Etablierung eines Mausmodells für dünnes Endometrium

Dünnes Endometrium ist weithin als die kritische Ursache für Unfruchtbarkeit anerkannt. Studien zur Pathogenese des dünnen Endometriums stützen sich auf Tiermodelle, so dass die Auswahl eines geeigneten Modells entscheidend ist. Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll, das ein zuverlässiges und reproduzierbares dünnes Endometriummodell bei Mäusen erzeugt.

Die Operation ist traumatisch, da wir die Maus sezieren und das Gebärmutterhorn der Maus für die Manipulation freilegen müssen. Eine unsachgemäße Operation kann zu einer Infektion oder sogar zum Tod der Mäuse führen. In der Tat sind vor dem experimentellen Betrieb eine sorgfältige Schulung und Erfahrung erforderlich.

Wir haben erfolgreich ein Endometriummodell mit einer Infusionszeit von einer bis drei Minuten entwickelt, um die unterschiedlichen Grade dünner Endometriumsymptome zu replizieren, die in klinischen Fällen beobachtet werden. Dies ermöglicht es uns, Modelle mit unterschiedlichen Schadensgraden zu erstellen, je nach den spezifischen Anforderungen unserer Forschung. Die in unserem Protokoll verwendete Methode bietet den Vorteil der niedrigen Kosten, der Eignung sowie der Versuchszeit.

Es untersucht den pathologischen Mechanismus und die Behandlung in drei Anfangsphasen im Vergleich zu anderen Techniken. Positionieren Sie zunächst die betäubte Maus in Rückenlage auf dem vorgeheizten Operationstisch und befestigen Sie die Gliedmaßen der Maus mit medizinischem Klebeband. Machen Sie mit einer sterilen Schere und Pinzette einen einen Zentimeter großen Schnitt im Bauchraum, der sich etwa einen Zentimeter von der Harnröhrenöffnung entfernt befindet und sich bis zur Bauchhöhle erstreckt.

Schieben Sie die Eingeweide vorsichtig mit einer sterilen Pinzette zur Seite, um die Gebärmutter zu lokalisieren. Legen Sie das rechte Uterushorn frei und legen Sie hämostatische Klemmen am proximalen Ende in der Nähe des Gebärmutterhalses und am distalen Ende in der Nähe des Eierstocks an. Mit einer 25-Gauge-Spritze träufeln Sie etwa 50 Mikroliter 95%iges Ethanol in die Gebärmutterhöhle und halten Sie die Nadel parallel zum Gebärmutterhorn.

Halten Sie die Spritze je nach Bedarf ein bis fünf Minuten lang. Ziehen Sie dann das Ethanol aus der Gebärmutterhöhle ab und spülen Sie die Gebärmutterhöhle fünfmal mit steriler Kochsalzlösung, um das restliche Ethanol zu entfernen. Entfernen Sie nun die hämostatischen Klammern und bringen Sie die Gebärmutter und die Eingeweide wieder in ihre ursprüngliche Position.

Mit 5/0 resorbierbaren chirurgischen Nähten das Peritoneum vernähen, gefolgt von der Epidermis. Positionieren Sie zunächst ein euthanasiertes dünnes Endometrium-Mausmodell auf dem Seziertisch und schneiden Sie die Nähte mit einer chirurgischen Schere auf, um die Gebärmutter freizulegen. Ziehen Sie dann mit einer chirurgischen Zange vorsichtig die gesamte Gebärmutter heraus und lösen Sie die Gebärmutter von den umgebenden Eingeweiden.

Entfernen Sie sofort beide Gebärmutterhörner und teilen Sie jedes Horn in drei bis vier kleine Segmente. Legen Sie das Gebärmuttergewebe in einen Milliliter 4%-Paraformaldehyd, das in einem 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen entnommen wird. Geben Sie die formalinfixierten Proben in Gewebekassetten und übertragen Sie die Gewebekassetten durch eine Reihe von Ethanolkonzentrationen, gefolgt von Xylol und Paraffin.

Füllen Sie eine Wachsform mit geschmolzenem Paraffinwachs, das auf 55 Grad Celsius erhitzt wird. Verwenden Sie eine beheizte Pinzette, um die infiltrierten Gewebesegmente schnell aus der Einbettkassette in die Wachsform zu übertragen. Sobald die Gewebesegmente richtig positioniert sind, legen Sie den Boden der Einbettkassette auf die Histologieform.

Stellen Sie die Form anschließend für mindestens 20 Minuten direkt auf eine auf vier Grad Celsius eingestellte Kühlplatte, damit sich das Paraffin verfestigen kann. Nehmen Sie dann die Probe aus der Form und verwenden Sie einen Paraffintrimmer, um überschüssiges Wachs um sie herum zu entfernen. Die Dicke des Endometriums und die Anzahl der Endometriumdrüsen nahmen in der Ein-, Zwei- und Drei-Minuten-Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant ab.

In der Vier- und Fünf-Minuten-Gruppe wurden schwere Uterusadhäsionen und eine fast unsichtbare Gebärmutterhöhle beobachtet, und es wurden keine Endometriumdrüsen gefunden. Die Endometriumfibrose nahm mit der Dauer der Ethanolinfusion zu, was sich in einer übermäßigen Färbung in Ein- bis Fünf-Minuten-Gruppen im Vergleich zur Kontrolle zeigte.