Name: Methoden zum Nachweis von Husten und Atemwegsentzündungen bei Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-02T14:55:00.000+00:00
Duration: 4 min 33 s
Description: Lernen Sie standardisierte Methoden zur Hustendetektion und Gewebegewinnung bei Mäusen mittels nichtinvasiver Ganzkörper-Plethysmographie. Diese Technik ermöglicht die Untersuchung von Atemwegsentzündungen und chronischem Husten.

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Diese Arbeit wurde durch das Guangzhou Science and Technology Planning Project (202002030151), das Großprojekt des Guangzhou National Laboratory (GZNL2024A02001) und den Zuschuss des State Key Laboratory of Respiratory Disease (SKLRD-Z-202202) unterstützt.

Alle Verfahren wurden vom Animal Care and Use Committee der Guangzhou Medical University (20240248) genehmigt und in strikter Übereinstimmung mit den genehmigten Richtlinien durchgeführt. In dieser Studie wurden männliche spezifische, pathogenfreie C57BL/6-Mäuse mit einem Gewicht von 20-25 g verwendet. Alle Mäuse wurden unter kontrollierter Temperatur (22 ± 2 °C), Luftfeuchtigkeit (50 % ± 20 %) und Beleuchtung (6:30 bis 18:30 Uhr) in festen Bodenkäfigen untergebracht, in denen Futter und Wasser ad libitum zur Verfügung standen. Die Zeitachse des Protokolls ist in Abbildung 1 dargestellt.
1. Etablierung eines Mausmodells für Husten
<ol><li>Verwenden Sie das Influenzavirus A/California/7/2009 (H1N1). Bestimmen Sie die letale Dosis des H1N1-Virus bei Mäusen.<ol><li>Kurz gesagt, betäuben Sie Mäuse (n = 10 pro Gruppe) mit Pentobarbital-Natrium (80 mg·kg-1) und infizieren Sie dann intranasal mit einem 10-fach seriell verdünnten Virus.</li>
		<li>Überwachen Sie den Tod über einen Zeitraum von 15 Tagen. Berechnen Sie die mediane letale Dosis (LD50) nach der Reed-Muench-Methode26.</li>
	</ol></li>
	<li>Infizieren Sie die Maus mit dem H1N1-Virus.<ol><li>Löse 0,8 xLD 50 des H1N1-Virus in 50 μl phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS).</li>
		<li>Betäuben Sie die Mäuse mit Pentobarbital-Natrium (80 mg·kg-1).</li>
		<li>Wenn die Mäuse tief betäubt waren, legen Sie die Maus in Rückenlage mit den Nasenlöchern nach oben.</li>
		<li>5-10 μl H1N1-Viruslösung oder PBS-Lösung (als Kontrolle) intranasal in ein Nasenloch von Mäusen mit einer Pipette träufeln (Abbildung 2A).</li>
		<li>Halten Sie dann den Mund der Maus mit dem Daumen geschlossen, damit die Nase stark einatmet, so dass die H1N1-Viruslösung in der Nasenhöhle vollständig in die Lunge eingeatmet wird (Abbildung 2B).</li>
		<li>Wiederholen Sie die Schritte 1.2.4 und 1.2.5 in der anderen Nasenhöhle der Mäuse.</li>
		<li>Wenn alle in Schritt 1.2.1 hergestellten H1N1-Viren intranasal in die Lunge der Maus instilliert werden, legen Sie sie zur Ruhe in Rückenlage (Abbildung 2C).</li>
	</ol></li>
	<li>Messen Sie die Hustenempfindlichkeit der Maus nach der Modelletablierung mit dem Buxco Kleintier-Ganzkörperplethysmographie-System. Am Tag 21 wird die Maus intraperitoneal mit Pentobarbital-Natrium (150 mg·kg-1) anästhesiert. Sammeln und verarbeiten Sie Blut-, Milz-, BALF-, Lungen- und Luftröhrengewebe (Abbildung 1).</li>
</ol>2. Die Messung der Hustenempfindlichkeit
<ol><li>Zitronensäure (0,4 M) vorbereiten: Geben Sie 0,1537 mg Zitronensäure in ein 5-ml-Zentrifugenröhrchen und fügen Sie normale Kochsalzlösung bis zu einem Volumen von 2 ml hinzu.</li>
	<li>Inspektion von Instrumenten<ol><li>Überprüfen Sie die Kanäle: Schließen Sie die Ganzkörper-Plethysmographenkammern gemäß den Anweisungen des Herstellers an und klicken Sie auf die Kalibrierungstaste – die Kalibrierungstaste wechselt von orange auf grün, um anzuzeigen, dass die Kalibrierung erfolgreich war (Abbildung 3A).</li>
		<li>Kalibrieren Sie den Vernebler:<ol><li>Nachdem Sie den Vernebler angeschlossen haben, geben Sie 500 μl normale Kochsalzlösung in den Vernebler und klicken Sie auf die Schaltfläche Vernebelung.</li>
			<li>Wenn die Flüssigkeit im Vernebler vollständig vernebelt ist, klicken Sie erneut auf die Vernebelungstaste, um die Leistung des Verneblers zu sehen, die in der Regel etwa 0,3 ml/min beträgt. Klicken Sie erneut auf die Schaltfläche Vernebelung, um die aktuell vernebelte Leistung zu übernehmen.</li>
		</ol></li>
		<li>Stellen Sie nach der Überprüfung der Kanäle sicher, dass der Fehlerwert kleiner als 0,5 % ist.</li>
	</ol></li>
	<li>Parameter einstellen<ol><li>Klicken Sie auf Neue Studie erstellen, wählen Sie die Option Husten aus, wählen Sie Maus in Spezies aus und klicken Sie auf Weiter.</li>
		<li>Wählen Sie die CCnt-Parameter : Stellen Sie die Dauer der Eingewöhnungszeit auf 1 min, die Reaktionszeit auf 10 min, das Aerosolvolumen auf 1 mL und die Verabreichungsdauer auf 10 min ein.</li>
		<li>Platzieren Sie die bewusste, ungebundene Maus in einzelnen transparenten Ganzkörper-Plethysmographenkammern aus Kunststoff. Geben Sie das Gewicht und die Betreff-ID der Maus ein und klicken Sie auf Weiter.</li>
		<li>Geben Sie 1 ml Zitronensäurelösung (0,4 M) in den Vernebler und beobachten Sie Echtzeitänderungen des CCnt (Abbildung 3B).</li>
		<li>Nachdem die Zitronensäure vollständig aufgebraucht ist, klicken Sie auf Datei und Sitzung beenden , um das Experiment abzuschließen.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Entnahme von Blut-, Milz-, BALF-, Lungen- und Luftröhrengewebe von Mäusen (Abbildung 4)
<ol><li>Sammle Blut.<ol><li>Nach der Hustenerkennung wird die Maus durch intraperitoneale Injektion mit Pentobarbital-Natrium (150 mg·kg-1) betäubt. Sammeln Sie Blut aus den Augenhöhlen der tief betäubten Maus. Mischen Sie 1 ml Blut mit 0,1 ml Antikoagulanzienpuffer (9,9 mg/ml Heparinnatrium, gelöst in PBS) bei 4 °C (Abbildung 4A).</li>
		<li>Schütteln Sie das Blutentnahmeröhrchen, um das Blut und das Antikoagulans vollständig zu vermischen, um eine Blutgerinnung zu verhindern.</li>
		<li>Das entnommene Blut bei 800 x g für 5 min bei 4 °C zentrifugieren. Sammeln Sie den Überstand, lagern Sie ihn bei -80 °C (zur Messung von Zytokinen) und resuspendieren Sie das Pellet in 1 mL D-Hank-Lösung. Verteilen Sie 10 μl der Blutkörperchensuspension auf dem Objektträger, um Zellprofile zu bestimmen.</li>
	</ol></li>
	<li>Ernte die Milz.<ol><li>Öffnen Sie den Brustkorb der Maus, sammeln Sie das Blut und entbluten Sie über die Arterie (Abbildung 4B).</li>
		<li>Entfernen Sie die linke Ohrmuschel und perfundieren Sie dann den pulmonalen und systemischen Kreislauf mit 5 ml normaler Kochsalzlösung (Abbildung 4C, D). Entfernen Sie die gesamte Milz von der Maus mit einer chirurgischen Zange (Abbildung 4E).</li>
		<li>Nachdem du das Gewicht der Milz gemessen hast, schneide sie in zwei Hälften. Fixieren Sie die erste Hälfte mit 4 % Paraformaldehyd bei Raumtemperatur (RT) für die histopathologische Analyse. Lagern Sie die zweite Hälfte bei -80 °C für die Zytokinmessung.</li>
	</ol></li>
	<li>Bronchoalveoläre Lavage<ol><li>Stellen Sie das bronchoalveoläre Spülröhrchen mit einer Pasteurpipette her. Erhitzen Sie die Pasteur-Pipette mit einer Alkohollampe. Wenn es weich wird, verlängern Sie es, um eine dünne Röhre zu bilden. Die Länge der bronchoalveolären Lavageröhre beträgt 5 cm. Der obere Durchmesser beträgt 5 mm und der untere Durchmesser 1 mm (Abbildung 5).</li>
		<li>Für die BALF-Entnahme trennen Sie die rechte Lunge, indem Sie am rechten Hauptstammbronchus ligieren. Sammeln Sie das BALF aus der linken Lunge, indem Sie dreimal mit 0,5 ml PBS auf Eis vorgekühlt lavieren. Die Wiederfindungsrate von BALF liegt bei mehr als 80 % (Abbildung 4F).</li>
		<li>Das gesammelte BALF bei 800 x g für 5 min bei 4 °C zentrifugieren. Sammeln Sie den Überstand und messen Sie die Gesamtproteinkonzentration, die Harnsäurekonzentration, die LDH-Aktivität und die Zytokinkonzentrationen. HINWEIS: Die Entzündungsmarker, einschließlich der Gesamtproteinkonzentration, der Harnsäurekonzentration und der LDH-Aktivität im BALF-Überstand, werden mit dem Assay-Kit gemäß den Herstellerrichtlinien24 nachgewiesen.</li>
		<li>Resuspendieren Sie das Pellet in 200 μl PBS und zählen Sie die Leukozyten in BALF mit Hilfe eines Zählobjektträgers.</li>
		<li>Um Zellprofile durch Differenzialzählungen zu bestimmen, schmieren Sie 50 μl der Zellsuspension auf die Objektträger und lassen Sie sie trocknen.</li>
		<li>Fixieren Sie den Objektträger über Nacht mit 4% Paraformaldehyd und färben Sie ihn dann mit dem Hämatoxylin-Eosin (HE). Klassifizieren Sie mindestens 400 Zellen in Neutrophile, Makrophagen, Lymphozyten oder Eosinophile pro Objektträger.</li>
	</ol></li>
	<li>Entnahme von Lungen- und Luftröhrengewebe für die histopathologische Analyse<ol><li>Nach der BALF-Entnahme die Hälfte der rechten Lunge (Abbildung 4G) und der Luftröhre (Abbildung 4H) mit 4 % Paraformaldehyd bei RT für die histopathologische Analyse entfernen und fixieren. Die andere Hälfte bei -80 °C für Western Blotting, quantitative Polymerase-Kettenreaktion (qPCR) und Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) lagern.</li>
	</ol></li>
</ol>

Nichtinvasive Echtzeit-Ganzkörperplethysmographie bei Hustenempfindlichkeit bei Mäusen

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Einige chronisch refraktäre und postinfektiöse Husten sind häufige Erkrankungen, die mit einer Infektion mit Atemwegsviren verbunden sind27. Um die Hustenempfindlichkeit und die Entzündung der Atemwege besser beurteilen zu können, wurde in dieser Studie ein Mausmodell für Husten mit dem H1N1-Virus erstellt. Geeignete Maushustenmodelle sollten für andere Studien entsprechend dem Zweck der Studie ausgewählt werden. Die meisten früheren Studien verwendeten das Meerschweinchen als Tiermodell in mechanistischen Studien oder neuen Medikamentenstudien für Husten 28,29,30. Neuere Studien deuten darauf hin, dass Mäuse zur Beurteilung der Hustenpathophysiologie verwendet werden könnten, da sie einen kürzeren Fortpflanzungszyklus, mehr Reagenzien und die Bereitschaft für genetische Manipulationen aufweisen, obwohl ihr Hustenverhalten noch umstritten ist16,31. Die Zitronensäure wurde in dieser Studie als Tussivmittel verwendet, um Husten auszulösen. Die durch Zitronensäure induzierten Mechanismen des Hustenreflexes könnten mit der Aktivierung von jugularen C-Fasern und nodosen Aδ-Fasern zusammenhängen32. Außerdem misst das WBP-System die Veränderungen des Hustenreflexes bei Mäusen auf nicht-invasive Weise und minimiert die Auswirkungen von psychischem Stress. Die Auswirkungen der äußeren Umgebung auf Mäuse sollten minimiert werden, wenn eine Hustenempfindlichkeit festgestellt wird. Die Maus sollte in den Testraum gestellt und dann mit einer Plastiktüte abgedeckt werden, um die durch die äußere Umgebung verursachte Reizung zu reduzieren.
Diese Studie beschreibt die normativen Verfahren zur Entnahme von Blut-, Milz-, BALF-, Lungen- und Luftröhrengewebe von Mäusen und führt einige Messungen zur Beurteilung von Atemwegsentzündungen ein. Um eine Entzündung der Atemwege zu erkennen, werden die Lungen- und Luftröhrenabschnitte mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt, um die allgemeine Histopathologiezu beurteilen 24. Die erhöhte Konzentration von Gesamtprotein und Harnsäure im Überstand von BALF ist mit Entzündungen und Zellschädigungen in den Atemwegen assoziiert33. Die LDH-Aktivität im Überstand von BALF spiegelt Zellschäden und Nekrosewider 34. Die Leukozyten in BALF und Blut können den Grad der Entzündung der Krankheit widerspiegeln35. Differentialzellzahlen von BALF werden häufig zur Beurteilung von Atemwegsentzündungen bei chronischen Atemwegserkrankungen verwendet und liefern wichtige Informationen für die Untersuchung der Pathogenese, die Diagnosestellung und Behandlungsstrategien für chronische Atemwegserkrankungen36.
Die Einschränkung dieses Experiments besteht darin, dass die Entnahme einer großen Anzahl von Gewebeproben dazu führt, dass Mäuse über einen langen Zeitraum operiert werden, was die Aktivität der Gewebeproben beeinträchtigen kann. Daher müssen Gewebeproben von Mäusen sofort nach der Entnahme auf Eis gelegt werden. Darüber hinaus ist die in dieser Studie verwendete bronchoalveoläre Lavageröhre für Mäuse, aber nicht für größere Tiere geeignet.
Zusammenfassend geben wir eine detaillierte Beschreibung der Nachweismethoden von Husten und Atemwegsentzündungen bei Mäusen. Diese Methoden geben den Forschern Werkzeuge an die Hand, um die komplexe Pathophysiologie des Hustens zu untersuchen.

Husten ist ein wichtiges Abwehrverhalten, um die Durchgängigkeit der Atemwege aufrechtzuerhalten und die Lunge vor potenziell schädlichen Substanzen zu schützen. Wenn Husten jedoch dysreguliert ist, wird er zu einem pathologischen Zustand1. Chronischer Husten, der in der Regel acht oder mehr Wochen andauert, ist eines der häufigsten Symptome, die ärztliche Hilfe erfordern2. Da chronischer Husten häufig über Jahre anhält, leiden die Patienten unter einer enormen sozioökonomischen Belastung und einer deutlichen Verschlechterung der Lebensqualität 3,4,5. Chronischer Husten wird weithin als Hustenüberempfindlichkeitssyndrom angesehen und ist durch lästigen Husten gekennzeichnet, der oft durch geringe thermische, mechanische oder chemische Exposition ausgelöst wird6. Das Auftreten einer Hustenüberempfindlichkeit steht in engem Zusammenhang mit einer Entzündung der Atemwege7. Die pathophysiologischen Mechanismen, die der Modulation der Hustenempfindlichkeit zugrunde liegen, müssen jedoch weiter aufgeklärt werden.
Tiermodelle können die komplexe Pathophysiologie des Hustens nachahmen und sind wichtige Werkzeuge für die Hustenforschung 8,9. Frühere Studien haben ergeben, dass eine Virusinfektion, intrapulmonale Interferon-γ (IFN-γ)-Instillation, die Perfusion von Salzsäure in der Speiseröhre, die Exposition gegenüber Schadstoffen, Zigarettenrauch und Zitronensäure bei Tieren Husten auslösen können10,11,12,13,14,15,16,17. Um Husten und Atemwegsentzündungen besser beurteilen zu können, wurde in dieser Studie ein Mausmodell für Husten mit einer nicht-letalen Dosis des H1N1-Virus etabliert. Für die Erkennung von Husten wurden klinisch einige Hustenmessinstrumente zur Messung von Husten etabliert, darunter subjektive und objektive Methoden18. Zu den subjektiven Bewertungsinstrumenten zur Beurteilung des Schweregrads des Hustens gehören in erster Linie eine visuelle Analogskala, der Husten-Score und Fragebögen zur Lebensqualität usw.19,20. Es ist jedoch unwahrscheinlich, dass sie zur Beurteilung von Husten bei Tieren verwendet werden. Darüber hinaus kann Husten durch einen Hustenprovokationstest und eine Überwachung der Hustenhäufigkeit objektiv beurteilt werden. Der Hustenprovokationstest mit einem Ganzkörperplethysmographie-System (WBP) ist eine objektive Methode, die in Tierversuchen weit verbreitet ist, um die Hustenempfindlichkeit zu messen und die zugrunde liegenden Mechanismen des Hustens aufzudecken13,16. Aufgrund der neuroanatomischen Eigenschaften des Hustenreflexes werden häufig Zitronensäure, Capsaicin, Adenosin-5'-Triphosphat (ATP), Allylisothiocyanat (AITC) und der Entzündungsmediator Bradykinin als tussive Mittel zur Induktion von Husten verwendet21,22. Zitronensäure ist eines der frühesten und am weitesten verbreiteten Tussivmittel, das Hustenreflexe auslöst und für die Messung der Hustenempfindlichkeit validiert wurde. Außerdem weist die Zitronensäure-Challenge eine gute Sicherheit, Machbarkeit und Verträglichkeit auf und wird empfohlen, um die Empfindlichkeit des Hustenreflexes als Reaktion auf Hustentherapien zu beurteilen23. Daher wird in diesem Artikel die Methode zur Messung der Hustenempfindlichkeit als Reaktion auf Zitronensäure bei Mäusen unter Verwendung eines nicht-invasiven Echtzeit-WBP-Systems beschrieben.
Für die Untersuchungen der Pathophysiologie des Hustens sind Testproben erforderlich, einschließlich Proben aus dem Blut, der bronchoalveolären Lavageflüssigkeit (BALF) sowie dem Lungen- und Luftröhrengewebe, um Veränderungen der Spiegel der Schlüsselfaktoren zu überprüfen24. Derzeit mangelt es an normativen Verfahren für die Entnahme von Gewebeproben von Mäusen, und verwandte Studien verwenden unterschiedliche Ansätze, die die Beurteilung von Atemwegsentzündungen erschweren. Die bronchoalveoläre Lavage ist eine wichtige Methode zur Beurteilung von Atemwegsentzündungen bei Atemwegserkrankungen25. Unterschiedliche Methoden der bronchoalveolären Lavage führen zu einer mangelnden Vergleichbarkeit zwischen verwandten Studien. Darüber hinaus haben verschiedene bronchoalveoläre Lavage-Methoden einen Einfluss auf Entzündungszellen und inflammatorische Zytokine bei BALF. Daher wird in diesem Artikel die Etablierung eines Mausmodells für Husten mit einer nicht-letalen Dosis des H1N1-Virus, die Messung von Husten mit einem WBP-System und eine zuverlässige, sichere und äußerst erfolgreiche bronchoalveoläre Lavage-Methode an Mäusen beschrieben.

<table><tbody><tr><td>4% Paraformaldehyd&nbsp;</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>Buxco Ganzkörper-Plethysmographie-System für Kleintiere&nbsp;</td><td>DSI</td><td>&ndash;</td><td></td></tr><tr><td>Calcium- und magnesiumfreier Hank' s Balanced Salt Solution</td><td>Beyotime</td><td>C0219</td><td></td></tr><tr><td>Zitronensäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2404</td><td></td></tr><tr><td>Hämatoxylin-Eosin</td><td>BASO Biotechnologie</td><td>BA-4098</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Natrium&nbsp;</td><td>Alfa Aesar</td><td>A16198</td><td></td></tr><tr><td>Influenza A/California/7/2009 (H1N1) Virus</td><td>ATCC</td><td>VR-1894</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>RWD</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>Laktat-Dehydrogenase-Assay-Kit</td><td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td><td>A020-2-2</td><td></td></tr><tr><td>Normale Kochsalzlösung</td><td>Guangzhou Zhongbo Biotechnologie</td><td>1234-1</td><td></td></tr><tr><td>Pasteurpipette</td><td>NEST</td><td>318415</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital-Natrium</td><td>Merck</td><td>P3761</td><td></td></tr><tr><td>Phosphat gepufferte Kochsalzlösung&nbsp;</td><td>Meilunbio</td><td>MA0015</td><td></td></tr><tr><td>Gesamtprotein-Assay-Kit</td><td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td><td>A045-3</td><td></td></tr><tr><td>Harnsäure-Assay-Kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A22181</td><td></td></tr></tbody></table>

methoden zum nachweis von husten und atemwegsentzündungen bei mäusen

Methods for Detecting Cough and Airway Inflammation in Mice

Chronischer Husten, der länger als 8 Wochen anhält, ist eine der häufigsten Beschwerden, die ärztliche Hilfe erfordern, und die Patienten leiden unter einer enormen sozioökonomischen Belastung und einer deutlichen Verschlechterung der Lebensqualität. Tiermodelle können die komplexe Pathophysiologie des Hustens nachahmen und sind wichtige Werkzeuge für die Hustenforschung. Die Detektion der Hustenempfindlichkeit und der Atemwegsentzündung ist von großer Bedeutung für die Erforschung des komplexen pathologischen Mechanismus des Hustens. Dieser Artikel beschreibt die Messung von Husten mit einem nicht-invasiven und Echtzeit-Ganzkörperplethysmographie-System (WBP) und die normativen Verfahren zur Entnahme von Gewebeproben (einschließlich Blut, Lunge, Milz und Luftröhre) von Mäusen. Es werden einige Methoden zur Beurteilung von Atemwegsentzündungen vorgestellt, einschließlich pathologischer Veränderungen in Hämatoxylin- und Eosin (HE)-gefärbten Lungen- und Luftröhrenschnitten, der Gesamtproteinkonzentration, der Harnsäurekonzentration und der Aktivität der Laktatdehydrogenase (LDH) im Überstand der bronchoalveolären Lavageflüssigkeit (BALF) sowie der Leukozyten und der differentiellen Zellzahlen von BALF. Diese Methoden sind reproduzierbar und dienen als wertvolle Werkzeuge, um die komplexe Pathophysiologie des Hustens zu untersuchen.

Abbildung 6 zeigt repräsentative Bilder pathologischer Veränderungen der HE-gefärbten Lunge (Abbildung 6A,B), der Luftröhre (Abbildung 6C,D) und der Milz (Abbildung 6E,F). Eine H1N1-Virusinfektion führte zu entzündlichen Veränderungen in der Lunge von Mäusen, einschließlich Ödemen und vielen Lymphozyten und Neutrophileninfiltration. Eine H1N1-Virusinfektion induzierte auch entzündliche Veränderungen in den Luftröhren der Maus, einschließlich der Ablösung von Zilien und entzündlicher Zellinfiltrationen (viele Lymphozyten und eine geringe Anzahl von Neutrophilen). Darüber hinaus erhöhte sich durch die Infektion auch das Verhältnis der weißen Pulpafläche zur gesamten Milzfläche der Mäuse signifikant. Lymphozyten sammeln sich in der weißen Pulpa der Milz an. Dieses standardisierte Verfahren zur Entnahme von Gewebeproben kann Entzündungen der Atemwege besser beurteilen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67122/67122fig01.jpg"> Abbildung 1: Protokoll zur Etablierung eines Mausmodells für Husten. Die Mäuse wurden einmal an Tag 0 mit Pentobarbital-Natrium anästhesiert und intranasal mit 0,8 x LD50 des H1N1-Virus instilliert, das in 50 μl PBS gelöst war. Die Hustenmessung wurde an Tag 20 durchgeführt, und die Mäuse wurden am folgenden Tag getötet. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67122/67122fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67122/67122fig02.jpg"> Abbildung 2: Intranasale Instillation des H1N1-Virus. (A) Intranasale Instillation von 0,8 x LD50 des H1N1-Virus in 50 μl PBS. (B) Halten Sie das Maul der Maus mit dem Daumen geschlossen. (C) Platzieren Sie die Mäuse in Rückenlage. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67122/67122fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67122/67122fig03.jpg"> Abbildung 3: Messung der Hustenempfindlichkeit. (A) Hustenerkennungsgerät für Mäuse und (B) Hustenreflexkurve. Die Anzahl der Hustenereignisse als Reaktion auf die vernebelte Zitronensäurelösung (0,4 M) wurde mit dem Ganzkörperplethysmographie-System (WBP) nach der Modellierung nachgewiesen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67122/67122fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67122/67122fig04v2.jpg"> Abbildung 4: Repräsentative Bilder der Entnahme von Blut, Milz, BALF, Lunge und Luftröhre der Maus. (A) Blutentnahme, (B) Öffnen des Brustkorbs, (C) Abschneiden der linken Ohrmuschel, (D) Lungendurchblutung, (E) Entnahme der Milz, (F) bronchoalveoläre Lavage und (G) Entnahme des Lungenlappens und (H) der Luftröhre für die histopathologische Analyse. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67122/67122fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67122/67122fig05.jpg"> Abbildung 5: Spezifikation des bronchoalveolären Lavagerohrs. Die Länge der bronchoalveolären Lavageröhre beträgt 5 cm. Der obere Durchmesser beträgt 5 mm und der untere Durchmesser 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67122/67122fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67122/67122fig06.jpg"> Abbildung 6: Auswirkungen des H1N1-Virus auf pathologische Veränderungen in Lunge, Luftröhre und Milz der Maus. (A,B) Repräsentative Abbildungen pathologischer Veränderungen in HE-gefärbten Lungenschnitten aus der (A) Kontroll- und (B) H1N1-Gruppe. Das Symbol von "↑" markiert die Infiltration von Lymphozyten (rot) und Neutrophilen (blau). Maßstabsbalken: 50 μm. (C,D) Repräsentative Zahlen pathologischer Veränderungen in HE-gefärbten Luftröhrenschnitten aus der (C)-Kontroll- und (D) H1N1-Gruppe. Das Symbol von "↑" markiert die Infiltration von Lymphozyten (rot) und Neutrophilen (blau). Maßstabsbalken: 20 μm. (E,F) Repräsentative Zahlen pathologischer Veränderungen in HE-gefärbten Milzschnitten aus der (E)-Kontroll- und (F) H1N1-Gruppe. Das Symbol von "↑" markiert das weiße Fruchtfleisch (grün). Maßstabsleisten: 500 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67122/67122fig06large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Hier beschreiben wir die Messung von Husten mit einem nicht-invasiven und Echtzeit-Ganzkörperplethysmographie-System (WBP) und die normativen Verfahren zur Entnahme von Gewebeproben von Mäusen und stellen einige Methoden zur Beurteilung von Atemwegsentzündungen vor.

Methoden zum Nachweis von Husten und Atemwegsentzündungen bei Mäusen

Chronic cough, which lasts for more than 8 weeks, is one of the most common complaints requiring medical attention, and patients suffer from a huge ...

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