Entwicklung und Anwendung von Rapamycin-regulierten Tyrosinphosphatasen

Unsere Arbeit konzentriert sich auf die Entwicklung von Werkzeugen, die die Aktivität von Tyrosinphosphatasen regulieren. Wir haben das Rapamycin-regulierte System auf mehrere Phosphatasen angewendet und gezeigt, dass es eine spezifische und zeitliche Regulation unseres interessierenden Proteins bewirkt. Unser Ziel war es, die morphologischen Veränderungen zu bestimmen, die durch die Aktivierung der SHIP-2-Phosphatase induziert werden.

Das RapR-Tool hat es uns ermöglicht, vorübergehende Effekte der Phosphatase-Aktivierung in Zellen zu bestimmen, und wir haben komplexe spezifische nachgeschaltete Effekte einer Phosphatase bestimmt, die an der Zellausbreitung und -migration beteiligt ist. Darüber hinaus haben wir domänengesteuertes Verhalten derselben Phosphatase bestimmt. Dies hat zu unserem Verständnis der Phosphatase-Mechanismen bei der Regulierung der Zellmorphodynamik und der nachgeschalteten Signalübertragung beigetragen.

Unser RapR-Tool bietet die Möglichkeit, eine Phosphatase von Interesse spezifisch und zeitlich zu regulieren. Nach dem Einfügen in die Phosphatase fungiert die iFKBP-Domäne als allosterischer Schalter, der, sobald er an Rapamycin gebunden ist, die Aktivität der Phosphatase wiederherstellt und als Einschalter fungiert. Wir können das Rapamycin-regulierte System auch nutzen, um Signalkomplexe zu rekonstruieren.

Unsere Ergebnisse mit dem RapR-Tool haben die Tür geöffnet, um die Auswirkungen des Interaktoms von SHIP-2 auf seine Fähigkeit, die Zellaktivität zu regulieren, zu bestimmen. Wir fanden heraus, dass SHIP-2s in der SH2-Domänenbindung entscheidend für die Zellretraktion ist. Mit Hilfe des RapR-Tools können wir weiter untersuchen, welche Bindungspartner für diese Regelung verantwortlich sein könnten.