Betriebs- und Biocontainment-Verfahren einer Anlage für Labormäuse mit natürlichem Mikrobiom: Immunphänotypisierungsverfahren

Wir untersuchen die Auswirkungen der Ernährung auf das Immunsystem. Und wir interessieren uns besonders für die Anti-Aging- und entzündungshemmenden Wirkungen von Kalorienrestriktion und Fastenkuren und die Rolle der Mikrobiota in diesen Prozessen. Wildling-Mäuse vereinen den gut charakterisierten genetischen Hintergrund von Labormausstämmen und das natürliche Mikrobiom freilebender Mäuse.

Das natürliche Mikrobiom dieser wilden Mäuse enthält jedoch Viren, Bakterien, aber auch Parasiten und stellt daher eine Herausforderung für die Tierhaltung dar. Der Beitrag des QUEST Center for Responsible Research war die Entwicklung des Sechs-R-Frameworks, das die drei R, die wir von Russell und Burch kennen, nämlich Replacement, Refinement und Reduction, durch die Einbeziehung von drei zusätzlichen Rs verbessert: Robustheit, Registrierung und Berichterstattung. Dieser Rahmen zielt darauf ab, die Reproduzierbarkeit und Transparenz der präklinischen Forschung zu verbessern.

Und die Idee ist, dass experimentelle Ergebnisse zuverlässiger und vertrauenswürdiger sind und letztendlich auf klinische Kontexte übertragbar sind. In den letzten vier Jahren haben wir das Konzept einer Anlage für Wildlingsmäuse mit unterschiedlichen Biocontainment-Verfahren entwickelt. Wir möchten unsere Expertise mit Forschern teilen, damit sie Mäuse mit einem natürlichen Mikrobiom in ihre Arbeit einbeziehen können.

Schlaganfälle treten am häufigsten bei alternden Menschen auf. Das Immunsystem verfügt über Gedächtniszellen aus der Bekämpfung infektiöser Partikel und dem Leben mit heterogenen Mikrobiota. Daher ist die Modellierung des Schlaganfalls bei Wildling-Mäusen ein verfeinertes Modell bei Nagetieren, das den Zustand der Patienten besser widerspiegelt.

Nach dem Anziehen von Bereichshosen, Kosaken und Einweg-Schuhüberziehern Schuhe und Socken im Vorraum der Luftdusche ausziehen. Ziehen Sie Socken und persönliche Ganzkörperschutzausrüstung an, darunter Tyvek-Overalls, Haarnetz, Baumwollhandschuhe, Nitrilhandschuhe und Gesichtsmasken. Betreten Sie die Socken für den Luftbrause-Tragebereich über den selbstklebenden Bodenbelag.

Heben Sie beim Luftduschen Ihre Arme und führen Sie eine 360-Grad-Drehung aus. Verlassen Sie die Luftdusche und ziehen Sie auf der anderen Seite Bereichsschuhe an. Bringen Sie die Maus aus ihrem Raum in einem geschlossenen, individuell belüfteten Käfig in den Eingriffsraum.

Positionieren Sie die betäubte Maus bäuchlings auf dem desinfizierten Tisch und greifen Sie an den Nacken, um die Halsvenen zusammenzudrücken. Befestigen Sie den Kopf der Maus mit einer Hand mit Daumen und Zeigefinger. Führen Sie eine frische Kapillare in einem 45-Grad-Winkel in den medialen Canthus des Auges unter der Nickhaut ein.

Drehen Sie die Kapillare axial durch die Sinusmembran im hinteren Teil der Augenhöhle, bis das Blut zu fließen beginnt. Entnehmen Sie mindestens 15 Mikroliter Blut in einem Blutentnahmeröhrchen, das einen Tropfen EDTA enthält. Lockern Sie den Griff am Nacken, bevor Sie die Kapillare entfernen, um Blutungen in das Gewebe zu minimieren.

Verwenden Sie ein sauberes Mullpad oder einen Tupfer, um die Blutung zu stoppen und die Blutstillung sicherzustellen. Schwenken Sie das Röhrchen leicht, um Blut und EDTA zu mischen, ohne es zu schütteln, und lagern Sie die Blutprobe auf Eis. Wechseln Sie nach Beendigung der Blutentnahme die Handschuhe und desinfizieren Sie alle Materialien und Oberflächen.

Ziehen Sie neue Schutzkleidung in der Access Laminar Air Flow (LAF) an, die sich vor der LAF-Kabine befindet. Desinfizieren Sie die Probenbehälter und entnehmen Sie sie über die Schiebetür in der Glaswand der LAF-Kabine. Desinfizieren Sie nach der Übergabe der Probenbehälter an die zweite Person alle Oberflächen.

Erhalten Sie desinfizierte Probenbehälter aus dem Wildlingsbereich ohne direkten Kontakt durch die Schiebetür in der Glaswand der LAF-Kabine. Lassen Sie dann den Einweg-Overall und die Schuhe im dafür vorgesehenen Bereich. Entsorgen Sie das Haarnetz, die Gummihandschuhe und die Gesichtsmaske.

Betreten Sie die Luftdusche sofort in den Bereichssocken. Heben Sie Ihre Arme und führen Sie eine 360-Grad-Drehung aus, während Sie an der Luft duschen. Lassen Sie die Luftdusche und legen Sie die Socken in den Wäscheauffangbehälter.

Ziehen Sie persönliche Socken, Schuhe und Einweg-Überschuhe an. Deponieren Sie die Kleidung im Bereich der Umkleidekabine, des Wäschesammlers und wechseln Sie in normale Kleidung.