Name: Etablierung eines Mausmodells für dünnes Endometrium (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T13:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 26 s
Description: Erfahren Sie die Etablierung eines reproduzierbaren Mausmodells für dünnes Endometrium durch Ethanolinjektion. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Infertilitätsmechanismen und endometrialen Pathologien.

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<meta charset="utf8"></head><body>Optimiertes dünnes Endometrium-Mausmodell mit geringer Mortalität und minimalen Adhäsionen

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<li>Gharibeh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-based+therapy+in+thin+endometrium+and+Asherman+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Cell-based therapy in thin endometrium and Asherman syndrome.</a> Stem Cell Res Ther. 13 (1), 33(2022).</li>
<li>Lei, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+microspheres+for+the+treatment+of+a+thin+endometrium%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomater+Sci+Eng%22%5BJournal%5D)">Angiogenic microspheres for the treatment of a thin endometrium.</a> ACS Biomater Sci Eng. 7 (10), 4914-4920 (2021).</li>
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<li>Xu, L., Fan, Y., Wang, J., Shi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysfunctional+intercellular+communication+and+metabolic+signaling+pathways+in+thin+endometrium%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dysfunctional intercellular communication and metabolic signaling pathways in thin endometrium.</a> Front Physiol. 13, 1050690(2022).</li>
<li>Hu, J., Song, K., Zhang, J., Zhang, Y., Tan, B. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+menstrual+blood-derived+stem+cells+on+endometrial+injury+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med+Rep%22%5BJournal%5D)">Effects of menstrual blood-derived stem cells on endometrial injury repair.</a> Mol Med Rep. 19 (2), 813-820 (2019).</li>
<li>Kim, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+production+of+murine+uterine+damage+model%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient production of murine uterine damage model.</a> Tissue Eng Regen Med. 16 (2), 119-129 (2019).</li>
<li>Chen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+to+repair+thin+endometrium+and+restore+fertility+based+on+menstruation-derived+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel method to repair thin endometrium and restore fertility based on menstruation-derived stem cell.</a> Reprod Sci. 31 (6), 1662-1673 (2024).</li>
<li>Hu, J., Yuan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+expression+of+C-kit+and+telomerase+in+a+rat+model+of+chronic+endometrial+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Monit%22%5BJournal%5D)">Decreased expression of C-kit and telomerase in a rat model of chronic endometrial ischemia.</a> Med Sci Monit. 17 (4), Br103-Br109 (2011).</li>
<li>Wang, G., Ren, C., Jiang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+on+repair+and+receptivity+of+damaged+endometrium+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Obstet+Gynaecol+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of bone marrow mesenchymal stem cells on repair and receptivity of damaged endometrium in rats.</a> J Obstet Gynaecol Res. 47 (9), 3223-3231 (2021).</li>
<li>Lin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironment-protected+exosome-hydrogel+for+facilitating+endometrial+regeneration%2C+fertility+restoration%2C+and+live+birth+of+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Microenvironment-protected exosome-hydrogel for facilitating endometrial regeneration, fertility restoration, and live birth of offspring.</a> Small. 17 (11), e2007235(2021).</li>
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<li>Haghighi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+lipid-based+drug+delivery+system+%28phytosolve%29+for+treatment+of+a+thin+endometrium+in+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Angiogenic lipid-based drug delivery system (phytosolve) for treatment of a thin endometrium in animal model.</a> Tissue Cell. 90, 102481(2024).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Anästhesiegerät</td><td>RWD Life Science</td><td>R530</td><td>Mobiles Inhalations-Anästhesiegerät für Kleintiere</td></tr><tr><td>0,9% Kochsalzlösung</td><td>Hubei Kelun Pharmaceutical&nbsp;</td><td>C230817A2</td><td>10 mL, medizinische Injektion</td></tr><tr><td>75 % Ethanol</td><td>LIRCON</td><td>6303060031</td><td>500 mL, Desinfektionsmittel Reagenz</td></tr><tr><td>95 % Ethanol</td><td>Guangzhou Chemical Reagent Factory</td><td>64-17-5</td><td>500 mL, chemisches Reagenz Resorbierbare</td></tr><tr><td>Nähte</td><td>Jinhuan Medical</td><td>CR537</td><td>Dicke: 5-0; Länge: 90 cm</td></tr><tr><td>Wässriges Ammoniak</td><td>MilliporeSigma</td><td>1336-21-6</td><td>1000 mL, chemisches Reagenz</td></tr><tr><td>Automatischer Gewebeprozessor</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td>100 Einbettboxen können gleichzeitig verarbeitet werden</td></tr><tr><td>C57BL/6 Mäuse&nbsp;</td><td>Zentrum für Versuchstiere der Southern Medical University&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eosin-Y</td><td></td><td>BASO BA4024</td><td>1000 mL, verwendet für die Färbung von Paraffinschnitten, Schnellschnitten, etc</td></tr>. <tr><td>Hämatoxylin</td><td>BASO</td><td>BA4041</td><td>1000 mL, verwendet für die Färbung von Paraffinschnitten, Schnellschnitten, etc</td></tr>. <tr><td>HALO Image Analysis Platform</td><td>Indica</td><td></td><td>Labs Das Gerät zeichnet sich durch Benutzerfreundlichkeit und Skalierbarkeit, leistungsstarke Analysefunktionen und die schnellste Verarbeitung aus speed</td></tr><tr><td>Hämostatische Klemmen</td><td>HUAYON</td><td>18-5021</td><td>1,8 cm Gesamtlänge mit 0,7 cm Backe</td></tr><tr><td>Hämostatische Pinzette</td><td>HUAYON</td><td>18-5020</td><td>10 cm Gesamtlänge</td></tr><tr><td>HistoCore Rotationsmikrotom</td><td>Leica</td><td>149BIO000C1</td><td>Scheibendickenbereiche von 1 bis 60 &mu; m</td></tr><tr><td>Indorphor</td><td>ADF</td><td>1005</td><td>500 mL, Desinfektionsmittel Reagenz</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>RWD Life Science</td><td>R510-22-10</td><td>100 mL, Wirkstoff 100% Isofluran</td></tr><tr><td>Massons Trichrom-Färbung</td><td>SOLARBIO</td><td>G1340</td><td>7 & mal 100 mL für 100</td></tr><tr><td>Tests Objektträger</td><td>Gene Tech</td><td>GT100511</td><td>Länge: 75 cm; Breite: 25 cm</td></tr><tr><td>Modulares Gewebeeinbettungszentrum</td><td>Leica</td><td>EG1150 C</td><td>Das Gerät enthält einen Kalttisch und ein beheiztes Paraffinverteilungsmodul, das Flexibilität für die Einbettungsarbeiten bietet</td></tr><tr><td>Naturharz</td><td>SAKURA</td><td>4770</td><td>Harzbeschichtete Folie, geeignet für histologische Färbungen</td></tr><tr><td>Olympus SLIDEVIEW VS200</td><td>PANOVUE</td><td>VS200</td><td>Das Gerät erfasst hochwertige virtuelle Objektträgerbilder und ermöglicht eine fortschrittliche quantitative Bildanalyse&nbsp;</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd-Fixierlösung</td><td>Servicebio</td><td>G1011</td><td>500 mL, universelles Gewebefixiermittel (neutral)</td></tr><tr><td>Chirurgische Zange</td><td>HUAYON</td><td>18-1300</td><td>2,2 mm gerade, 12,5 cm breit</td></tr><tr><td>Chirurgische Schere</td><td>HUAYON</td><td>18-0110</td><td>10 cm, chirurgische Schere aus Edelstahl Spritze</td></tr><tr><td></td><td>freundlich</td><td>60017031</td><td>1 mL, sterile Einwegspritze mit Nadel</td></tr><tr><td>Gewebe Kassetten</td><td>CITOTEST</td><td>80106-1100-16</td><td>Weiß; Durchlaufschlitze; 0ne-Stück integrierter Deckel; Beschriftungsbereiche sind an drei Seiten angeordnet</td></tr><tr><td>Tissue-Tek Prisma Plus</td><td>SAKURA</td><td>DRS-Prisma-P-JCS</td><td>Die Verarbeitungskapazität beträgt 60 Objektträger auf einmal</td></tr><tr><td>Xylol</td><td>Guangdong Guanghua Sci-Tech</td><td>1330-20-7</td><td>1000 mL, organisches Lösungsmittel</td></tr></tbody></table>

etablierung eines mausmodells für dünnes endometrium

Establishing a Mouse Model of Thin Endometrium

Die Hauptmerkmale des dünnen Endometriums (TE) sind eine verringerte Endometriumdicke und Drüsendichte sowie eine erhöhte Endometriumfibrose. Mit dieser Methode konnten diese Eigenschaften in den Modellmäusen erfolgreich repliziert werden. Die Datenanalyse zeigte eine signifikante Abnahme der Endometriumdicke in der 1-Minuten-Gruppe (222,3 μm ± 13,96 μm vs. 359,2 μm ± 12,41 μm, P &lt; 0,05), der 2-Minuten-Gruppe (168,7 μm ± 17,57 μm vs. 359,2 μm ± 12,41 μm, P &lt; 0,05) und der 3-Minuten-Gruppe (131,8 μm ± 3 μm vs. 359,2 μm ± 12,41 μm, P &lt; 0,05) im Vergleich zur Kontrollgruppe. Es wurde jedoch kein signifikanter Unterschied in der Endometriumdicke zwischen der 2-Minuten- und der 3-Minuten-Gruppe beobachtet (168,7 μm ± 17,57 μm vs. 131,8 μm ± 3 μm, P &gt; 0,05) (Abbildung 3A,B).
Die Anzahl der Endometriumdrüsen war in der 1-Minuten-Gruppe (4,4 ± 2,38 vs. 24,4 ± 1,6, P &lt; 0,05), der 2-Minuten-Gruppe (0,8 ± 0,49 vs. 24,4 ± 1,6, P &lt; 0,05) und der 3-Minuten-Gruppe (4,4 ± 3,20 vs. 24,4 ± 1,6, P &lt; 0,05) signifikant reduziert (Abbildung 3A, C). Es wurde jedoch kein signifikanter Unterschied in der Anzahl der Endometriumdrüsen zwischen den 1-Minuten-, 2-Minuten- und 3-Minuten-Gruppen beobachtet.
Da die TE nach einer 7-tägigen Behandlung mit 95 % Ethanol auftrat, wurde die Hypothese aufgestellt, dass die Endometriumdicke mit der Infusionsdauer zusammenhängen könnte. Um dies zu untersuchen, wurden zwei weitere Gruppen für 4 min bzw. 5 min mit 95% Ethanol behandelt. Interessanterweise zeigten die Ergebnisse eine starke Uterusadhäsion, wenn sich die Infusionszeit verlängerte. (Abbildung 4), wobei die Gebärmutterhöhle fast unsichtbar wird. Darüber hinaus wurden bei der verlängerten Infusionszeit keine Endometriumdrüsen in der Gebärmutter der Maus beobachtet (Abbildung 4).
Darüber hinaus stieg das Ausmaß der Endometriumfibrose mit der Dauer der 95%igen Ethanolinfusion an, was durch die Masson-Färbung bestätigt wurde, was auf eine übermäßige Fibrose im geschädigten Endometrium hinweist (Abbildung 5A,B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67084/67084fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Flussdiagramm der Etablierung des TE-Mausmodells. Das gesamte Prozedere umfasst folgende Schritte: Zunächst durften sich die Mäuse vor dem Experiment 1 Woche lang akklimatisieren. Als nächstes wurden zwei Östruszyklen überwacht. Mäuse in der dritten Brunst wurden dann für die Modelletablierung ausgewählt, indem 95%iges Ethanol in die Gebärmutterhöhle injiziert wurde. Sieben Tage nach der Ethanol-Injektion wurden die Mäuse getötet und die Gebärmutterhörner für weitere HE-Färbungen und Masson-Färbeanalysen entnommen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67084/67084fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67084/67084fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Identifizierung der Brunst bei Mäusen. (A) Die Brunst ist durch das Überwiegen kernhaltiger Epithelzellen gekennzeichnet (Pfeil). (B) Die Brunst ist gekennzeichnet durch das Überwiegen von kernhaltigen keratinisierten Epithelzellen (Sternchen). (C) Metestrus ist gekennzeichnet durch eine Kombination aus anukleierten keratinisierten Epithelzellen und Neutrophilen (Dreieck). (D) Diestrus ist gekennzeichnet durch eine Kombination von Neutrophilen, kernhaltigen Epithelzellen und einer geringen Anzahl von kernhaltigen keratinisierten Zellen. Objektivvergrößerung um das 20-fache. Maßstabsleisten = 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67084/67084fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67084/67084fig3v2.jpg"> 
Abbildung 3: Verfahren zur TE-Induktion durch 95%ige Ethanolinfusion. (A) Mäuse werden mit einem Anästhesiegerät anästhesiert. (B) Bauchhaare werden entfernt. (C) Ein 1 cm langer Schnitt wird 1 cm von der Harnröhrenöffnung entfernt vorgenommen. (D) Die Gebärmutter befindet sich und eine Seite des Gebärmutterhorns liegt frei. (E) Hämostatische Klemmen werden auf beiden Seiten des Gebärmutterhorns angebracht. (F) 95%iges Ethanol wird in das Gebärmutterhorn geträufelt und dann mit steriler Kochsalzlösung gespült. (G) Die Klammern werden entfernt und die Gebärmutter wird wieder eingesetzt. (H) Der Schnitt wird vernäht. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67084/67084fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67084/67084fig04.jpg"> 
Abbildung 4: Beobachtung der Endometriummorphologie bei Mäusen mittels HE-Färbung unter Mikroskopie. (A) Die Morphologie des Endometriums auf der Verletzten- und Kontrollseite wurde untersucht. Die rechte Gebärmutter wurde mit 95%igem Ethanol injiziert, während die linke Gebärmutter als Kontrolle mit steriler Kochsalzlösung injiziert wurde. Maßstabsbalken = 200 μm. (B) Vergleich der Endometriumdicke zwischen den Gruppen Con, 1 min, 2 min und 3 min. (C) Vergleich der Anzahl der Drüsen im Endometrium in den Gruppen Con, 1 min, 2 min, 3 min, 4 min und 5 min. Contra, Kontrolle; **P &lt; 0,01, ****P &lt; 0,0001 mit einfacher ANOVA. Die Daten werden als Mittelwert ± Standardfehler des Mittelwerts dargestellt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67084/67084fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67084/67084fig05.jpg"> 
Abbildung 5: Endometriumfibrose im Endometrium der Maus. (A) Die Masson-Trichrom-Färbung wurde zur Beurteilung der Endometriumfibrose verwendet, bei der die blaue Farbe die Verteilung der Kollagenfasern in den angegebenen Behandlungsgruppen anzeigt. Maßstabsbalken = 200 μm. (B) Ein zusammenfassendes Balkendiagramm zeigt den Grad der Kollagenfibrose in verschiedenen Gruppen. **P &lt; 0,01, ***P &lt; 0,001, ****P &lt; 0,0001 mit einfacher ANOVA. Die Daten werden als Mittelwert ± Standardfehler des Mittelwerts dargestellt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67084/67084fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Etablierung eines Mausmodells für dünnes Endometrium

Thin endometrium (TE) has been widely recognized as a critical cause of infertility. However, the pathogenesis of TE remains unclear, and satisfactory ...

establishing-a-mouse-model-of-thin-endometrium

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Eine Beschreibung der chirurgischen Induktion von Endometriose bei Mäusen und Ratten durch auto-Transplantation von Gebärmutter-Gewebe auf die arterielle Kaskade der Darm Mesenterium.

Maus-Modell der chirurgisch-induzierten Endometriose durch Auto-Transplantation von Gebärmutter-Gewebe

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll für live-Aufnahmen von Eindringmittel beschriftete menschliche endometrialen Fragmente bei Mäusen verpflanzt. Die Methode ermöglicht das untersuchen die Auswirkungen der Medikamente der Wahl auf die Größe der nichtmalignem Läsion durch Überwachung und Quantifizierung der Fluoreszenz emittiert von fluoreszierenden Reporter in...

Nicht-invasive Überwachung der Größe der Läsion in einer heterologen Mausmodell der Endometriose

Viele Nagetiermodelle der Endometriose sind durch technische Komplexität, Reproduzierbarkeit und/oder den Bedarf an immungeschwächten Tieren oder speziellen Reportermäusen begrenzt. Wir präsentieren ein vereinfachtes System der Läsionsinduktion mit jeder experimentellen Maus mit einem unabhängig überprüfbaren, objektiven Scoring-System und ohne Notwendigkeit für Ovariektomie oder Überlebensoperation.

Ein syngenes Murinmodell der Endometriose mit natürlich radfahrenden Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Etablierung von Endometrium-Epithel-Organoiden der Maus für die Genexpression und histologische Analysen.

Etablierung von 3D-Endometrium-Organoiden aus der Gebärmutter der Maus

In dieser Studie wird ein neuartiges Mausmodell vorgestellt, das speziell zur Simulation von Endometriomen, einem klinisch signifikanten Subtyp der Endometriose, entwickelt wurde. Durch die Verwendung von C57BL/6J-Mäusen zielt das Modell darauf ab, die pathophysiologischen Mechanismen aufzuklären, die der endometriombedingten Unfruchtbarkeit zugrunde liegen, und bietet ein verfeinertes Werkzeug, um die derzeitige Wissenslücke in der Reproduktionsmedizin zu schließen.

Etablierung eines experimentellen Mausmodells des Endometrioms zur Untersuchung der damit verbundenen Unfruchtbarkeit

Dieses Video demonstriert die Herstellung von ultra-dünnen Matrix / Analyt-Schicht für die Analyse von Peptiden und Proteinen durch Matrix-Assisted Laser Desorption Ionisation-Massenspektrometrie (MALDI-MS).

MALDI-Probenvorbereitung: Die Ultra Thin-Layer-Methode

Das vorliegende Verfahren ermöglicht reproduzierbare Kryostat Schnitte von kleinen, schwer zu verwalten, Gewebeteile, wie Biopsien und Hirnschnitten. Wir verwenden ein einfaches Aluminium Einfrieren der Bühne um die Behandlung von Gewebe-und ein Standard-Kryostat routinemäßig produzieren 5-10 Mikrometer Serienschnitte von 400 Mikrometer dicken Hirnschnitten zu erleichtern.

Dünnschnitt der Scheibe Vorbereitungen für die Immunhistochemie

Intravitreale Injektion ist eine weit verbreitete Technik in Visual Sciences Forschung für Augenerkrankungen oder als direkte Anwendung der lokalen Behandlung. Dieses Video demonstriert ein Protokoll für die intravitreale Injektion mit einer 1 ml Spritze mit Glaspipette. Nützliche Tipps zum Vermeiden von massiven Blutungen und Linse beschädigen gegeben sind.

Intravitrealen Injektion zur Einrichtung Ocular Krankheiten Modell

Orthotopen Tiermodellen von Eierstockkrebs zu replizieren besser menschlicher Erkrankungen und damit zu unserem Verständnis der Tumorprogression und Ansprechen des Tumors auf die Therapie. Ein Maus-Modell erhält eine intrabursalen Injektion von Luciferase-exprimierenden Eierstock-Tumorzellen. Die Behandlung erfolgt über eine orale Sonde verabreicht. Das Tumorwachstum wird durch...

In-vivo-Imaging und therapeutische Behandlungen in einem orthotopen Mausmodell des Eierstockkrebs

Erzeugung induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS) Linien produziert Linien unterschiedlicher Entwicklungspotenzial, auch wenn sie Standard-Tests für Pluripotenz passieren. Hier beschreiben wir ein Protokoll, um Mäuse vollständig aus iPS, die die iPSC Linien definiert als die über volle Pluripotenz abgeleitet...

Generation der Mäuse aus induzierten pluripotenten Stammzellen

Erfahren Sie die Etablierung eines reproduzierbaren Mausmodells für dünnes Endometrium durch Ethanolinjektion. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Infertilitätsmechanismen und endometrialen Pathologien.

Etablierung eines Mausmodells für dünnes Endometrium

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