Name: Hochauflösende Zelltransplantation in embryonalen und larvalen Zebrafischen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: Erfahren Sie die hochauflösende Zelltransplantation in Zebrafisch-Embryonen und -Larven zur Untersuchung neuronaler Entwicklung. Diese Methode ermöglicht die Transplantation differenzierter Neuronen mit genetischer Fluoreszenzmarkierung.

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<meta charset="utf8"></head><body>Robuste Zebrafischzelltransplantation für die Regenerations- und Entwicklungsforschung

<ol><li>Solini, G. E., Dong, C., Saha, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+transplantation+experiments%3A+Past%2C+present%2C+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Embryonic transplantation experiments: Past, present, and future.</a> Trends Dev Biol. 10, 13-30 (2017).</li>
<li>Gilbert, S. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGilbert%2C+SF+%22A+Conceptual+History+of+Modern+Embryology%22">A Conceptual History of Modern Embryology</a>. , Springer. New York, NY. (1991).</li>
<li>Spemann, H., Mangold, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+embryonic+primordia+by+implantation+of+organizers+from+a+different+species.+1923%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of embryonic primordia by implantation of organizers from a different species. 1923.</a> Int J Dev Biol. 45 (1), 13-38 (2001).</li>
<li>Kretzschmar, K., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+Tracing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Lineage Tracing.</a> Cell. 148 (1), 33-45 (2012).</li>
<li>Gansner, J. M., Dang, M., Ammerman, M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+22+-+Transplantation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 22 - Transplantation in zebrafish.</a> Methods in Cell Biol. 138, 629-647 (2017).</li>
<li>Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Details+of+the+interphase+nucleus+in+Japanese+quail+%28Coturnix+coturnix+japonica%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Biol+Fr+Belg%22%5BJournal%5D)">Details of the interphase nucleus in Japanese quail (Coturnix coturnix japonica).</a> Bull Biol Fr Belg. 103 (3), 435-452 (1969).</li>
<li>Ho, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+movements+and+cell+fate+during+zebrafish+gastrulation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Suppl%22%5BJournal%5D)">Cell movements and cell fate during zebrafish gastrulation.</a> Dev Suppl. , 65-73 (1992).</li>
<li>Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+patterning+deciphered+in+avian+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Developmental patterning deciphered in avian chimeras.</a> Development, Growth & Differentiation. 50, S11-S28 (2008).</li>
<li>Wagner, D. E., Wang, I. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonogenic+neoblasts+are+pluripotent+adult+stem+cells+that+underlie+planarian+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration.</a> Science. 332 (6031), 811-816 (2011).</li>
<li>Balaban, E., Teillet, M. A., Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+quail-chick+chimera+system+to+the+study+of+brain+development+and+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Application of the quail-chick chimera system to the study of brain development and behavior.</a> Science. 241 (4871), 1339-1342 (1988).</li>
<li>Carmany-Rampey, A., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+mosaic+analysis+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Modern mosaic analysis in the zebrafish.</a> Methods. 39 (3), 228-238 (2006).</li>
<li>Kragl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+keep+a+memory+of+their+tissue+origin+during+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cells keep a memory of their tissue origin during axolotl limb regeneration.</a> Nature. 460 (7251), 60-65 (2009).</li>
<li>Rojo-Laguna, J. I., Garcia-Cabot, S., Saló, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+transplantation+in+planarians%3A+A+useful+tool+for+molecular+analysis+of+pattern+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue transplantation in planarians: A useful tool for molecular analysis of pattern formation.</a> Semin Cell Dev Biol. 87, 116-124 (2019).</li>
<li>Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+choreography+of+appendage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular choreography of appendage regeneration.</a> Cell. 165 (7), 1598-1608 (2016).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscles+are+barely+required+for+the+patterning+and+cell+dynamics+in+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Muscles are barely required for the patterning and cell dynamics in axolotl limb regeneration.</a> Front Genet. 13, 1036641(2022).</li>
<li>Wells, K. M., Kelley, K., Baumel, M., Vieira, W. A., McCusker, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+control+of+growth+and+size+in+the+axolotl+limb+regenerate%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Neural control of growth and size in the axolotl limb regenerate.</a> Elife. 10, e68584(2021).</li>
<li>Otsuki, L., Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+memory+in+vertebrate+regeneration%3A+a+century%27s+insights+from+the+salamander+limb%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Positional memory in vertebrate regeneration: a century's insights from the salamander limb.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 14 (6), e040899(2022).</li>
<li>de Abreu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model of neurodevelopmental disorders.</a> Neuroscience. 445, 3-11 (2020).</li>
<li>Alper, S. R., Dorsky, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+advantages+of+zebrafish+larvae+as+a+model+for+spinal+cord+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unique advantages of zebrafish larvae as a model for spinal cord regeneration.</a> Front Mol Neurosci. 15, 983336(2022).</li>
<li>Blader, P., Strähle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+developmental+genetics+and+central+nervous+system+development%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Zebrafish developmental genetics and central nervous system development.</a> Hum Mol Genet. 9 (6), 945-951 (2000).</li>
<li>Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+chimeric+zebrafish+embryos+by+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation.</a> J Vis Exp. (29), e1394(2009).</li>
<li>Boulanger-Weill, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+interactions+between+newborn+and+mature+neurons+leading+to+integration+into+established+neuronal+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional interactions between newborn and mature neurons leading to integration into established neuronal circuits.</a> Curr Biol. 27 (12), 1707-1720 (2017).</li>
<li>Dong, J., Stuart, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgene+manipulation+in+zebrafish+by+using+recombinases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgene manipulation in zebrafish by using recombinases.</a> Methods Cell Biol. 77, 363-379 (2004).</li>
<li>Kawakami, K., Shima, A., Kawakami, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+functional+transposase+of+the+Tol2+element%2C+an+Ac-like+element+from+the+Japanese+medaka+fish%2C+and+its+transposition+in+the+zebrafish+germ+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Identification of a functional transposase of the Tol2 element, an Ac-like element from the Japanese medaka fish, and its transposition in the zebrafish germ lineage.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (21), 11403-11408 (2000).</li>
<li>Hwang, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+editing+in+zebrafish+using+a+CRISPR-Cas+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Efficient genome editing in zebrafish using a CRISPR-Cas system.</a> Nat Biotechnol. 31 (3), 227-229 (2013).</li>
<li>Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+primary+motoneuron+identity+in+developing+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Determination of primary motoneuron identity in developing zebrafish embryos.</a> Science. 252 (5005), 569-572 (1991).</li>
<li>Elsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+5+-+Cellular+methods%3A+detailed+procedure+for+transplanting+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 5 - Cellular methods: detailed procedure for transplanting single cells.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Poulain, F. E., Gaynes, J. A., Stacher Hörndli, C., Law, M. -Y., Chien, C. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+retinal+axon+guidance+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Analyzing retinal axon guidance in zebrafish.</a> Methods Cell Biol. 100, 3-26 (2010).</li>
<li>Masai, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-cadherin+mediates+retinal+lamination%2C+maintenance+of+forebrain+compartments+and+patterning+of+retinal+neurites%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">N-cadherin mediates retinal lamination, maintenance of forebrain compartments and patterning of retinal neurites.</a> Development. 130 (11), 2479-2494 (2003).</li>
<li>Raible, D. W., Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulative+interactions+in+zebrafish+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Regulative interactions in zebrafish neural crest.</a> Development. 122 (2), 501-507 (1996).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Barsh, G. R., Isabella, A. J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+motor+neuron+topographic+map+determined+by+parallel+mechanisms+of+hox5+expression+and+time+of+axon+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Vagus motor neuron topographic map determined by parallel mechanisms of hox5 expression and time of axon initiation.</a> Curr Biol. 27 (24), 3812-3825 (2017).</li>
<li>Isabella, A. J., Stonick, J. A., Dubrulle, J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+positional+memory+guides+target-specific+axon+regeneration+in+the+zebrafish+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Intrinsic positional memory guides target-specific axon regeneration in the zebrafish vagus nerve.</a> Development. 148 (18), 199706(2021).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+1%3A+General+methods+for+zebrafish+care%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 1: General methods for zebrafish care.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Grant, P. K., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroepithelial+basement+membrane+serves+as+a+boundary+and+a+substrate+for+neuron+migration+in+the+zebrafish+hindbrain%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">The neuroepithelial basement membrane serves as a boundary and a substrate for neuron migration in the zebrafish hindbrain.</a> Neural Dev. 5 (1), 9(2010).</li>
<li>Konantz, J., Antos, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+genetic+morpholino+approach+using+cardiac+ventricular+injection+to+transfect+multiple+difficult-to-target+tissues+in+the+zebrafish+larva%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Reverse genetic morpholino approach using cardiac ventricular injection to transfect multiple difficult-to-target tissues in the zebrafish larva.</a> J Vis Exp. (88), e51595(2014).</li>
<li>Novoa, B., Figueras, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+model+for+the+study+of+inflammation+and+the+innate+immune+response+to+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: model for the study of inflammation and the innate immune response to infectious diseases.</a> Adv Exp Med Biol. 946, 253-275 (2012).</li>
<li>Speirs, Z. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+can+we+learn+about+fish+neutrophil+and+macrophage+response+to+immune+challenge+from+studies+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Shellfish+Immunol%22%5BJournal%5D)">What can we learn about fish neutrophil and macrophage response to immune challenge from studies in zebrafish.</a> Fish Shellfish Immunol. 148, 109490(2024).</li>
<li>Trede, N. S., Langenau, D. M., Traver, D., Look, A. T., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+to+understand+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish to understand immunity.</a> Immunity. 20 (4), 367-379 (2004).</li>
<li>Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+maturation+of+the+immune+system+in+zebrafish%2C+Danio+rerio%3A+a+gene+expression+profiling%2C+in+situ+hybridization+and+immunological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Comp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study.</a> Dev Comp Immunol. 28 (1), 9-28 (2004).</li>
<li>Wienholds, E., Schulte-Merker, S., Walderich, B., Plasterk, R. H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-selected+inactivation+of+the+zebrafish+rag1+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Target-selected inactivation of the zebrafish rag1 gene.</a> Science. 297 (5578), 99-102 (2002).</li>
<li>Petrie-Hanson, L., Hohn, C., Hanson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+rag1+mutant+zebrafish+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization of rag1 mutant zebrafish leukocytes.</a> BMC Immunol. 10, 8(2009).</li>
<li>Roh-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-dependent+cytoplasmic+transfer+during+melanoma+invasion+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Macrophage-dependent cytoplasmic transfer during melanoma invasion in vivo.</a> Dev Cell. 43 (5), 549-562 (2017).</li>
<li>Bukrinsky, A., Griffin, K. J. P., Zhao, Y., Lin, S., Banerjee, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+spi-1-like+%28spi-1l%29+in+zebrafish+myeloid+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Essential role of spi-1-like (spi-1l) in zebrafish myeloid cell differentiation.</a> Blood. 113 (9), 2038-2046 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10 mL "Reservoir-Spritze"</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-459</td><td></td></tr><tr><td>150 mL Einweg-Vakuumfilter, .2 & micro; m, PES</td><td>Corning</td><td>431153</td><td></td></tr><tr><td>Heizblock 20 x 12 mm</td><td>Corning</td><td>480122</td><td></td></tr><tr><td>3-Wege-Absperrhahn</td><td>Braun Medical Inc.</td><td></td><td></td>455991</tr><tr><td>3 x 1 Objektträger aus Milchglas</td><td>VWR</td><td>48312-004</td><td></td></tr><tr><td>40x Wassertauchobjektiv</td><td>Nikon</td><td>MRD07420</td><td></td></tr><tr><td>Calciumchlorid-Dihydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3306</td><td></td></tr><tr><td>Grobmanipulator</td><td>Narishige</td><td>MN-4</td><td></td></tr><tr><td>Kundenspezifische Mikrospritzenpumpe</td><td>Universität von Oregon</td><td>N/A</td><td>Hergestellt von der Maschinenwerkstatt der University of Oregon (tsa.uoregon@gmail.com). Eine im Handel erhältliche Alternative ist unten aufgeführt.</td></tr><tr><td>Dumont #5 Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>1129500</td><td></td></tr><tr><td>Eclipse FN1 "Transplantationsmikroskop"</td><td>Nikon</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Elektrodengriff</td><td>World Precision Instruments</td><td>5444</td><td></td></tr><tr><td>Federsterile chirurgische Klinge, #11</td><td>VWR</td><td>21899-530</td><td></td></tr><tr><td>Feiner Mikromanipulator, Dreiachsig Ölhydraulik&nbsp;</td><td>Narishige</td><td>MMO-203</td><td></td></tr><tr><td>HEPES pH 7,2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375-100G</td><td></td></tr><tr><td>Hochpräziser #3 Style Skalpellgriff</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-163</td><td></td></tr><tr><td>Kimble Einweg-Borosilikat-Pasteur-Pipette, breite Spitze, 5,75 Zoll</td><td>DWK Life Sciences</td><td>63A53WT</td><td></td></tr><tr><td>KIMBLE Chromatographie-Adapter&nbsp;</td><td>DWK Life Sciences</td><td>420408-0000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Light Mineral</td><td>Oil Sigma-Aldrich</td><td>M3516-1L</td><td></td></tr><tr><td>LSE digitale Trockenbadheizung, 1 Block, 120</td><td>V Corning</td><td>6875SB</td><td></td></tr><tr><td>Manuelle Mikrospritzenpumpe</td><td>World Precision Instruments</td><td>MMP</td><td>Kommerzielle Alternative zur kundenspezifischen Mikrospritzenpumpe</td></tr><tr><td>Mikroelektrodenhalter</td><td>World Precision Instruments</td><td>MPH310</td><td></td></tr><tr><td>MicroFil Pipettenfüller</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF28G67-5</td><td></td></tr><tr><td>Nagellack</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Nukleasefreies Wasser</td><td>VWR</td><td>82007-334</td><td></td></tr><tr><td>P-97 Flammender/Brauner Mikropipettenabzieher</td><td>Sutter Instruments</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>p4458-100ML</td><td>5.000 Einheiten Penicillin und 5 mg Streptomycin/ml</td></tr><tr><td>Pipettenpumpe 10 mL</td><td>Bel-Art</td><td>37898-0000</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Professioneller Sekundenkleber</td><td>Loctite</td><td>LOC1365882</td><td></td></tr><tr><td>Reagenzgläser</td> <td>aus Polystyrol mit rundem BodenFalcon</td><td>352054</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Tischmikrometer</td><td>Meiji Techno America</td><td>MA285</td><td></td></tr><tr><td>Spritzen ohne Nadel, 50 mL</td><td>BD Medical</td><td>309635</td><td></td></tr><tr><td>Tricain Methanosulfonat</td><td>Syndel USA</td><td>SYNCMGAUS03</td><td></td></tr><tr><td>Trilene XL glattes Casting Angelschnur</td><td>Berkley</td><td>XLFS6-15</td><td></td></tr><tr><td>Schlauch, Polyethylen Nr. 205</td><td>BD Medical</td><td>427445</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Low Melting Point Agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16520050</td><td></td></tr><tr><td>Wiretrol II kalibrierte Mikropipetten</td><td>Drummond</td><td>50002010</td><td></td></tr></tbody></table>

hochauflösende zelltransplantation in embryonalen und larvalen zebrafischen

High-resolution Cell Transplantation in Embryonic and Larval Zebrafish

Die Ergebnisse von Transplantationsexperimenten werden direkt beobachtet, indem fluoreszenzmarkierte Spenderzellen in Wirtstieren zu geeigneten Zeitpunkten nach der Transplantation mit einem Fluoreszenzmikroskop sichtbar gemacht werden. Hier transplantierten wir einzelne anteriore Vagusneuronen bei 3 dpf. Die Wirtstiere wurden dann für 12 oder 48 Stunden inkubiert, anästhesiert, in LMA auf ein Glasdeckglas montiert und mit einem konfokalen Mikroskop abgebildet (Abbildung 5). 12 h nach der Transplantation (hpt) beobachten wir ein erfolgreich transplantiertes Spenderneuron (Abbildung 5A). Wir können die korrekte Positionierung der Zelle bestätigen, da sie sich zwischen den Vagusneuronen des Wirts im vorderen Bereich des motorischen Kerns des Wirtsvaguses befindet. Die Zelle erscheint auch intakt und gesund, was durch die Ausdehnung mehrerer kurzer Neuritenvorsprünge angezeigt wird (Abbildung 5A). 2 Tage nach der Transplantation (dpt) können wir erneut bestätigen, dass ein einzelnes Neuron erfolgreich in die richtige Position des Wirtskerns transplantiert wurde (Abbildung 5B). An dieser Stelle stellen wir fest, dass das Neuron ein neues Axon bis zum 4. Pharynxbogen verlängert hat (Abbildung 5B). Die direkte Beobachtung zeigt auch, wann der Eingriff fehlgeschlagen ist. In diesem Beispiel beobachten wir einen 2-dpt-Wirt, in dem kein Donorneuron vorhanden ist; vielmehr ist ein kleiner grüner Fleck zu sehen, wahrscheinlich ein Fragment eines Spenderneurons, das nach der Transplantation abgestorben ist (Abbildung 5C). Obwohl die Erfolgsraten der Transplantation je nach Benutzererfahrung und Anzahl und Art der transplantierten Zellen variieren, erleben wir eine Erfolgsrate (definiert als das Vorhandensein eines überlebenden Neurons, das ein Axon im Wirt bei 2-3 dpf ausgedehnt hat) von 66% (n = 453 Transplantationen) für Vagus-Motoneuron-Transplantationen, die bei 3-4 dpf33 durchgeführt wurden.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig01.jpg"> Abbildung 1: Überblick über die Transplantationsapparatur. (A) aufrechtes Fluoreszenzmikroskop; (B) 40-faches Wassertauchobjektiv; (C) grober Mikromanipulator; (D) feiner Mikromanipulator; (E) Mikroelektrodenhalter; (F) Elektrodengriff; (G) Dreiwege-Absperrhahn; H) Pumpe für Mikrospritzen; I) Schläuche aus Polyethylen; (J) Chromatographie-Adapter; (K) 10 mL Reservoirspritze. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig02.jpg"> Abbildung 2: Montage von Tieren für die Transplantation. (A) Ein 3 Zoll x 1 Zoll großer Objektträger aus Milchglas mit klarem Nagellack, der in einem rechteckigen Umriss (gestrichelte Linie) aufgetragen wurde. (B) Spender- (Pfeil) und Wirtstiere (Pfeilspitze), die in Agarosetropfen montiert sind, vertikal ausgerichtet mit der Transplantationszielstelle (Hinterhirn) nach rechts. (C) Agarose mit rechter Kante und ausgeschnittenen Keilen, um die Transplantationszielstelle freizulegen. Einschub: Zoom des umrahmten Bereichs. (D) Transplantatobjektträger, geflutet mit Ringer-Lösung mit Penicillin-Streptomycin und Tricain. Maßstabsbalken = 5 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig03.jpg"> Abbildung 3: Vorbereitung der Transplantatnadel. (A) Gebrochene Transplantatnadel auf einem Tischmikrometer. (B) Pipettenfüller (1) in die Transplantatnadel (2) einführen, um die Nadel mit Mineralöl zu füllen. (C) Vorbereiteter Objektträger und Nadel an Ort und Stelle auf dem Transplantatmikroskop. 1: Wassermeniskus zwischen dem 40x Tauchobjektiv und dem gefluteten Objektträger 2: Transplantatnadel 3: Mikroelektrodenhalter. (D) Spitze einer gebrochenen Transplantationsnadel mit stabilem Ölmeniskus (Pfeilspitze), betrachtet durch das Transplantatmikroskop bei 40-facher Vergrößerung. Maßstabsleisten = 100 μm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig04.jpg"> Abbildung 4: Der Transplantationsprozess unter dem Mikroskop. (A) Nadel, die außerhalb des Spendertieres positioniert ist und auf die Motoneuronen des Vagus gerichtet ist (grün, Pfeilspitze). (B) Nadel, die im Inneren des Spendertieres positioniert wird, nachdem fluoreszenzmarkierte Spenderneuronen aufgenommen wurden (Pfeilspitzen). (C) Nadel mit mehreren Spenderneuronen (Pfeilspitzen), die außerhalb des Wirtstieres positioniert sind und auf die Motoneuronen des vorderen Wirtsvaguses gerichtet sind (rot, Sternchen). (D) Wirtstier nach der Transplantation mit zurückgezogener Nadel. Eine Gruppe von transplantierten Spenderneuronen, die GFP (Pfeilspitze) exprimieren, wurde in den Wirt ausgestoßen. Maßstabsbalken = 30 μm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig05.jpg"> Abbildung 5: Repräsentative Ergebnisse. (A,B) Erfolgreiche Transplantationen. (A) Die vordere Region eines 12 hpt großen Vagus-Motorkerns des Wirts (magenta), der ein Spenderneuron enthält (grün, schwarz in A'). Das Donorneuron hat mehrere Neuriten verlängert (Pfeile in A'). (B) Der motorische Nucleus vagus (B-B') und die pharyngealen Axonäste (B''-B''', Axonäste beschriftet) eines 2-dpt-Wirts (magenta), der ein Donorneuron enthält (grün, schwarz in B', B'''). Das Donorneuron hat ein neues Axon bis zu Ast 4 (Pfeilspitzen) verlängert. Abbildung 5A,B zeigen verschiedene Tiere. (C) Erfolglose Transplantation. Der motorische Vaguskern eines 2-dpt-Wirts (magenta). Es ist kein Donorneuron vorhanden; vielmehr ist ein kleiner Fleck (grün, schwarz in C') vorhanden, der wahrscheinlich ein Fragment eines toten Spenderneurons (Pfeilspitze) darstellt. Maßstabsleisten = 20 μm. Abkürzungen: dpt = Tage nach der Transplantation; HPT = Stunden nach der Transplantation. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Hochauflösende Zelltransplantation in embryonalen und larvalen Zebrafischen

Development and regeneration occur by a process of genetically encoded spatiotemporally dynamic cellular interactions. The use of cell transplantation ...

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Research

Forschung

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