Ein unreifes Mausmodell einer reversiblen einseitigen Harnleiterobstruktion

Diese Studie etabliert ein reversibles UU-Modell bei unreifen Ratten, um die Genesung von Nierenschäden zu untersuchen und seine Zuverlässigkeit und Anwendung bei der Untersuchung der Nierenreparatur nach Obstruktion zu bewerten. Ein wichtiger Aspekt bei diesem Ansatz ist die Minimierung von Harnleiterschäden während der Operation, da Harnleiterverletzungen Entzündungen auslösen können, die möglicherweise zu Adhäsion, Verschluss und Rekanalisationsversagen führen können. Wir werden uns auf die dynamische Wiederherstellung der Nierenfunktion und der Nierenschädigung nach der Befreiung von der Obstruktion konzentrieren, insbesondere im Zusammenhang mit einer unreifen RUU-Niere.

[Erzähler] Schneiden Sie zunächst mit einer sterilisierten Schere einen Silikonschlauch in etwa einen Zentimeter große Segmente. Machen Sie einen Längsschnitt entlang einer Seite der Rohrwand für die spätere Verwendung. Bestätigen Sie als Nächstes eine angemessene Anästhesie der Ratte, indem Sie überprüfen, ob keine Reflexreaktionen vorhanden sind, wie z. B. der Pedalzurückzugsreflex beim Einklemmen der Zehen. Tragen Sie veterinärmedizinische Augensalbe auf die Augen auf, um ein Austrocknen der Hornhaut zu verhindern. Enthaaren Sie den Hinterleib der Ratte vom Processus xiphoideus bis zur Schambeinfuge und erstrecken Sie sich bilateral bis zur Mittellinie. Positionieren Sie dann die Ratte in Rückenlage auf einer beheizten Operationsunterlage und sichern Sie ihre Gliedmaßen mit Gummiseilen. Drapieren Sie dann ein steriles Fenstertuch, um ein steriles Feld zu erhalten. Machen Sie nun einen Hautschnitt in der Mittellinie entlang des Bauches, der sich von der sub-xiphoiden Region bis knapp unter den Nabel erstreckt, um die Nieren und oberen Harnleiter freizulegen. Schneiden Sie mit einer chirurgischen Schere das Unterhautgewebe und die Faszien entlang der Mittellinie ein. Präparieren Sie die Haut und das darunterliegende Gewebe sorgfältig Schicht für Schicht. Den retroperitonealen Raum mit einer Gewebezange vollständig freilegen. Bei einer reversiblen einseitigen Harnleiterobstruktion ziehen Sie den Darm zunächst mit einem sterilen Tupfer auf die rechte Seite der Bauchhöhle zurück. Decken Sie den Harnleiter mit mit Kochsalzlösung getränkter Gaze ab, um ein Austrocknen zu verhindern. Präparieren und mobilisieren Sie mit einer mikroskopisch kleinen Pinzette den linken Harnleiter, um etwa 1,5 Zentimeter vom umgebenden Gewebe zu befreien. Legen Sie dann einen ein Zentimeter langen Silikonschlauch unter den befreiten Harnleiter. Verwenden Sie eine Pinzette, um eine vollständige Umhüllung des Rohrs zu gewährleisten. Verwenden Sie 3-0 Seidenfaden, um den Silikonschlauch und den mittleren Teil des Harnleiters zu ligieren und eine Harnleiterobstruktion zu induzieren. Ziehen Sie den Silikonschlauch allmählich entlang der Längsachse des Harnleiters, um eine sichere, aber rutschfeste Ligatur zu gewährleisten. Positionieren Sie den Darm vorsichtig in der Bauchhöhle neu und sorgen Sie für eine korrekte Ausrichtung ohne Spannungen oder Verstopfungen. Vernähen Sie die Bauchmuskulatur und die Faszienschichten mit einer nicht resorbierbaren Naht 3-0 mit einer gebogenen Schneidenadel in kontinuierlicher Weise. Verschließen Sie dann die Haut mit einer laufenden, nicht resorbierbaren 4-0-Naht, um eine anatomische Ausrichtung und eine gleichmäßige Spannung zu gewährleisten. Für die Entlastungsoperation präparieren Sie zunächst den Knoten des Silikonschlauchs vorsichtig mit einer Skalpellklinge. Entfernen Sie den Silikonschlauch und die Seidennähte und spülen Sie die Bauchhöhle mit normaler Kochsalzlösung, um Adhäsion und Infektionsrisiko zu minimieren. Positionieren Sie den Darm neu und vernähen Sie den Bauchwandschnitt in Schichten mit 4-0 nicht resorbierbaren Nähten. Nähen Sie dann die Haut, bevor Sie die Ratte für sieben Tage in die Aufwachkammer bringen. Am 14. postoperativen Tag teilen Sie die Nieren in zwei Hälften, um Nierenproben zu entnehmen. Lagern Sie eine Hälfte in 4%igem Paraformaldehyd für die histopathologische Untersuchung und frieren Sie die andere Hälfte schnell in flüssigem Stickstoff ein, um sie für die anschließende molekulare Analyse bei minus 80 Grad Celsius zu lagern. Führen Sie die Bildschirmbeurteilung für die chirurgische Nachsorge durch. Die Morphologie der Nieren veränderte sich nach einer einseitigen Harnleiterobstruktion erheblich, wobei die UUO-Niere im Vergleich zur nativen Niere vergrößert und geschwollen erschien. Nach dem Lösen der Obstruktion verringerte sich die Nierengröße, blieb aber größer als die native Niere. Die Harnleiterobstruktion wurde durch Methylenblau-Injektion bestätigt, die den verstopften Harnleiter nicht passieren konnte. Nachdem die Obstruktion gelöst worden war, zeigte der Harnleiter an der Ligaturstelle eine rötliche Farbe und eine Peristaltik. Die histologische Analyse zeigte intakte Nierenstrukturen in der nativen Niere, während die UUO-Niere tubuläre Atrophie, Vakuolation und Zelltrümmer in den Lumen aufwies. Die RUUO-Niere zeigte eine teilweise Genesung mit weniger beschädigten Tubuli als die UUO-Niere. Die Trichrom-Färbung nach Masson zeigte eine schwere interstitielle Fibrose in der UUO-Niere, die sich durch eine vermehrte blaugefärbte Kollagenfaser zeigte. Die R-UUO-Niere zeigte im Vergleich zur UUO-Niere eine verminderte Fibrose. Der Nierenschadenswert war in der UUO-Gruppe im Vergleich zur nativen Gruppe signifikant erhöht. Die RUUO-Gruppe hatte einen niedrigeren Nierenverletzungswert als die UUO-Gruppe, blieb aber signifikant höher als die native Niere. Die UUO-Gruppe wies im Vergleich zu allen anderen Gruppen das größte Nierengewicht und -volumen auf. Die RUUO-Gruppe zeigte eine Verringerung des Nierengewichts und -volumens, kehrte aber nicht vollständig auf die Kontrollwerte zurück.