracht gezogen wird, könnte die Koizumi-Methode besser für Patienten mit spontaner langsamer Rekanalisation nach Arterienverschluss geeignet sein. In der klinischen Praxis ist dieses Phänomen jedoch relativ selten. Nur ein kleiner Prozentsatz der Patienten mit ischämischem Schlaganfall erfüllt die Kriterien für eine Thrombolyse und erhält innerhalb des Behandlungszeitfensters eine wirksame Behandlung20,21. Darüber hinaus kommt es bei einigen Patienten auch nach thrombolytischer Therapie nicht zu einer vollständigen Revaskularisation22. Daher kann die Koizumi-Methode verwendet werden, um den Zustand solcher Patienten zu simulieren.
Auf der anderen Seite ermöglicht die Longa-Methode eine schnelle Rekanalisation der Gefäße nach dem Verschluss, wodurch sie sich besser für die Simulation von Patienten eignet, die in der klinischen Praxis eine wirksame thrombolytische Therapie oder Thrombektomie erhalten. Für die Simulation von Patienten, die sich keiner thrombolytischen Therapie unterzogen haben, kann das nach der Koizumi-Methode hergestellte Modell der permanenten zerebralen Ischämie einen vollständigeren Verschluss und ein einfacheres chirurgisches Verfahren bieten.
Die Longa-Methode zur Induktion eines Verschlusses/einer Reperfusion der mittleren Hirnarterie (MCAO/R) kann zu einer signifikanteren Reperfusionsschädigung führen, indem die von der Arteria carotis communis (CCA) abgeleitete vaskuläre Rekanalisation erhalten bleibt23,24. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass die Arteria carotis externa (ECA) während der Longa-Methode abgeschnitten und dauerhaft ligiert werden muss, was die gesamte Blutflussstruktur des Gehirns stört und nicht mit klinischen Patienten übereinstimmt. Darüber hinaus sind die Arteria lingualis, die Arteria maxillaris und die Arteria occipitalis Äste der ECA13. So kann das Schneiden oder dauerhafte Litieren der ECA zu Ess- und Trinkstörungen führen, die zu Gewichtsverlust führen25. Frühere Studien haben gezeigt, dass der Tod von Mäusen nach MCAO-Modellierung in erster Linie auf eine unzureichende Nahrungs- oder Wasseraufnahme und nicht auf eine zerebrale ischämische Schädigung zurückzuführen ist14,26. Darüber hinaus kann die Ligatur des ECA den Blutfluss der Netzhaut verringern und Netzhautschäden in Form von Zelltod induzieren27.
Darüber hinaus ist der wichtigste Indikator für die Schlaganfallforschung das Infarktvolumen; Es hat sich jedoch gezeigt, dass das Volumen der durch die Nahtmethode induzierten Infarkte eine signifikante Standardabweichung aufweist, selbst wenn strenge Operations- und Datenerfassungsprotokolle eingehalten werden. In früheren Berichten war das Infarktvolumen mit dem Grad der Reperfusionassoziiert 28, und die Reperfusion des Schlaganfallmodells, das nach Koizumis Methode erstellt wurde, hängt von der Willis-Zirkulationab 29,30,31. Es wurde jedoch nachgewiesen, dass der Willis-Zyklus eine hohe anatomische Variabilität aufweist, insbesondere bei C57Bl/6-Mäusen, bei denen 90 % der Tiere eine oder zwei posteriore kommunizierende Arterien fehlenkönnen 32, was die Schlüsseldeterminante für eine hohe Variabilität bei ischämischen Verletzungenist 33. Daher kann die Erhaltung der Perfusion von CCA die Variabilität des Infarktvolumensverringern 34. Es wurde berichtet, dass der durchschnittliche Variationskoeffizient der Infarktgröße in Schlaganfallstudien 29,5 %31 betrug, was zur geringen statistischen Aussagekraft von Schlaganfallstudien beitrug. Es stellt auch eine große Herausforderung für die potenzielle Wirkstoffforschung dar. Dies erhöht zweifellos die Kosten für die Entwicklung und klinische Umsetzung und kann dazu führen, dass Forschern potenziell wirksame Medikamente fehlen. Außerdem erhöht sich dadurch die Anzahl der Tiere, die in die statistische Auswertung des Versuchs einbezogen werden sollen, was weiter gegen das 3R-Prinzip der Tierethik verstößt.
Daher wurden in dieser Studie Modellierungsmethoden modifiziert, um die Integrität der Blutflussstruktur des Hirngewebes und eine ausreichende Reperfusion nach zerebraler Ischämie zu gewährleisten. Die wichtigsten Modifikationen umfassen zwei Schritte: (1) Einführen der Naht in CCA mit einer 5-ml-Spritzennadel anstelle eines kleinen Schnitts; Dieser Schritt reduziert die Inzision der CCA und ist förderlicher für die Ligatierung der Inzision; (2) Ziehen Sie die Naht zurück und verwenden Sie feinere Seidenfäden, um die Nadelöffnung des CCA zu ligieren, ohne die Durchblutung des CCA zu beeinträchtigen. Dies erfordert natürlich auch einen sorgfältigen chirurgischen Eingriff, unterscheidet sich aber von der Einführung der Naht über ECA; Diese Methode bewahrt die Integrität der zerebralen Blutflussstruktur und ermöglicht gleichzeitig eine vollständige Reperfusion des Blutflusses durch CCA, was das Operationsverfahren vereinfacht und die Variabilität des Infarktvolumens reduziert. Einige Forscher haben ähnliche Forschungsmethoden verwendet, um Schnitte mit Gewebekleber zu reparieren, aber dies birgt das Potenzial für Thrombosen, die unkontrollierbare Auswirkungen haben werden. Und es dauert länger, den Schnitt zu stabilisieren25.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass diese Studie einen modifizierten Ansatz für die Erstellung des zerebralen Ischämie-Reperfusionsmodells bietet, das eine adäquate Blutperfusion nach Filamententnahme ermöglicht und zu signifikant reproduzierbaren Infarktvolumina und neurologischen Schäden führen kann. Alle oben genannten Ergebnisse zeigen, dass die modifizierte Methode praktikabel und reproduzierbar ist und Praktikern als Referenz dienen kann, um Modelle zur Erleichterung der effektiven klinischen Translation von zerebralen ischämischen Arzneimitteln vorzubereiten.

Nach Angaben der Weltgesundheitsorganisation ist der Schlaganfall in den letzten zehn Jahren die zweithäufigste Todesursache weltweit geblieben, mit einer hohen Inzidenzrate, einer hohen Sterblichkeit und einer hohen Behinderungsrate 1,2. Mit der Alterung der Weltbevölkerung wird erwartet, dass die Inzidenz von Schlaganfällen in den Entwicklungsländern zunehmen wird und möglicherweise zur Hauptursache für vorzeitigen Tod und Behinderung bei Erwachsenen wird. Darüber hinaus gibt es einen Trend, dass Schlaganfälle in einem jüngeren Alter auftreten3 Jahre. Auch der Verlust der Erwerbsbevölkerung nach einem Schlaganfall stellt eine schwere Belastung für Familien und die Gesellschaftdar 4. Daher stellt die Entwicklung sicherer und wirksamer Therapien eine große Herausforderung in der Schlaganfallforschung dar.
Tiermodelle dienen als wichtige Werkzeuge für die Untersuchung der Prävention und Behandlung menschlicher Krankheiten. Die erfolgreiche Umsetzung von Schlaganfallbehandlungsstrategien hängt von der Reproduzierbarkeit und Zuverlässigkeit von Schlaganfall-Tiermodellen ab 5,6. Die mittlere Hirnarterie (MCA) ist eine häufige Stelle für klinische Schlaganfälle, was das MCAO-Modell zum Modell macht, das dem menschlichen ischämischen Schlaganfall am nächsten kommt. Das MCAO-Modell, das mit der Nahtmethode hergestellt wurde, wurde von Forschern aufgrund von Vorteilen wie dem Fehlen eines Kraniotomie und der einfachen Kontrolle der ischämischen Zeit bevorzugt. Es wurde in über 40 % der neuroprotektiven Experimente eingesetzt7. Trotz seiner zahlreichen Vorteile bleiben die operationellen Details dieses Modells für viele Forscher ein umstrittenes Thema.
Beim Modell des nahtinduzierten Verschlusses der mittleren Hirnarterie (MCAO) erfolgt die Reperfusion durch Zurückziehen der Naht. Derzeit werden zwei Hauptmethoden für das Einführen von Nähten verwendet: Koizumis Methode8 und die Methode9 von Longa. Bei der Koizumi-Methode tritt die Naht hauptsächlich durch den Schnitt der Arteria carotis communis (CCA) in die Arteria carotis interna (ICA) ein, während sie bei der Longa-Methode durch die durchtrennte Arteria carotis externa (ECA) in die ICA gelangt. Während der Reperfusion erfordert die Koizumi-Methode eine dauerhafte Ligatur der CCA-Inzision und stützt sich für die Reperfusion auf den Willis-Kreis10. Einige Studien deuten jedoch darauf hin, dass eine effektive Reperfusion nicht allein durch die kompensatorische Versorgung des Willis-Kreises nach Verlust der CCA-Versorgung erreicht werden kann. Darüber hinaus weist der Willis-Kreis eine hohe anatomische Variabilität auf, insbesondere bei C57Bl/6-Mäusen, was die Infarktvariabilität erhöht und die Zuverlässigkeit der experimentellen Daten verringert. Infolgedessen wurde diese Methode von Forschern zunehmend in Frage gestellt11.
Bei der Longa-Methode wird eine Naht durch die durchtrennte ECA eingeführt und dann die Arteria carotis interna (ICA) dauerhaft ligiert, sobald die Naht gezogen wird. Dadurch bleibt die CCA-Durchgängigkeit erhalten und eine Blutperfusion von bis zu 100 % der Ausgangswerte möglich. Bei dieser Methode müssen jedoch die Arteria carotis externa und die kleinen arteriellen Äste getrennt, abgeschnitten oder elektrokoaguliert werden, was den Eingriff zu einer Herausforderung macht. Es stört auch die gesamte Blutflussstruktur des Gehirns, die sich vom klinischen Zustand des Patienten unterscheidet12. Wichtig ist, dass Studien darauf hinweisen, dass das Schneiden oder Ligatieren der ECA ischämische Läsionen in den Muskeln verursachen kann, die das Kauen und Schlucken steuern, die Ernährung der Tiere beeinträchtigen und bei Ratten zum postoperativen Tod der Tiere und zu schweren sensorischen und motorischen Schäden führenkönnen 13,14.
Daher ist eine modifizierte Modellvorbereitungsmethode dringend erforderlich, um diese Probleme zu lösen. In dieser Studie wird eine modifizierte MCAO-Modellierungsmethode vorgestellt, die den CCA-Insertionsschnitt repariert und eine effektive Reperfusion erzielt. Das Verfahren ist einfach, praktisch und durchführbar, führt zu erheblichen neurologischen Schäden und replizierbaren Infarktläsionen und bietet Schlaganfallforschern eine wertvolle Orientierungshilfe.

<table><tbody><tr><td>Tieranästhesiesystem</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IE</td><td></td></tr><tr><td>Tiertemperaturhalter</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>69020</td><td></td></tr><tr><td>Cy3 Sekundärantikörper</td><td>Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd</td><td>GB21303</td><td></td></tr><tr><td>DAP1 Antikörper</td><td>Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd</td><td>G1012</td><td></td></tr><tr><td>DCX Antikörper</td><td>Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd</td><td>GB13434</td><td></td></tr><tr><td>Ziegenserum</td><td>Beyotime Biotechnology Co., Ltd</td><td>C0265</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad Software</td><td>GraphPad Prism 8.0</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>National Institutes of Health</td><td>ImageJ Software</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>Laser Speckle Blut Flow-Imaging-System</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>PeriCam PSI NR</td><td></td></tr><tr><td>MAP-2 Antikörper</td><td>Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd</td><td>GB11128</td><td></td></tr><tr><td>Miniatur-Handheld Schädelbohrer</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>87001</td><td></td></tr><tr><td>monofile Naht</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>250-280g</td><td></td></tr><tr><td>NeuN Antikörper</td><td>Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd</td><td>GB11138</td><td></td></tr><tr><td>OCT Einbettungsmittel</td><td>BIOSHARP</td><td>BL557A</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Natrium</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd.</td><td>17121709-2</td><td></td></tr><tr><td>Schnelle Antigen-Entnahmelösung für Frozen Sections</td><td>Beyotime Biotechnology Co., Ltd</td><td>P0090</td><td></td></tr><tr><td>SD Ratten</td><td>SPF ( Peking ) Biotechnology Co., Ltd.</td><td>250-280g</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Beyotime Biotechnology Co., LTD</td><td>ST795</td><td></td></tr><tr><td>TTC</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>2019030101</tr></tbody></table>

eine modifizierte modellpräparation für die reperfusion des verschlusses der mittleren hirnarterie

A Modified Model Preparation for Middle Cerebral Artery Occlusion Reperfusion

Das Modell der Reperfusion des Verschlusses der mittleren Hirnarterie (MCAO/R) ist entscheidend für das Verständnis der pathologischen Mechanismen des Schlaganfalls und für die Entwicklung von Medikamenten. Unter den häufig verwendeten Modellierungsmethoden wird die Koizumi-Methode jedoch häufig unter die Lupe genommen, da sie die Halsschlagader (CCA) ligiert und nicht in der Lage ist, eine angemessene Reperfusion zu erreichen. In ähnlicher Weise wurde die Longa-Methode dafür kritisiert, dass sie die Arteria carotis externa (ECA) trennt und ligiert. Diese Studie zielt darauf ab, eine modifizierte Modellvorbereitungsmethode einzuführen, die die Integrität der ECA bewahrt, das Einführen einer monofilen Nylonnaht durch die CCA, die Reparatur des ligierten CCA-Schnitts und die Aufrechterhaltung der Reperfusion aus der CCA beinhaltet. Die Reperfusion des Blutflusses wurde mit Hilfe der Laser-Speckle-Flow-Bildgebung bestätigt. Bewertungsmethoden wie die Longa-Skala, der Modified Neurological Severity Score, die Färbung von Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) und die Immunfluoreszenzmarkierung von Neuronen zeigten, dass dieser Ansatz eine stabile Schädigung des ischämischen Nervs induzieren kann. Dieses modifizierte MCAO/R-Modellprotokoll ist einfach und stabil und bietet Praktikern eine wertvolle Orientierungshilfe auf dem Gebiet der zerebralen Ischämie.

Die Laser-Speckle-Flow-Bildgebung zeigte, dass vor dem Verschluss der monofilen Nylonnaht ein reichlicher Blutfluss im Bereich der mittleren Hirnarterie (MCA) vorhanden war, und die Ausgangswerte des Blutflusses der Ratten wurden aufgezeichnet. Nach dem Verschluss des MCA nahm der Blutflusswert auf der ischämischen Seite des Gehirns rapide ab. Vor dem Ziehen der Naht wurden die Blutflusswerte auf der ischämischen Seite erneut überprüft, um zu bestätigen, ob die Naht das MCA verschließt. Die Ergebnisse zeigten nur eine geringe Veränderung des Blutflusses. Nach dem Ziehen der Naht stellte sich die Durchblutung des Blutflusses schnell wieder her (Abbildung 2). Video 1 zeigt auch den robusten Füllpuls der Arteria carotis communis, was darauf hindeutet, dass mit dieser Methode eine ausreichende Durchblutungsperfusion nach zerebraler Ischämie erreicht werden kann.
Die Ergebnisse der neurologischen Funktionsscores (Abbildung 3) zeigten, dass der Longa-Score der Modellgruppe im Vergleich zur Schein-OP-Gruppe 1,80 ± 0,27 (p &lt; 0,05) und der mNSS-Score 7,4 ± 0,89 (p &lt; 0,05) betrug. Diese Werte deuten darauf hin, dass das mit dieser Methode erstellte Modell für den Verschluss/die Reperfusion der mittleren Hirnarterie (MCAO/R) zu signifikanten neurologischen Schäden führte. Video 2 zeigt das charakteristische Verhalten von Modellgruppenratten, die sich beim Krabbeln drehen, ein Kennzeichen für schlaganfallinduzierte Verletzungen, was die Validität dieser Methode weiter bestätigt.
Die TTC-Färbung zeigte, dass die Infarktrate in der Modellgruppe Ratten 5,58 ± 1,79 (p &lt; 0,05) betrug, wobei der Infarktbereich hauptsächlich das Striatum und den Kortex betraf und die Infarktgröße relativ stabil blieb. Die Immunfluoreszenzfärbung veranschaulichte den Verlust kortikaler Neuronen nach Ischämie-Reperfusion (Abbildung 4). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass diese Methode ein stabiles MCAO/R-Modell etablieren kann, das für die Bewertung der präklinischen Wirksamkeit von Arzneimitteln geeignet ist.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67060/67060fig01v5.jpg"> Abbildung 1: Schematische Darstellung der Connectorligation von CCA. Der gelbe Kreis markiert den Einstichpunkt und die Ligaturstelle des Drahtsteckers, während die Ligaturposition (gelber Pfeil) anzeigt, wo die Arteria carotis communis (CCA) mit dem Draht ligiert wurde. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/67060fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67060/67060fig02v5.jpg"> Abbildung 2: Laser-Speckle-Blutflussbilder zu Zeiten von Ratten auf der ischämischen Seite vor, nach der Okklusion sowie vor und nach der Reperfusion. (A) Zerebrale Blutflussbilder von Ratten, wobei blaue Bereiche niedrige Blutflusswerte und rote Bereiche hohe Blutflusswerte anzeigen. Maßstabsbalken: 200 mm. (B) Veränderungen der zerebralen Ischämie-Reperfusion bei Ratten, dargestellt als mittlere ± Standardabweichung, bei einer Stichprobengröße von n = 5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/67060fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67060/67060fig03v5.jpg"> Abbildung 3: Ergebnisse der Infarktareale und der neurologischen Funktionswerte in der Scheingruppe und der Modellgruppe. (A) Die TTC-Färbung stellte die infarzierten Bereiche des Hirngewebes sowohl in der Scheingruppe als auch in der Modellgruppe dar, wobei weiße Bereiche auf infarziertes Gewebe und rote Bereiche auf normales Gewebe hindeuteten. (B) Die quantitativen Ergebnisse der Longa- und mNSS-Scores sowie der Infarktrate werden vorgestellt. Die statistische Signifikanz im Vergleich zur Scheingruppe wird mit *p &lt; 0,05 angegeben, bei einer Stichprobengröße von n = 5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/67060fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67060/67060fig04v5.jpg"> Abbildung 4: Ergebnisse der Schädigung kortikaler Neuronen in der Scheingruppe und Modellgruppe. Expression von NeuN (A), DCX (B) und MAP-2 (C) in kortikalen Neuronen. Maßstabsbalken: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/67060fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67060/67060fig05v5.jpg"> Abbildung 5: Diagramm der MCA-Okklusion und -Reperfusion durch Koizumi, Longa und die modifizierte Methode. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/67060fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Motortests/stark&gt;</td>
			<td>Punkte</td>
		</tr><tr><td>Ratte am Schwanz aufziehen</td>
			<td>3</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Beugung der Vordergliedmaße</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Beugung der Hintergliedmaße</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Kopf innerhalb von 30 s &gt; 10° zur vertikalen Achse bewegt</td>
		</tr><tr><td>Ratte auf den Boden setzen</td>
			<td>3</td>
		</tr><tr><td colspan="2">0 Normaler Spaziergang</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Unfähigkeit, geradeaus zu gehen</td>
		</tr><tr><td colspan="2">2 Kreisen zur paretischen Seite</td>
		</tr><tr><td colspan="2">3 Fallen Sie auf die paretische Seite</td>
		</tr><tr><td>Sensorische Tests</td>
			<td>2</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Platzierungstest (visueller und taktiler Test)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">2 Propriozeptiver Test (tiefes Gefühl, die Pfote gegen die Tischkante drücken, um</td>
		</tr><tr><td colspan="2">stimulieren die Gliedmaßenmuskulatur)</td>
		</tr><tr><td>Balkenausgleich-Tests</td>
			<td>6</td>
		</tr><tr><td colspan="2">0 Gleichgewichte mit ruhiger Haltung</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Greift die Seite des Balkens</td>
		</tr><tr><td colspan="2">2 Umarmt den Balken und ein Ast fällt vom Balken herunter</td>
		</tr><tr><td colspan="2">3 Umarmt den Balken und zwei Gliedmaßen fallen vom Balken herunter oder drehen sich auf dem Balken (&gt;60 s)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">4 Versucht auf dem Balken zu balancieren, fällt aber herunter (&gt;40 s)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">5 Versucht auf dem Balken zu balancieren, fällt aber herunter (&gt;20 s)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">6 Stürze ab: Kein Versuch, das Gleichgewicht zu halten oder sich am Balken festzuhalten (&lt;20 s)</td>
		</tr><tr><td>Fehlende Reflexe und abnormale Bewegungen</td>
			<td>4</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Ohrmuschelreflex (Kopfschütteln bei Berührung des Gehörgangs)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Hornhautreflex (Augenblinzeln bei leichter Berührung der Hornhaut mit Watte)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Schreckreflex (motorische Reaktion auf ein kurzes Geräusch beim Knacken eines Klemmbrettpapiers</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Krampfanfälle, Myoklonus, Myodystonie</td>
		</tr><tr><td>Maximale Punktzahl</td>
			<td>18</td>
		</tr></tbody></table>Tabelle 1: Modifizierter neurologischer Schweregrad.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="2">Zea-Longa punktet</td>
		</tr><tr><td>Punktzahl</td>
			<td>Symptom</td>
		</tr><tr><td>0 Punkte</td>
			<td>Keine neurologischen Ausfälle</td>
		</tr><tr><td>1 Punkt</td>
			<td>Leicht: Die rechte Vorderpfote kann nicht vollständig ausgestreckt werden, wenn der Schwanz angehoben wird</td>
		</tr><tr><td>2 Punkte</td>
			<td>Mittel: Kreist beim Gehen nach rechts/links</td>
		</tr><tr><td>3 Punkte</td>
			<td>Schwer: stürzt beim Gehen nach rechts/links</td>
		</tr><tr><td>4 Punkte</td>
			<td>Unfähigkeit, spontan zu gehen, mit Bewusstlosigkeit</td>
		</tr></tbody></table>Tabelle 2: Zea-Longa-Ergebnisse.
Video 1: Wichtige Schritte für die Ligaturreparatur der CCA-Inzision während der Reperfusion bei Ratten. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/video%201.zip" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.</a>
Video 2: Verhaltensvideos von Ratten, die sich MCAO/R unterziehen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/video%202.zip" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.</a>

Dieses Protokoll beschreibt den Prozess der Vorbereitung auf die Reperfusion des Verschlusses der mittleren Hirnarterie über die Arteria carotis communis.

Eine modifizierte Modellpräparation für die Reperfusion des Verschlusses der mittleren Hirnarterie

The middle cerebral artery occlusion reperfusion (MCAO/R) model is crucial for understanding the pathological mechanisms of stroke and for drug ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Filamentous Verschluss der mittleren Hirnarterie ist ein gemeinsames Modell für die Untersuchung einen ischämischen Schlaganfall bei Mäusen.

Modeling Stroke in Mice - Middle Zerebralarterie mit dem Filament-Modell

Hier präsentieren wir ein Protokoll permanent distalen mittleren Hirnarterie bei älteren weiblichen Ratten bei gleichzeitiger Verschluss der Halsschlagadern zu produzieren große kortikale Infarkte und anhaltende Defizite zu erzeugen. Wir zeigen die Bestätigung der Größe der Läsion mit strukturellen MRT bei 24 Stunden und 8 Wochen nach dem Schlaganfall.

Darstellende Permanent Distal cerebri mit Arteria carotis communis Occlusion bei alten Ratten zu studieren kortikale Ischämie mit anhaltenden Behinderungs

Um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu verstehen, ist es wichtig, zuverlässige Modelle zu verwenden. Dieses Papier wird eine der am häufigsten verwendeten Taktmodelle bei Mäusen beschreiben, die Arteria cerebri media Okklusion (MCAo) Modell genannt (auch bezeichnet als die intraluminale Faden oder Naht Modell) mit Reperfusion.

Chirurgische Ansatz für Arteria cerebri media Occlusion und Reperfusion fokaler zerebraler Ischämie bei Mäusen

Wir beschreiben ein Mausmodell für einen Schlaganfall, der durch den Verschluss der mittleren Hirnarterie mit einer silikonbeschichteten Naht induziert wird. Das Protokoll kann angewendet werden, um einen dauerhaften Verschluss oder eine vorübergehende Ischämie mit anschließender Reperfusion zu induzieren.

Die Induktion von ischämischem Schlaganfall und Ischämie-Reperfusion bei Mäusen die Mittel Artery Occlusion Technik und Visualisierung von Infarktbereich verwenden

Neonataler Schlaganfall ist eine signifikante Ursache für frühe Hirnverletzungen, die ein translationales Modell mit konsistenten fokalen Verletzungsmustern und hoher Reproduzierbarkeit erfordern, um eine Studie zu ermöglichen. Diese Studie beschreibt das detaillierte chirurgische Verfahren zur Schaffung einer nicht-hämorrhagischen, einseitigen fokalen Ischämie-Reperfusionsverletzung bei langzeitäquivalenten Nagetieren.

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Modell von Neugeborenen Stroke in P10 Ratten

Intraluminal Filament Okklusion der mittleren zerebralen Arterie ist das am häufigsten verwendete in Vivo Modell der experimentellen Schlaganfall bei Nagetieren. Ein alternativer chirurgischer Ansatz ermöglichen gemeinsame Halsschlagader Reparatur erfolgt hier, wodurch der Reperfusion der gemeinsame Halsschlagader und eine vollständige Reperfusion auf das mittlere zerebrale Arterie-Gebiet.

Mittlere zerebrale Arterie Okklusion so dass Reperfusion über gemeinsame Halsschlagader Reparatur bei Mäusen

Ein Maus-Modell der zerebralen Ischämie-Reperfusion wird gegründet, um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu untersuchen. Wir nach distal verbinden rechts mittlere zerebrale Arterie und rechts gemeinsame Halsschlagader und Blutfluss nach 10 oder 40 min der Ischämie wiederherstellen.

Zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-reperfusion

Dieses Protokoll demonstriert ein einzigartiges Mausschlagmodell mit einem mittelgroßen Infarkt und einer ausgezeichneten Überlebensrate. Dieses Modell ermöglicht es präklinischen Schlaganfallforschern, die Dauer der Ischämie zu verlängern, gealterte Mäuse zu verwenden und langfristige funktionelle Ergebnisse zu bewerten.

Ein modifiziertes transkranielles Modell für den Verschluss der mittleren Hirnarterie zur Untersuchung von Schlaganfallergebnissen bei gealterten Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt das Modell der transienten fokalen zerebralen Ischämie bei Mäusen durch intraluminalen Verschluss der mittleren Hirnarterie. Darüber hinaus werden Beispiele für die Ergebnisbewertung mit Hilfe von Magnetresonanztomographie und Verhaltenstests gezeigt.

Transienter mittlerer Hirnarterienverschluss Modell des Schlaganfalls

Das aktuelle Protokoll beschreibt ein Rattenmodell des Verschlusses/der Reperfusion der mittleren Hirnarterien, das die anatomische Struktur der Hirngefäße bewahrt, ohne Schäden zu verursachen.

Ein Rattenmodell für den Verschluss/die Reperfusion der mittleren Hirnarterie ohne Beschädigung der anatomischen Struktur der Hirngefäße

Dieses Protokoll stellt eine Schritt-für-Schritt-Anleitung für Forscher dar, um den Verschluss der mittleren Hirnarterie an Mäusen mit der modifizierten Longa-Methode der Arteria carotis externa durchzuführen. Die in diesem Artikel vorgestellten Modifikationen zielen darauf ab, die Genauigkeit des Verschlusses der mittleren Hirnarterie zu erhöhen und eine vollständige Reperfusion zu gewährleisten.

Optimierung der Methode des Verschlusses der Arteria cerebralis longa für eine vollständige Reperfusion

Erfahren Sie eine modifizierte Präparation für die Reperfusion nach Verschluss der mittleren Hirnarterie über die Arteria carotis communis. Diese Methode vereinfacht den komplexen Eingriff und erleichtert die Erforschung von Hirnischämie und neuroprotektiven Wirkstoffen.

Eine modifizierte Modellpräparation für die Reperfusion des Verschlusses der mittleren Hirnarterie

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