Name: Enthüllung des xenobiotischen Transports und der Auswirkungen in isolierten Mitochondrien: Erkenntnisse aus respirometrischen und enzymatischen Assays (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T12:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Entdecken Sie respirometrische und enzymatische Assays zur Untersuchung xenobiotischer Effekte auf mitochondriale Funktion in Ratten, Mücken und Zecken. Diese Methode unterstützt die Entwicklung biologisch sicherer Pestizide.

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<meta charset="utf8"></head><body>Veränderung der mitochondrialen Funktion für therapeutische und Bioinsektizidanwendungen

<ol><li>Javadov, S., Kozlov, A. V., Camara, A. K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+in+health+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Mitochondria in health and diseases.</a> Cells. 9 (5), 1177(2020).</li>
<li>Kummer, E., Ban, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+regulation+of+protein+synthesis+in+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and regulation of protein synthesis in mitochondria.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 22 (5), 307-325 (2021).</li>
<li>Bock, F. J., Tait, S. W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+multifaceted+regulators+of+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as multifaceted regulators of cell death.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 21 (2), 85-100 (2019).</li>
<li>Fulda, S., Galluzzi, L., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+mitochondria+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Targeting mitochondria for cancer therapy.</a> Nat Rev Drug Discov. 9 (6), 447-464 (2010).</li>
<li>Liu, Y., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+a+target+in+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22MedComm%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as a target in cancer treatment.</a> MedComm. 1 (2), 129-139 (2020).</li>
<li>Duque, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insecticidal+activity+of+essential+oils+from+American+native+plants+against+Aedes+aegypti+%28Diptera%3A+Culicidae%29%3A+an+introduction+to+their+possible+mechanism+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Insecticidal activity of essential oils from American native plants against Aedes aegypti (Diptera: Culicidae): an introduction to their possible mechanism of action.</a> Sci Rep. 13 (1), 2989(2023).</li>
<li>Kesari, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant-derived+natural+biomolecule+picein+attenuates+Menadione+induced+oxidative+stress+on+neuroblastoma+cell+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants+%28Basel%2C+Switzerland%29%22%5BJournal%5D)">Plant-derived natural biomolecule picein attenuates Menadione induced oxidative stress on neuroblastoma cell mitochondria.</a> Antioxidants (Basel, Switzerland). 9 (6), 552(2020).</li>
<li>Vanegas-Estévez, T., Duque, F. M., Urbina, D. L., Vesga, L. C., Mendez-Sanchez, S. C., Duque, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+elucidation+of+an+insecticide+from+natural+compounds+targeting+mitochondrial+proteins+of+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Pestic+Biochem+Physiol%22%5BJournal%5D)">Design and elucidation of an insecticide from natural compounds targeting mitochondrial proteins of Aedes aegypti.</a> Pestic Biochem Physiol. 198, 105721(2024).</li>
<li>Hao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria-targeted+nanocarriers+doubled+the+toxicity+of+oxidative+phosphorylation+and+ATP+synthesis+disruptive+insecticides+against+Spodoptera+frugiperda%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Nano%22%5BJournal%5D)">Mitochondria-targeted nanocarriers doubled the toxicity of oxidative phosphorylation and ATP synthesis disruptive insecticides against Spodoptera frugiperda.</a> Environ Sci Nano. 9 (10), 3873-3884 (2022).</li>
<li>Lees, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insecticide+screening+platforms+indicate+that+Mitochondrial+Complex+I+inhibitors+are+susceptible+to+cross-resistance+by+mosquito+P450s+that+metabolise+pyrethroids%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">New insecticide screening platforms indicate that Mitochondrial Complex I inhibitors are susceptible to cross-resistance by mosquito P450s that metabolise pyrethroids.</a> Sci Rep. 10 (1), 16232(2020).</li>
<li>Leung, M. C. K., Meyer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+a+target+of+organophosphate+and+carbamate+pesticides%3A+Revisiting+common+mechanisms+of+action+with+new+approach+methodologies%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as a target of organophosphate and carbamate pesticides: Revisiting common mechanisms of action with new approach methodologies.</a> Reprod Toxicol. 89, 83-92 (2019).</li>
<li>Al-Harbi, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+insecticidal+effects+of+plants+essential+oils+extracted+from+basil%2C+black+seeds+and+lavender+against+Sitophilus+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Plants%22%5BJournal%5D)">Evaluation of insecticidal effects of plants essential oils extracted from basil, black seeds and lavender against Sitophilus oryzae.</a> Plants. 10 (5), 829(2021).</li>
<li>Kim, S. -I., Roh, J. -Y., Kim, D. -H., Lee, H. -S., Ahn, Y. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insecticidal+activities+of+aromatic+plant+extracts+and+essential+oils+against+Sitophilus+oryzae+and+Callosobruchus+chinensis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Stored+Prod+Res%22%5BJournal%5D)">Insecticidal activities of aromatic plant extracts and essential oils against Sitophilus oryzae and Callosobruchus chinensis.</a> J Stored Prod Res. 39 (3), 293-303 (2003).</li>
<li>Kielkopf, C. L., Bauer, W., Urbatsch, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bradford+assay+for+determining+protein+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Bradford assay for determining protein concentration.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2020 (4), 102269(2020).</li>
<li>Zor, T., Selinger, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linearization+of+the+Bradford+protein+assay+increases+its+sensitivity%3A+theoretical+and+experimental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity: theoretical and experimental studies.</a> Anal Biochem. 236 (2), 302-308 (1996).</li>
<li>Voss, D. O., Campello, A. P., Bacila, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+respiratory+chain+and+the+oxidative+phosphorylation+of+rat+brain+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">The respiratory chain and the oxidative phosphorylation of rat brain mitochondria.</a> Biochem Biophys Res Commun. 4, 48-51 (1961).</li>
<li>Gonçalves, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+and+biological+activity+of+the+essential+oil+from+Thapsia+minor%2C+a+new+source+of+geranyl+acetate%5BTitle%5D)+AND+%22Ind+Crops+Prod%22%5BJournal%5D)">Composition and biological activity of the essential oil from Thapsia minor, a new source of geranyl acetate.</a> Ind Crops Prod. 35 (1), 166-171 (2012).</li>
<li>Somlo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+des+lactico-cytochrome+c+reductases+%28d-et+l-%29+de+la+levure+aerobie+par+les+lactates+%28d-+et+l%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+-+Gen+Subj%22%5BJournal%5D)">Induction des lactico-cytochrome c reductases (d-et l-) de la levure aerobie par les lactates (d- et l).</a> Biochim Biophys Acta - Gen Subj. 97 (2), 183-201 (1965).</li>
<li>Mason, T. L., Poyton, R. O., Wharton, D. C., Schatz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochrome+c+Oxidase+from+Bakers%27+Yeast%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Cytochrome c Oxidase from Bakers' Yeast.</a> J Biol Chem. 248 (4), 1346-1354 (1973).</li>
<li>Nelson, D. L., Cox, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNelson%2C+DL+%22Lehninger+Principles+of+Biochemistry%3A+International+Edition%22">Lehninger Principles of Biochemistry: International Edition</a>. , Macmillan Learning. https://play.google.com/store/books/details?id=wZqp0AEACAAJ (2021).</li>
<li>Djafarzadeh, S., Jakob, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+respirometry+to+assess+mitochondrial+function+in+permeabilized+and+intact+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution respirometry to assess mitochondrial function in permeabilized and intact cells.</a> J Vis Exp. 120, e54985(2017).</li>
<li>Maxwell, J. T., Tsai, C. -H., Mohiuddin, T. A., Kwong, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyses+of+mitochondrial+calcium+influx+in+isolated+mitochondria+and+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Analyses of mitochondrial calcium influx in isolated mitochondria and cultured cells.</a> J Vis Exp. (134), e57225(2018).</li>
<li>Vesga, L. C., Silva, A. M. P., Bernal, C. C., Mendez-Sánchez, S. C., Romero Bohórquez, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrahydroquinoline%2F4%2C5-dihydroisoxazole+hybrids+with+a+remarkable+effect+over+mitochondrial+bioenergetic+metabolism+on+melanoma+cell+line+B16F10%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Chem+Res%22%5BJournal%5D)">Tetrahydroquinoline/4,5-dihydroisoxazole hybrids with a remarkable effect over mitochondrial bioenergetic metabolism on melanoma cell line B16F10.</a> Med Chem Res. 30, 2127-2143 (2021).</li>
<li>Vesga, L. C., Bueno, Y., Stashenko, E., Mendez Sánchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efecto+del+aceite+esencial+de+Eucalyptus+citriodora+sobre+el+metabolismo+energ%C3%A9tico+mitocondrial%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Colomb+Qu%C3%ADm%22%5BJournal%5D)">Efecto del aceite esencial de Eucalyptus citriodora sobre el metabolismo energético mitocondrial.</a> Rev Colomb Quím. 43 (2), 10-17 (2015).</li>
<li>Borrero-Landazabal, M. A., Duque, J. E., Mendez-Sanchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+to+design+insecticides+against+Aedes+aegypti+using+in+silico+and+in+vivo+analysis+of+different+pharmacological+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+C+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Model to design insecticides against Aedes aegypti using in silico and in vivo analysis of different pharmacological targets.</a> Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 229, 108664(2020).</li>
<li>Valmas, N., Zuryn, S., Ebert, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+uncouplers+act+synergistically+with+the+fumigant+phosphine+to+disrupt+mitochondrial+membrane+potential+and+cause+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial uncouplers act synergistically with the fumigant phosphine to disrupt mitochondrial membrane potential and cause cell death.</a> Toxicology. 252 (1-3), 33-39 (2008).</li>
<li>Slocińska, M., Rosinski, G., Jarmuszkiewicz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+mitochondrial+uncoupling+protein+4+and+ATP-sensitive+potassium+channel+cumulatively+decreases+superoxide+production+in+insect+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Pept+Lett%22%5BJournal%5D)">Activation of mitochondrial uncoupling protein 4 and ATP-sensitive potassium channel cumulatively decreases superoxide production in insect mitochondria.</a> Protein Pept Lett. 23 (1), 63-68 (2016).</li>
<li>Borrero Landazabal, M. A., Carreño Otero, A. L., Kouznetsov, V. V., Duque Luna, J. E., Mendez-Sanchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+of+mitochondrial+electron+transport+chain+and+oxidative+stress+induced+by+alkaloid-like+%CE%B1-aminonitriles+on+Aedes+aegypti+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Pestic+Biochem+Physiol%22%5BJournal%5D)">Alterations of mitochondrial electron transport chain and oxidative stress induced by alkaloid-like α-aminonitriles on Aedes aegypti larvae.</a> Pestic Biochem Physiol. 144, 64-70 (2018).</li>
<li>Castillo-Morales, R. M., Carreño Otero, A. L., Mendez-Sanchez, S. C., Da Silva, M. A. N., Stashenko, E. E., Duque, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+affectation%2C+DNA+damage+and+AChE+inhibition+induced+by+Salvia+officinalis+essential+oil+on+Aedes+aegypti+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+C+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial affectation, DNA damage and AChE inhibition induced by Salvia officinalis essential oil on Aedes aegypti larvae.</a> Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 221, 29-37 (2019).</li>
<li>Montagut, D. C., Bueno, Y., Vesga, L. C., Stashenko, E. E., Mendez-Sanchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cymbopogon+flexuosus+%28nees+ex+steud.%29+w.+watson+essential+oil+effect+on+mitochondrial+bioenergetics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Essent+Oil+Res%22%5BJournal%5D)">Cymbopogon flexuosus (nees ex steud.) w. watson essential oil effect on mitochondrial bioenergetics.</a> J Essent Oil Res. 34 (3), 233-239 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2,6-Dichlorphenolindophenol</td><td>Merck</td><td>119814</td><td>Am selben Tag der Anwendung zubereiten.</td></tr><tr><td>Bradford-Reagenz</td><td>Merck</td><td>B6916</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td>, <td>Merck</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>Carvacrol</td>, <td>Merck</td><td>W224511</td><td></td></tr><tr><td>Cytochrom c</td><td>Merck</td><td>C2506</td><td>Lichtempfindlicher Konver bedecken Sie es mit Aluminiumfolie. In Lösung sollte es im Gefrierschrank aufbewahrt werden.</td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Merck</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Merck</td><td>>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Ethylendiamintetraessigsäure Tetranatriumsalzdihydrat</td><td>Merck</td><td>E6511</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Merck</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>KCN</td><td>Merck</td><td>60178</td><td>In Lösung wirkt 2 Wochen lang.</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Merck</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Multiskan FC Mikroplatten-Photometer</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td>51119100</tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Merck</td><td>567550</td><td></td></tr><tr><td>Oroboros O2k&nbsp;</td><td>Oroboros Instruments</td><td>10203-03</td><td>https://www.oroboros.at/index.php/product/o2k-startup/</td></tr> <tr><td>Phenazinmethosulfat&nbsp;</td><td>Merck</td><td>P9625</td><td>Am Tag der Anwendung vorbereiten.</td></tr><tr><td>Kaliumferricyanid&nbsp;</td><td>Merck</td><td>244023</td><td>Am selben Tag der Anwendung zubereiten.</td></tr><tr><td>Potter Elvehjem Gewebehomogenisator Röhrchen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rotenon</td><td>Merck</td><td>557368</td><td>Löslich in Ethanol. Lichtempfindliche Konverter decken Sie es mit Aluminiumfolie ab. In Lösung sollte es im Gefrierschrank aufbewahrt werden.</td></tr><tr><td>Natriumsuccinat</td><td>Merck</td><td>S9637</td><td>In Lösung sollte es im Gefrierschrank gelagert werden.</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Merck</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Nicotinamid-Adenin-Dinukleotid, reduziertes Dinatriumsalzhydrat</td><td>Merck</td><td>N8129</td><td>Lichtempfindlicher Conver mit Aluminiumfolie abdecken. In Lösung sollte es im Gefrierschrank aufbewahrt werden.</td></tr></tbody></table>

enthüllung des xenobiotischen transports und der auswirkungen in isolierten mitochondrien: erkenntnisse aus respirometrischen und enzymatischen assays

Unveiling Xenobiotic Transport and Effects in Isolated Mitochondria: Insights from Respirometric and Enzymatic Assays

Bevor Sie die mit diesem Protokoll erzielten Ergebnisse analysieren, ist es wichtig, sich ein wenig über die Biochemie der Elektronentransportkette in den Mitochondrien zu erinnern. Zunächst liefert NADH ein Elektronenpaar an die Oxidoreduktionszentren im Komplex I. Dort beginnt es mit dem Transport von Elektronen, die von Komplex I zu Ubichinon, anschließend zu Komplex III gelangen, der sie an Cytochrom c abgibt, und schließlich zu Komplex IV, wo Sauerstoff der endgültige Elektronenakzeptor ist und ihn zu Wasser reduzie...

Enthüllung des xenobiotischen Transports und der Auswirkungen in isolierten Mitochondrien: Erkenntnisse aus respirometrischen und enzymatischen Assays

Mitochondria are often referred to as the cell's powerhouse due to their crucial role in energy production through the electron transport chain (ETC). ...

unveiling-xenobiotic-transport-effects-isolated-mitochondria-insights

Research

Forschung

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Der Vergleich des mitochondrialen Membranpotentials zwischen Proben liefert wertvolle Informationen über den zellulären Status. Detaillierte Schritte zur Isolierung von Mitochondrien und zur Beurteilung des Ansprechens auf Inhibitoren und Entkoppler mittels Fluoreszenz werden beschrieben. Die Methode und der Nutzen dieses Protokolls werden anhand eines Zellkultur- und Tiermodells für zellulären Stress veranschaulicht.

Isolierung und funktionale Analyse von Mitochondrien aus kultivierten Zellen und Maus-Gewebe

Verfahren zur Biopsie des Vastus lateralis, Herstellung von gereinigtem Mitochondrien und respirometrischen Profiling beschrieben. Die Verwendung von kleinen Muskelvolumen macht diese Technik für klinische Forschung.

Vorbereitung und Respirometrische Bewertung der Mitochondrien isoliert aus dem Skelettmuskelgewebe durch perkutane Nadelbiopsie Erhalten

Die vorgestellten Methoden bieten Schritt-für-Schritt-Anleitungen für die Durchführung einer Sammlung von mikrotiterplattenbasierten respirometrischen Assays unter Verwendung isolierter Mitochondrien aus minimalen Mengen von Maus-Skelettmuskeln. Diese Assays sind in der Lage, mechanistische Veränderungen/Anpassungen des mitochondrialen Sauerstoffverbrauchs in einem häufig verwendeten Tiermodell zu messen.

Verwendung von isolierten Mitochondrien aus minimalen Mengen an Maus-Skelettmuskel für die Hochdurchsatz-Mikroplatten-Atemmessungen

Hier präsentieren wir eine Modifikation einer zuvor berichteten Methode, die die Isolierung von qualitativ hochwertigen und gereinigten Mitochondrien aus kleineren Mengen von Maus-Skelettmuskeln ermöglicht. Dieses Verfahren führt zu hochgradig gekoppelten Mitochondrien, die während mikrotiterplattenbasierter Respirometirc-Assays mit hoher Funktion atmen.

Isolierung von Mitochondrien von minimalen Mengen an Maus-Skelettmuskel für die Hochdurchsatz-Mikroplatten-Atemmessungen

Hochauflösende Respirometrie verwendet mitochondrialen Sauerstoffverbrauch zu bestimmen. Dies ist eine einfache Technik mitochondrialen Atmungskette Komplexe '(I-IV) Atmungsraten, maximale mitochondrialen Elektronentransportsystemkapazität und mitochondrialen Außenmembran Integrität zu bestimmen.

Hochauflösende Respirationstest zur Beurteilung mitochondrialen Funktion in permeabilisierten und Intakte Zellen

Hier wird eine Quadrizeps-Muskelprobe von einem anästhesierten Schwein entnommen und Mitochondrien werden durch differentielle Zentrifugation isoliert. Anschließend werden die Atemfrequenzen der mitochondrialen Atmungskettenkomplexe I, II und IV mittels hochauflösender Respirometrie bestimmt.

Isolation of Intact Mitochondria von Skeletal Muscle durch differentielle Zentrifugation für hochauflösende Messungen Respirationstest

In dieser Arbeit beschreiben wir ein modifiziertes Protokoll zum Testen des mitochondrialen respiratorischen Substratflusses unter Verwendung von rekombinantem Perfringolysin O in Kombination mit mikroplattenbasierter Respirometrie. Mit diesem Protokoll zeigen wir, wie Metformin die mitochondriale Atmung von zwei verschiedenen Tumorzelllinien beeinflusst.

Messung des mitochondrialen Substratflusses in rekombinanten Perfringolysin O-permeabilisierten Zellen

Die Beurteilung der oxidativen Phosphorylierung mit hochauflösenden Respirometern ist zu einem integralen Bestandteil der Funktionsanalyse von Mitochondrien und zellulärem Energiestoffwechsel geworden. Hier stellen wir Protokolle für die Analyse des zellulären Energiestoffwechsels mit kammer- und mikroplattenbasierten hochauflösenden Respirometern vor und diskutieren die wichtigsten Vorteile jedes Geräts.

Hochauflösende Respirometrie zur Beurteilung der Bioenergetik in Zellen und Geweben mittels kammer- und plattenbasierter Respirometer

Hier beschreiben wir eine detaillierte Methode zur Isolierung der Mitochondrien aus der Skelettmuskulatur der Maus und die anschließende Analyse der Atmung mittels Oxygen Consumption Rate (OCR) unter Verwendung von mikroplattenbasierten respirometrischen Assays. Diese Pipeline kann angewendet werden, um die Auswirkungen mehrerer umweltbedingter oder genetischer Eingriffe auf den mitochondrialen Stoffwechsel zu untersuchen.

Isolierung von Mitochondrien aus der Skelettmuskulatur der Maus für respirometrische Assays

Diese Protokolle werden den Benutzern helfen, den mitochondrialen Energiestoffwechsel in 3D-Krebszelllinien-abgeleiteten Sphäroiden mithilfe der extrazellulären Flussanalyse von Seepferdchen zu untersuchen.

Erforschung des mitochondrialen Energiestoffwechsels einzelner 3D-Mikrogewebesphäroide mittels extrazellulärer Flussanalyse

Die mitochondriale Atmung in ganzen Hefezellen ist ein wertvoller Indikator für die Bioenergetik der Zellen. Hier stellen wir ein Protokoll vor, um diesen Phänotyp zu quantifizieren, das auf verschiedene Hefearten anwendbar ist.

Quantifizierung der mitochondrialen Atmung in ganzen Hefezellen

Entdecken Sie respirometrische und enzymatische Assays zur Untersuchung xenobiotischer Effekte auf mitochondriale Funktion in Ratten, Mücken und Zecken. Diese Methode unterstützt die Entwicklung biologisch sicherer Pestizide.

Enthüllung des xenobiotischen Transports und der Auswirkungen in isolierten Mitochondrien: Erkenntnisse aus respirometrischen und enzymatischen Assays (Video) | JoVE Journal

Enthüllung des xenobiotischen Transports und der Auswirkungen in isolierten Mitochondrien: Erkenntnisse aus respirometrischen und enzymatischen Assays

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