Name: Etablierung eines Modells für schwere Hornhautentzündungen bei Ratten auf der Grundlage einer Hornhautepithelkürettage in Kombination mit Hornhautnähten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-22T14:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 48 s
Description: Lernen Sie ein Rattenmodell für schwere Hornhautentzündungen durch Epithelkürettage und Nähte kennen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Entzündungsmustern ohne Schädigung der Limbusstammzellen.

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<table><tbody><tr><td>10-0 Nahtlinie</td><td>Alcon, Inc., USA</td><td>8065698001</td><td></td></tr><tr><td>2 mm Hornhauttrepan</td><td>Suzhou XVI Vision Company, China</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>20 &mu; L, 100 &mu; L, 1 mL Pipettenpistolenköpfe, Zellkulturplatten-Kulturplatten, Zentrifugenröhrchen</td><td>Guangzhou Jiete Biological Co., Ltd., China</td><td>https://www.jetbiofil.com/index.html-20</td><td></td></tr><tr><td>/-80 &deg; Kühlschrank C</td><td>Qingdao Haier Company, China</td><td>https://www.haier.com/cn/</td><td></td></tr> <tr><td>A 10-ml-Spritze</td><td>&nbsp; Zhejiang Condelai Medical Device Co., Ltd., China</td><td>https://en.kdlchina.com/zhejiang/25.html</td><td></td></tr><tr><td>Halten Sie sich an die Folie</td><td>ShiTai Company</td><td>188105</td><td></td></tr><tr><td>Amylenalkohol</td><td>Shanghai. Macklin Biochemical, China</td><td>http://www.macklin.cn/products/</td><td></td></tr> <tr><td>Anti-Cytokertin</td><td>Abcam, Vereinigtes Königreich</td><td>ab76318</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Keratin 12 Antikörper EPR17882</td><td>Abcam, Vereinigtes Königreich</td><td>ab185627</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PAX6 Antikörper</td><td>Abcam, Vereinigtes Königreich</td><td>ab195045</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Stripping Objektträger, Deckgläser</td><td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd. , China</td><td>https://cn.citotest.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Autoklav</td><td>Hirayama, Japan</td><td>https://hirayama.com.cn/about/</td><td></td></tr> <tr><td>Avertin</td><td>Shanghai Aladdin Biochemical Technology, China</td><td>https://www.aladdin-e.com/zh_cn/A111225.html</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Shanghai Biological Engineering Co., Ltd., China</td><td>https://www.siobp.com/web</td> CO2-Ofen-Inkubator<td></td></tr><tr><td>, Ultraschallbrecher, Zentrifuge</td><td>Thermo Fisher Technologies Inc., USA</td><td>https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home.html</td><td></td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop</td><td>Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd., China</td><td>https://www.clinx.cn/about</td><td></td></tr><tr><td>Hornhaut-Epithelzange</td><td>Suzhou XVI Vision Company, China</td><td>53418D</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Vector. Inc., USA</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>DEPC-Wasser</td><td>&nbsp; Shanghai Biological Engineering Co., Ltd., China</td><td>https://www.siobp.com/web</td><td></td></tr><tr><td>Dicuro Augencreme (Ofloxacin-Augencreme)</td><td>Santian Pharmaceutical Corporation, Japan</td><td>https://www.santen.com/asia</td><td></td></tr><tr><td>D-KSFM, Nährmedium, Doppelantikörper und PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc., USA</td><td>https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home.html</td><td></td></tr><tr><td>ED1</td><td>AbD Serote c, Vereinigtes Königreich</td><td>&nbsp; </td><td></td>MCA341GA</tr><tr><td>Elektronische Waage</td><td>Shanghai Ohaus Biotechnology Company, China</td><td>http://shbio.com/company</td><td></td></tr><tr><td>Gehäuse der Membran</td><td>Parafilm, Inc., USA</td><td>https://www.sigmaaldrich.cn</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescein-Natrium-Teststreifen wurde in der Ophthalmologie verwendet</td><td>Tianjin Jingming New Technology Development Co., Ltd., China</td><td>https://www.eworldtrade.com/c/jingmingtechnological/</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszierendes invertiertes Phasenkontrast-Mikroskopiesystem</td><td>TE-2000U, Nikon, Japan</td><td>https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-te2000-inverted-microscope</td><td></td></tr><tr><td>Gefrorene Tischzentrifuge</td><td>Eppendorf, Deutschland</td><td>https://www.eppendorf.sh.cn&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Glasscheibenrahmen</td><td>Xiamen Tianjing Biotechnology Co., Ltd., China</td><td>http://www.tagene.net/</td> H-1200 mit DAPI-Versiegelung <td></td></tr><tr><td></td><td>Xiamen Juin Biotechnology Co., Ltd., China</td><td>https://www.bosonbio.com.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>HE Färbekit</td><td>Auragene, China</td><td>http://jushengwu.com/a048/</td><td></td></tr> <tr><td>Hämatoxylin-Eosin-Farbstofflösungskit</td><td>AURAGEN, Vereinigte Staaten</td><td>P032IH</td><td></td></tr><tr><td>Elektronische Waage mit hoher und niedriger Präzision</td><td>Sdolis, Deutschland</td><td>https://www.solisinverters.com/global</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Shanghai Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd., China</td><td>https://en.reagent.com.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>Ki-67 Antikörper</td><td>Abcam, Vereinigtes Königreich</td><td>ab16667</td><td></td></tr><tr><td>flüssiger Stickstoff</td><td>Xiamen Yidong Gas Co., Ltd., China</td><td>https://www.china.tdk.com.cn/tdk_chn_en/tdk_xiamen/</td><td></td></tr> <tr><td>Mikrohandhalter</td><td>Suzhou XVI Vision Company, China</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Multiformaldehydpulver</td><td>Sigm, Amerika</td><td>https://www.sigmaaldrich.cn</td><td></td></tr><tr><td>Normaltemperaturzentrifuge 46</td><td>Eppendorf, Deutschland</td><td>https://www.thermofisher.cn</td><td></td></tr><tr><td>OCT</td><td>Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd., China</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Gewöhnliches biologisches Mikrographiksystem</td><td>Eclipse 50i, Nikon, Japan</td><td>https://www.microscope.healthcare.nikon.com/zh_CN/products/upright-microscopes/eclipse-ni-series</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Shanghai Anjin Biotechnology Co., Ltd, China</td><td>SH30256.01</td><td></td></tr><tr><td>PCR, und das Reaktorgerät</td><td>Biometra Thermocycler, Deutschland</td><td>https://www.analytik-jena.com/products/life-science/pcr-qpcr-thermal-cycler/thermal-cycler-pcr/biometra-tone-series/</td><td></td></tr> <tr><td>Pipetten verschiedener Spezifikationen</td><td>Eppendorf Company, Deutschland</td><td>https://www.eppendorf.com/cn-zh/</td><td></td></tr> <tr><td>Primer für Rt-PCR</td><td>Shanghai Bio-Tech Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Promeainhydrochlorid 0,5% Augentropfen</td><td>Alcon, Inc., USA</td><td>https://www.alcon.com/about-us</td><td></td></tr><tr><td>Ratte PMN Antikörper</td><td>Fitzgerald, USA</td><td>20R-PR020</td><td></td></tr><tr><td>Quantitative Fluoreszenz-PCR</td><td>Applied Biosystems,&nbsp; Vereinigte Staaten</td><td>https://www.thermofisher.cn</td><td></td></tr><tr><td>Reverse Transkriptionskit</td><td>TAKARA, Japan</td><td>https://www.takarabiomed.com.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>Spaltlampe</td><td>TOPCON, Japan</td><td>https://topconchina.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>Glatte Pinzette</td><td>Suzhou XVI Vision Company, China</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Probenbox</td><td>Lambolid (Fuzhou) Biotechnology Co., Ltd., China</td><td>http://chuangdianbio.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Superclean Bank</td><td>New Plus Pi Art High Technology Company Limited, Singapur</td><td>https://www.hi-p.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Zahnzange</td><td>Suzhou XVI Vision Company, China</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Toppicamid Augentropfen (Medol)</td><td>Alcon, Inc., USA</td><td>https://www.alcon.com/about-us</td><td></td></tr><tr><td>Spuren-Nukleinsäure-Protein Konzentrationsprüfgerät</td><td>Thermo Fisher Technologies Inc., USA</td><td>https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home.html</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Invitrogen USA</td><td>https://www.fishersci.com/us/en/brands/IIAM0WMR/invitrogen.html</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss, mit einem Operationsmikroskop</td><td>Carl ZEIS, Deutschland</td><td>https://www.zeiss.com/corporate/en/about-zeiss.html</td><td></td></tr></tbody></table>

etablierung eines modells für schwere hornhautentzündungen bei ratten auf der grundlage einer hornhautepithelkürettage in kombination mit hornhautnähten

Establishing a Severe Corneal Inflammation Model in Rats Based on Corneal Epithelium Curettage Combined with Corneal Sutures

Wie in Abbildung 1A gezeigt, stellten wir durch Beobachtung mit einer Spaltlampe fest, dass die Heilung des Hornhautepithels beeinträchtigt war. Unter normalen Umständen würde das zentrale Hornhautepithel innerhalb von 24-48 h nach der Entnahme vollständig abheilen, aber bei der Exzision des zentralen Hornhautepithels in Kombination mit einem Nahtmodell blieben weiterhin neue Blutgefäße vorhanden. Am dritten Tag nach der Etablierung des Modells wurden signifikante Hornhaut-Limbusödeme und Neovaskularisationen beobachtet, wobei typische Anzeichen eines Mangels an hornhautlimbalen Stammzellen lokal auftraten. Im Laufe der Zeit, am 7. Tag, war die Heilung immer noch nicht abgeschlossen. Der Hornhautentzündungsindex wurde anhand der ziliären Stauung, des parazentralen Hornhautödems und des zentralen Hornhautödems bestimmt. Das Hornhautödem verschlimmerte sich allmählich und die Hornhautentzündung (Abbildung 1A) verschlechterte sich weiter. Darüber hinaus ist die Neovaskularisation der Hornhaut ein Indikator für eine Entzündung. Mit dem Fortschreiten der Entzündung zeigten die neovaskularisation der Hornhaut (Abbildung 1B) und des Entzündungsindex (Abbildung 1C) einen kontinuierlichen Anstieg.
Wir führten 7 Tage nach der Modellerstellung eine Kryoeinbettung am Augengewebe durch. Die Hämatoxylin- und Eosinfärbung (Abbildung 2A) zeigte eine Verdickung des Epithels am Limbus und an der zentralen Hornhaut, wobei die Epithelanordnung ihre normale Morphologie verlor, was auf eine atypische Hyperplasie hinweist. Das Hornhautstroma erschien ödematös mit einer signifikanten Infiltration von Entzündungszellen. Mittels PMN- und ED1-Immunfluoreszenzfärbung (Abbildung 2B) wurde ein deutlicher Anstieg der Infiltration von Neutrophilen und Makrophagen beobachtet. Die Studie bewertete Entzündungsfaktoren anhand von IL-1β (Abbildung 2C) und MIP-1α (Abbildung 2D) und stellte fest, dass IL-1β am Tag 3 seinen Höhepunkt erreichte und danach allmählich abnahm, während MIP-1α im Laufe der Zeit kontinuierlich anstieg.
Chronische Entzündungen führen typischerweise zu einer Reihe von Mängeln an limbalen Stammzellen, wie z. B. einer Pax6-Herunterregulierung, einer verminderten Krt12-Expression und einer Plattenepithelmetaplasie des Hornhautepithels. Um zu überprüfen, ob das in dieser Studie entwickelte Modell diese Veränderungen im Hornhautepithel-Phänotyp induzieren kann, wurde eine Immunfluoreszenzfärbung für Krt12 (Abbildung 3A) und Pax6 (Abbildung 3B) auf dem Hornhautepithel durchgeführt. Die Krt12-Expression nahm mit anhaltender Entzündung ab, wobei an Tag 7 nur einzelne Krt12-positive Zellen beobachtet wurden, und die Pax6-Expression war im Hornhautepithel signifikant reduziert. Auf mRNA-Ebene waren die Expressionsniveaus der normalen Hornhautepithelmarker Krt12 (Abbildung 3C) und Pax6 (Abbildung 3D) an Tag 7 signifikant reduziert. Die Expressionsniveaus der Plattenepithelmetaplasiemarker Krt10 (Abbildung 3E) und Sprr1b (Abbildung 3F) waren jedoch an Tag 7 signifikant erhöht.
Wir verwendeten den Proliferationsmarker Ki67, um das Hornhautepithel zu färben, und die Ergebnisse zeigten eine signifikante Abnahme der Anzahl von Ki67-positiven Hornhautepithelzellen bis zum 7. Tag (Abbildung 4A). Der Status der Hornhautepithelstammzellen wurde mit Hilfe des kornealen limbalen Stammzell-spezifischen Markers ABCG2 (Abbildung 4B) und des epithelialen Vorläuferzellmarkers P63 (Abbildung 4C) bestimmt. Die ABCG2- und P63-Spiegel waren signifikant niedriger als in der Normalgruppe. Darüber hinaus haben wir den Goldstandard für Stammzellen, die klonale Kulturmethode, verwendet, um Veränderungen in limbalen Stammzellen der Hornhaut während dieses Prozesses zu bewerten. Wir beobachteten, dass die klonale Bildungsrate von limbalen Stammzellen der Hornhaut (Abbildung 4D) bis zum Tag 3 abnahm und bis zum Tag 7 signifikant abnahm, wobei die durchschnittliche Fläche der Klone kleiner wurde und an Tag 7 nur noch wenige Holoklonone sichtbar waren. Die koloniebildende Effizienz (CFE) wurde durch Zählung der Zellklone ermittelt, die im Mikroskopfeld der Kulturschale sichtbar waren. Die CFE (Abbildung 4E) zeigte eine allmähliche Verringerung der Anzahl der limbalen Stammzellen der Hornhaut unter entzündlichen Bedingungen. Dies deutet darauf hin, dass eine schwere Entzündung in diesem Modell zur Depletion der limbalen epithelialen Stammzellen der Hornhaut führt, und dieser Prozess induziert keine phänotypische Transformation der limbalen Stammzellen der Hornhaut, sondern stellt eher Probleme bei der Differenzierung oder Selbsterneuerung dar.
Das in dieser Studie verwendete Entzündungsmodell führte zu für LSCD charakteristischen Hornhautveränderungen, einschließlich einer ausgedehnten Infiltration von Entzündungszellen in die Hornhaut, einer Dysplasie des Hornhautepithels und einer gestörten oder verminderten Expression von Pax6 und Krt12 im normalen Hornhautepithel-Phänotyp. Darüber hinaus gab es einen signifikanten Anstieg der Krt10-mRNA-Expression. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass dieses experimentelle Modell gut geeignet ist, um die durch Entzündungen induzierte abnormale Differenzierung von Hornhautepithelstammzellen zu untersuchen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig1v2.jpg"> 
Abbildung 1: Etablierung des Entzündungsmodells. Um die Auswirkungen einer schweren Entzündung auf die Stammzellen der Hornhautepithele zu untersuchen, wurde ein Modell für schwere Entzündungen etabliert. (A) Nach der Induktion des Modells wurde die Hornhaut mit Hilfe von Spaltlampenfotografien beobachtet. Drei Tage nach der Modellierung war der Limbus der Hornhaut der Ratte stark ödematös, mit offensichtlicher Neovaskularisation und lokalisierter Hyperplasie, die typische Anzeichen für einen Mangel an limbalen Stammzellen der Hornhaut sind. Bis zum siebten Tag verschlimmerte sich das Hornhautödem allmählich und die Neovaskularisation nahm weiter zu. Mit dem Fortschreiten der Entzündung zeigten (B) die Hornhautneovaskularisation und (C) der Entzündungsindex einen kontinuierlichen Anstieg. *p &lt; 0,05, ****P &lt; 0,0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig1v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Die Entzündungsreaktion nach der Modellierung. Die durch das Modell induzierte Entzündungsreaktion in der Hornhaut wurde untersucht. (A) Die Hämatoxylin- und Eosinfärbung des Augapfels zeigte, dass sich während des Entzündungsprozesses sowohl das limbale als auch das zentrale Hornhautepithel verdickten und die Anordnung des Hornhautepithels ihre normale Morphologie verlor und Anzeichen einer atypischen Hyperplasie aufwies. (B) Der Makrophagenmarker ED1 (grün) und der Neutrophilenmarker PMN (rot) waren signifikant erhöht. Die RT-qPCR zeigte eine signifikante Erhöhung der Entzündungsfaktoren des Hornhautepithels (C) IL-1β und (D) MIP-1α. Blau steht für die Kernfärbung mit DAPI, Maßstabsbalken = 50 μm; p &lt; 0,001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig03v2.jpg"> 
Abbildung 3: Phänotypische Veränderungen von Zellen unter entzündlichen Bedingungen. Immunfärbung für (A, rot) KRT12 im limbalen Epithel und (B) PAX6. (C) Die KRT12-mRNA-Expressionsniveaus zeigen eine signifikante Abnahme mit fortschreitender Entzündung. (D) Die PAX6-mRNA-Expression zeigt eine abnormale Verteilung und eine deutliche Abnahme des limbalen Epithels unter entzündlichen Bedingungen. Umgekehrt steigt die mRNA-Expression von (E) Krt10 und dem abnormal differenzierten Hornhautepithelmarker (F) Sprr1b während der Entzündung signifikant an. Blau steht für die Kernfärbung mit DAPI, Maßstabsbalken = 50 μm; **p &lt; 0,01, ***p &lt; 0,001, ****p &lt; 0,0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig04.jpg"> 
Abbildung 4: Veränderungen limbaler Stammzellen im entzündlichen Zustand. Immunfluoreszenzbilder von (A, rot) Ki67 veranschaulichen Veränderungen in proliferierenden Zellen nach der Induktion einer Entzündung. Die mRNA-Expression des Stammzellmarkers (B) ABCG2 ist deutlich reduziert. Der Vorläuferzellmarker (C) p63 wird ebenfalls exprimiert. (D) Kristallviolett-Färbebilder und (E) CFE zeigen eine Abnahme der Anzahl limbaler Stammzellen unter entzündlichen Bedingungen. Blau zeigt mit DAPI gefärbte Zellkerne an; Die Maßstabsleiste beträgt 50 μm; *p &lt; 0,05, **p &lt; 0,01, ***P &lt; 0,001, ****P &lt; 0,0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="2">Name der Grundierung</td>
			<td colspan="3">Sequenz der Grundierung</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">TNF-a</td>
			<td>Vorwärts</td>
			<td colspan="3">5'-TCAGTTCCATGGCCCAGAC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rückwärts</td>
			<td colspan="3">5'-GTTGTCTTTGAGATCCATGCCATT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">IL-1β</td>
			<td>Vorwärts</td>
			<td colspan="3">5'-CCTCGTCCTAAGTCACTCGC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rückwärts</td>
			<td colspan="3">5'-GGCTGGTTCCACTAGGCTTT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Pax6</td>
			<td>Vorwärts</td>
			<td colspan="3">5'-GTGTTCAGTGCAGAGCCTTC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rückwärts</td>
			<td colspan="3">5'-TTCACCGTTGCTGTTCACTG-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Krt12</td>
			<td>Vorwärts</td>
			<td colspan="3">5'-AGCTAACGCGGAACTGGAAA-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rückwärts</td>
			<td colspan="3">5'-CTCTCCGCTCTTGGTGGTGAGGT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Krt10</td>
			<td>Vorwärts</td>
			<td colspan="3">5'-TCCGGGATCTGGAAGAGTCAA-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rückwärts</td>
			<td colspan="3">5'-TTGGGTAAGCTTTGCTAAGTGGAA-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Sprr1b</td>
			<td>Vorwärts</td>
			<td colspan="3">5'-CCATCCCAAGGCACCTGAG-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rückwärts</td>
			<td colspan="3">5'-TGCTGGTATGGTGATGGAGT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Aktin</td>
			<td>Vorwärts</td>
			<td colspan="3">5'-CACCCGCGAGTACAACCTTC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rückwärts</td>
			<td colspan="3">5'-CCCATACCCACCATCACACC-3'</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabelle 1: Sequenz der Primer, die für die quantitative RT-PCR verwendet werden.

Etablierung eines Modells für schwere Hornhautentzündungen bei Ratten auf der Grundlage einer Hornhautepithelkürettage in Kombination mit Hornhautnähten

Corneal inflammation, especially severe corneal inflammation, plays a significant role in the development of corneal limbal stem cell dysfunction. ...

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Etablierung eines Modells für schwere Hornhautentzündungen bei Ratten auf der Grundlage einer Hornhautepithelkürettage in Kombination mit Hornhautnähten (Video) | JoVE Journal

Etablierung eines Modells für schwere Hornhautentzündungen bei Ratten auf der Grundlage einer Hornhautepithelkürettage in Kombination mit Hornhautnähten

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