Name: Co-Kulturmodell mit zwei Arten von adhärenten Zelllinien (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T14:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 58 s
Description: Erfahren Sie ein kostengünstiges Co-Kulturmodell mit 3D-gedrucktem Gerüst für die weibliche Reproduktionsbiologie. Diese Methode nutzt humane embryonale Stammzellen und Ishikawa-Zellen zur Untersuchung von Implantationsmechanismen.

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<meta charset="utf8"></head><body>3D-gedrucktes Gerüstmodell zur Untersuchung der Einnistungsmechanismen von Embryonen

<ol><li>Iske, J., Elkhal, A., Tullius, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fetal-maternal+immune+interface+in+uterus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Immunol%22%5BJournal%5D)">The fetal-maternal immune interface in uterus transplantation.</a> Trend Immunol. 41 (3), 213-224 (2020).</li>
<li>Dey, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cues+to+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular cues to implantation.</a> Endocrine Rev. 25 (3), 341-373 (2004).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+culture+models+of+human+endometrium+for+studying+trophoblast-endometrium+interaction+during+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional culture models of human endometrium for studying trophoblast-endometrium interaction during implantation.</a> Reprod Biol Endocrinol. 20 (1), 120(2022).</li>
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<li>Zheng, J., Liu, L., Wang, S., Huang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sumo-1+promotes+Ishikawa+cell+proliferation+and+apoptosis+in+endometrial+cancer+by+increasing+sumoylation+of+histone+h4%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Gynecol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Sumo-1 promotes Ishikawa cell proliferation and apoptosis in endometrial cancer by increasing sumoylation of histone h4.</a> Int J Gynecol Cancer. 25 (8), 1364-1368 (2015).</li>
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<li>Gargett, C. E., Schwab, K. E., Deane, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+stem%2Fprogenitor+cells%3A+The+first+10+years%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod+Update%22%5BJournal%5D)">Endometrial stem/progenitor cells: The first 10 years.</a> Hum Reprod Update. 22 (2), 137-163 (2015).</li>
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<li>Palmara, G., Frascella, F., Roppolo, I., Chiappone, A., Chiadò, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+3d+printing%3A+Approaches+and+bioapplications%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Functional 3d printing: Approaches and bioapplications.</a> Biosens Bioelectron. 175, 112849(2021).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiscale+architecture+design+of+3d+printed+biodegradable+zn-based+porous+scaffolds+for+immunomodulatory+osteogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Multiscale architecture design of 3d printed biodegradable zn-based porous scaffolds for immunomodulatory osteogenesis.</a> Nat Comm. 15 (1), 3131(2024).</li>
<li>Arnold, J. T., Lessey, B. A., Seppälä, M., Kaufman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+normal+endometrial+stroma+on+growth+and+differentiation+in+Ishikawa+endometrial+adenocarcinoma+cells1%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of normal endometrial stroma on growth and differentiation in Ishikawa endometrial adenocarcinoma cells1.</a> Cancer Res. 62 (1), 79-88 (2002).</li>
<li>Casper, R. F., Yanushpolsky, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+endometrial+preparation+for+frozen+embryo+transfer+cycles%3A+Window+of+implantation+and+progesterone+support%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Optimal endometrial preparation for frozen embryo transfer cycles: Window of implantation and progesterone support.</a> Fertil Steril. 105 (4), 867-872 (2016).</li>
<li>Cooke, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+estrogen+receptors+mediate+mitogenic+effects+of+estradiol+on+uterine+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+Am%22%5BJournal%5D)">Stromal estrogen receptors mediate mitogenic effects of estradiol on uterine epithelium.</a> Proc Natl Acad Sci U S Am. 94 (12), 6535-6540 (1997).</li>
<li>Owusu-Akyaw, A., Krishnamoorthy, K., Goldsmith, L. T., Morelli, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mesenchymal-epithelial+transition+in+endometrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod+Update%22%5BJournal%5D)">The role of mesenchymal-epithelial transition in endometrial function.</a> Hum Reprod Update. 25 (1), 114-133 (2019).</li>
<li>Evans, J., Hutchison, J., Salamonsen, L. A., Azlan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+inflammasome+activation+accompanies+menstruation+and+may+have+implications+for+systemic+inflammatory+events+of+the+menstrual+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Endometrial inflammasome activation accompanies menstruation and may have implications for systemic inflammatory events of the menstrual cycle.</a> Hum Reprod. 35 (6), 1363-1376 (2020).</li>
<li>Gołąbek-Grenda, A., Olejnik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+modeling+of+endometriosis+and+endometriotic+microenvironment+-+challenges+and+recent+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Signal%22%5BJournal%5D)">In vitro modeling of endometriosis and endometriotic microenvironment - challenges and recent advances.</a> Cellular Signal. 97, 110375(2022).</li>
<li>Berger, C., Boggavarapu, N. R., Menezes, J., Lalitkumar, P. G. L., Gemzell-Danielsson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ulipristal+acetate+on+human+embryo+attachment+and+endometrial+cell+gene+expression+in+an+in+vitro+co-culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of ulipristal acetate on human embryo attachment and endometrial cell gene expression in an in vitro co-culture system.</a> Hum Reprod. 30 (4), 800-811 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x Hanks&Prime; Ausgewogene Salzlösung</td><td>Solarbio</td><td>H1046</td><td>1/10</td></tr><tr><td>12-Well, klare, TC-behandelte Platten</td><td>Corning</td><td>3513-25</td><td></td></tr> <tr><td>cm&sup2; Zellkulturflasche</td><td>Corning</td><td></td> <td>430639-Aluminium</td></tr> <tr><td></td><td>MarkForged</td><td>6061-T6-DMEM</td><td></td></tr><tr><td>/F12</td><td>Sigma-aldrich</td><td>D2906-Dulbecco</td><td></td></tr><tr><td>' s modifizierter Eagle Medium&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>10099141C</td><td>1/10</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Gibco</td><td>10099141C</td><td></td></tr><tr><td>ITS Premix</td><td>Biocoat</td><td>354350</td><td>1/100</td></tr><tr><td>Matrigel Matrix</td><td>Corning</td><td>354248</td><td>ECM</td></tr><tr><td>Metal X</td><td>Markforged</td><td>M F-PR-5000-Penicillin-Streptomycin</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>1/100</td></tr><tr><td>Rundes Deckglas</td><td>Biosharp</td><td>BS-18-RC-TrypLE</td><td></td></tr> <tr><td>Select (10X)</td><td>Gibco</td><td>A1217701</td><td>Dissoziationsenzym</td></tr></tbody></table>

co-kulturmodell mit zwei arten von adhärenten zelllinien

Co-culture Model Using Two Types of Adherent Cell Lines

Abbildung 1 zeigt das hausgemachte Gerüst für Zellobjektträger, das in diesem Prozess verwendet wird, das aus einem oberen Stützring besteht, der auf die Befestigung an Standard-12-Well-Zellkulturplatten zugeschnitten ist, ergänzt durch einen basalen Zellträgerhalter mit vier L-förmigen stabförmigen Strukturen.
Laut Abbildung 2 blieb die Dichte beider Zelltypen in der Kokulturbedingung (Abbildung 2A,B) nach 72 Stunden Co-Kultur niedrig; Die Dichte beider Zelltypen, die unabhängig voneinander kultiviert wurden, nahm jedoch signifikant zu (Abbildung 2C,D). Darüber hinaus war die Länge der co-kultivierten hES-Zellen im Vergleich zu unabhängig kultivierten hES-Zellen kürzer (Abbildung 2E-G).
Das Profil von Ishikawa-Zellen und hES-Zellen deutet auf Wechselwirkungen zwischen den beiden Zelltypen hin. Gleichzeitig ermöglicht uns das System, weiterhin Folgeexperimente an den einzelnen Zelllinien durchzuführen, einschließlich der immunchemischen Färbung und des Western Blots.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67314/67314fig01.jpg"> 
Abbildung 1: 3D-gedrucktes Deckglasgerüst, das im Versuchsprotokoll verwendet wurde. (A) Gerüst in Monoform. (B) Gerüst in binärer Form. (C) Abbildung, die die Platzierung des Deckglases auf dem Gerüst zeigt. (D) Abbildung, die die Platzierung des Gerüsts in einer Standard-12-Well-Platte zeigt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67314/67314fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67314/67314fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Profil von hESC- und Ishikawa-Zelllinien, die 3 Tage lang unter unterschiedlichen Bedingungen behandelt wurden. (A) Der Ishikawa-Samen auf dem Deckglas, der mit hESC durch ein Gerüst co-kultiviert wurde (Balken = 200 μm). (B) Der hES-Samen auf dem Deckglas wurde mit Ishikawa unter Verwendung eines Gerüsts co-kultiviert. (C) Die Ishikawa-Zellen wurden in einem komplementären Medium mit 10 % FBS kultiviert. (D) Die hES-Zellen wurden in einem komplementären Medium mit 10 % FBS kultiviert. (E) Die Zelldichte von hES-Zellen ist unter Co-Kulturbedingungen signifikant niedriger als unter unabhängigen Kulturbedingungen. (F) Die Zelldichte von ISHIKAWA-Zellen unter Co-Kulturbedingungen ist signifikant geringer als unter unabhängigen Kulturbedingungen. (G) Die Länge des hESC unter Co-Kulturbedingungen ist deutlich kürzer. N=3; , S&lt;0.05, zeigt der Fehlerbalken den Standardfehler an. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67314/67314fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Ergänzende Datei 1: Codierungsdatei für den 3D-Druck. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67314/3D-print.stl" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>

Co-Kulturmodell mit zwei Arten von adhärenten Zelllinien

Embryo implantation is affected by the interactions among different cell types in the mother-embryo interface. The direct and indirect communications ...

co-culture-model-using-two-types-of-adherent-cell-lines

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Traditional, zweidimensionalen Zellkultur-Techniken oft in veränderten Eigenschaften in Bezug auf die Differenzierung Marker, Zytokine und Wachstumsfaktoren führen. Dreidimensionale Zellkulturen in den rotierenden Zellkultursystem (RCCS) wiederherstellt Expression vieler dieser Faktoren, wie hier mit einem extravillösen Trophoblasten-Zelllinie gezeigt.

Rotierende Cell Culture Systems für Human Cell Culture: Human Trophoblastzellen als Modell

Quelle: Calatayud Arroyo, M., et al. Bewertung der Lebensfähigkeit eines synthetischen bakteriellen Konsortiums an der in-vitro-Darm-Wirt-Mikroben-Schnittstelle. J. Vis. Exp. (2018).Dieses Video demonstriert ein in-vitro-Darm-Host-Mikroben-Modell zur Untersuchung der bakteriellen Lebensfähigkeit. Eine Kokultur von Caco-2- und HT29-MTX-Zellen wird mit Bakterien inkubiert, die unter simulierten Verdauungsbedingungen vorbehandelt wurden. Die Integrität der Epithelbarriere wird mit...

In-vitro-Darmmodell zur Bewertung bakterieller Adhäsion und Internalisierung

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Co-Kultur in drei Dimensionen, das nützlich ist, um multizelluläre Interaktionen und extrazelluläre Matrix-abhängige Modulation des Verhaltens von Krebszellen zu untersuchen. In diesem experimentellen Modell werden Krebszellen auf Kollagengelen kultiviert, die in humane krebsassoziierte Fibroblasten eingebettet sind.

Dreidimensionale Co-Kultur-Modell für Tumor-Stroma-Interaktion

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Entwicklung eines Insert Co-Kultursystem von zwei Cellular Typen in der Abwesenheit von Zell-Zell-Kontakt

Wir haben einen durchlässigen mikroporösen Membraneinsatz angepasst, um die Tumormikroumgebung (TME) nachzuahmen. Das Modell besteht aus einer gemischten Zellkultur, ermöglicht die vereinfachte Generierung hochangereicherter individueller Zellpopulationen ohne Verwendung von Fluoreszenzmarkierung oder Zellsortierung und ermöglicht die Untersuchung der interzellulären Kommunikation innerhalb der TME unter Normal- oder Stressbedingungen.

Ein Mimic des Tumor-Microenvironment: Eine einfache Methode für Enriched Zellpopulationen Generierung und Untersuchung der interzellulären Kommunikation

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Passagierung FARBEN humanen embryonalen Stammzellen-Linien mit Trypsin

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