Name: Intravitale longitudinale Bildgebung der Gefäßdynamik im Schädeldachknochenmark (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: Erfahren Sie die intravitalen Bildgebungsmethoden zur Untersuchung der Gefäßdynamik im Schädeldachknochenmark. Diese Technik ermöglicht die Langzeitbeobachtung von Blutgefäßen bei normaler und pathologischer Hämatopoese in vivo.

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<ol><li>Lo Celso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+tracking+of+individual+haematopoietic+stem%2Fprogenitor+cells+in+their+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche.</a> Nature. 457 (7225), 92-96 (2009).</li>
<li>Pittet, M. J., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging.</a> Cell. 147 (5), 983-991 (2011).</li>
<li>Itkin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+bone+marrow+blood+vessels+differentially+regulate+haematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Distinct bone marrow blood vessels differentially regulate haematopoiesis.</a> Nature. 532 (7599), 323-328 (2016).</li>
<li>Christodoulou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+imaging+of+native+haematopoietic+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal imaging of native haematopoietic stem and progenitor cells.</a> Nature. 578 (7794), 278-283 (2020).</li>
<li>Upadhaya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+reveals+motility+of+adult+hematopoietic+stem+cells+in+the+bone+marrow+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging reveals motility of adult hematopoietic stem cells in the bone marrow niche.</a> Cell Stem Cell. 27 (2), 336-345.e4 (2020).</li>
<li>Hawkins, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+acute+leukaemia+exhibits+dynamic+interactions+with+bone+marrow+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-cell acute leukaemia exhibits dynamic interactions with bone marrow microenvironments.</a> Nature. 538 (7626), 518-522 (2016).</li>
<li>Duarte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+in+vivo+characteristics+of+acute+myeloid+leukemia+cells+behavior+by+intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Defining the in vivo characteristics of acute myeloid leukemia cells behavior by intravital imaging.</a> Immunol Cell Biol. 97 (2), 229-235 (2019).</li>
<li>Passaro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+permeability+in+the+bone+marrow+microenvironment+contributes+to+disease+progression+and+drug+response+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Increased vascular permeability in the bone marrow microenvironment contributes to disease progression and drug response in acute myeloid leukemia.</a> Cancer Cell. 32 (3), 324-341.e6 (2017).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLT3+inhibitors+upregulate+CXCR4+and+E-selectin+ligands+via+ERK+suppression+in+AML+cells+and+CXCR4%2FE-selectin+inhibition+enhances+anti-leukemia+efficacy+of+FLT3-targeted+therapy+in+AML%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">FLT3 inhibitors upregulate CXCR4 and E-selectin ligands via ERK suppression in AML cells and CXCR4/E-selectin inhibition enhances anti-leukemia efficacy of FLT3-targeted therapy in AML.</a> Leukemia. 37 (6), 1379-1383 (2023).</li>
<li>Pendleton, E. G., Tehrani, K. F., Barrow, R. P., Mortensen, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+harmonic+generation+characterization+of+collagen+in+whole+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Second harmonic generation characterization of collagen in whole bone.</a> Biomed Opt Express. 11 (8), 4379-4396 (2020).</li>
<li>Dispositif de liaison d'un animal de laboratoire à au moins un système d'expérimentation, et procédé de fixation d'un tel dispositif. France patent. , WO/2021/123449 (2021).</li>
<li>Horton, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia+induced+by+MLL-ENL+is+cured+by+oncogene+ablation+despite+acquisition+of+complex+genetic+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia induced by MLL-ENL is cured by oncogene ablation despite acquisition of complex genetic abnormalities.</a> Blood. 113 (20), 4922-4929 (2009).</li>
<li>Scott, M. K., Akinduro, O., Lo Celso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+4-dimensional+tracking+of+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+adult+mouse+calvarial+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo 4-dimensional tracking of hematopoietic stem and progenitor cells in adult mouse calvarial bone marrow.</a> J Vis Exp. (91), e51683(2014).</li>
<li>Jung, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+mouse+bone+marrow%3A+Hemodynamics+and+vascular+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of mouse bone marrow: Hemodynamics and vascular permeability.</a> Methods Mol Biol. 1763, 11-22 (2018).</li>
<li>Le, V. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+longitudinal+visualization+of+bone+marrow+engraftment+process+in+mouse+calvaria+using+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo longitudinal visualization of bone marrow engraftment process in mouse calvaria using two-photon microscopy.</a> Sci Rep. 7, 44097(2017).</li>
<li>Spencer, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+measurement+of+local+oxygen+concentration+in+the+bone+marrow+of+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Direct measurement of local oxygen concentration in the bone marrow of live animals.</a> Nature. 508 (7495), 269-273 (2014).</li>
<li>Yang, M., Mahanty, A., Jin, C., Wong, A. N. N., Yoo, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+metabolic+imaging+for+sensitive+and+robust+monitoring+of+anti-CD47+immunotherapy+response+in+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Label-free metabolic imaging for sensitive and robust monitoring of anti-CD47 immunotherapy response in triple-negative breast cancer.</a> J Immunother Cancer. 10 (9), e005199(2022).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+strain-specific+morphogenesis+and+angiogenesis+of+murine+calvaria+with+large-scale+optoacoustic+and+Ultrasound+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Tracking strain-specific morphogenesis and angiogenesis of murine calvaria with large-scale optoacoustic and Ultrasound Microscopy.</a> J Bone Miner Res. 37 (5), 1032-1043 (2022).</li>
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<li>Koh, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+skull+bone+marrow+is+an+expanding+and+resilient+haematopoietic+reservoir%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adult skull bone marrow is an expanding and resilient haematopoietic reservoir.</a> Nature. 636 (8041), 172-181 (2024).</li>
<li>Kolabas, Z. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+molecular+profiles+of+skull+bone+marrow+in+health+and+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct molecular profiles of skull bone marrow in health and neurological disorders.</a> Cell. 186 (17), 3706-3725.e9 (2023).</li>
<li>Rosenhain, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preclinical+micro-computed+tomography+database+including+3D+whole+body+organ+segmentations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Data%22%5BJournal%5D)">A preclinical micro-computed tomography database including 3D whole body organ segmentations.</a> Sci Data. 5, 180294(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Amira</td><td>Thermo ScientificTM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anästhesie</td><td></td><td></td><td>Isofluran 2% bis 3%</td></tr><tr><td>Anästhesiemaske (Tiererkennung)</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anästhesiegerät</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B6. Cg-GT(ROSA)26Sortm9(CAG-tdTomate)Hze</td><td>Jackson-Laboratorien</td><td>MGI:3809523</td><td></td></tr><tr><td>CalvariaVue</td><td>Ymetry</td><td>https://ymetry.com/site/head-fixation-implants/44-mouse-head-fixation-implant-for-calvaria.html</td><td></td></tr><tr><td>Zahnzement</td><td>Kemdent</td><td>SONNE527</td><td></td></tr><tr><td>Dextran 500 kDa-Cy5&nbsp;</td><td>Tebu-bio</td><td>DX500-S5-1</td><td>3 mg/Maus</td></tr><tr><td>Dextran 70 kDa-TRITC</td><td>Sigma</td><td>Nr. T1162</td><td>3 mg/Maus</td></tr><tr><td>Desinfektionsmittel</td><td>MP-Labo</td><td>Dermidin-60ml</td><td></td></tr><tr><td>Elektrorasierer</td><td>Antenne</td><td>ISIS</td><td></td></tr><tr><td>Augengel</td><td>Ocry-Gel</td><td>10g</td><td></td></tr><tr><td>Fidschi&nbsp;</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>v 17. Mai 30</td><td></td></tr><tr><td>Fidschi-Stecker zur Brücke mit Imaris</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>Imaris_Bridge96.jar ; ImarisBridgeUtils.jar</td><td></td></tr><tr><td>Heizkasten&nbsp;</td><td>Dattelnund</td><td>Thermacage</td><td></td></tr><tr><td>Heizkissen für die Chirurgie</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bildgebendes Heizkissen & Rektumsonde</td><td>F. Haer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imaris v9.6.0</td><td>Oxford-Instrumente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Intrasite-Gel</td><td>Chinoxia</td><td>2390766</td><td></td></tr><tr><td>LAS AF Software</td><td>Leica</td><td>LAS X 3.5.7.23225</td><td></td></tr><tr><td>Medikation</td><td></td><td></td><td>Buprecare, 0,01 mg/kg</td></tr><tr><td>Objektiv HCX IRAPO L 25x/0,95 WASSER</td><td>Leica</td><td>506374</td><td></td></tr><tr><td>Kochsalzlösung Puffer (PBS 1x)</td><td>Sigma</td><td>Nr. P4417</td><td>Sterilisieren im Autoklaven</td></tr><tr><td>SP8 DIVE FALCON Multiphotonen-Mikroskop&nbsp;</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereotoxische Maske</td><td>Minerve</td><td>1201261</td><td></td></tr><tr><td>Sterilisator-Kügelchen</td><td>Sigma</td><td>Z742555</td><td></td></tr><tr><td>Werkzeuge für die Chirurgie</td><td>Moria</td><td>4877A; 2183</td><td></td></tr><tr><td>Überlebensdecke</td><td>SECURIMED</td><td>11006</td><td></td></tr><tr><td>Tupfer / Taschentücher</td><td></td><td></td><td>Sterilisieren im Autoklaven</td></tr><tr><td>Spritze 1 mL 26 G</td><td>BD Plastipak</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Temperaturregler</td><td>F. Haer</td><td>Artikel-Nr.: 40-90-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Nes-EGFP)33Enik Mäuse&nbsp;</td><td>Jackson-Laboratorien</td><td>MGI:5523870</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Pdgfb-icre/ERT2)1Frut Mäuse</td><td>Jackson-Laboratorien</td><td>MGI:3793852</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Cdh5-cre/ERT2)1Rha Mäuse</td><td>Jackson-Laboratorien</td><td>MGI:3848982</td><td></td></tr><tr><td>Ultraschall-Gel&nbsp;</td><td>Parker Laboratorien</td><td>Aquasonic 100</td><td></td></tr></tbody></table>

intravitale longitudinale bildgebung der gefäßdynamik im schädeldachknochenmark

Intravital Longitudinal Imaging of Vascular Dynamics in the Calvarial Bone Marrow

In Abbildung 1 und Abbildung 2 ist das CAD-Modell eines Titan-Kopffixationsimplantats dargestellt, das auf einem gescannten Mausschädel positioniert ist und der anatomischen Struktur des Schädels folgt und ein leichtes und biokompatibles Gerät bietet, das fest am Mikroskoptisch befestigt werden kann und die Stabilität auf zellulärer Ebene gewährleistet. Durch die Befolgung dieses Schritt-für-Schritt-Protokolls wird das Implantat stabil mit dem Schädel der Maus verbunden und kann durch seinen Schwalbenschwanz fest am Mikroskophalter befestigt werden, was einen flachen Bildgebungsbereich für die Flüssigkeitsretention und intravitale Beobachtung über die Zeit ermöglicht. Es kann mit einer Abdeckung verschlossen werden, um Schäden oder Infektionen der Wunde zu minimieren, und ermöglicht so eine wiederholte Bildgebung desselben Gewebebereichs über Wochen. Sobald sie wach ist, kann die Maus, die ein Kopfimplantat trägt, frei herumlaufen, füttern und eine regelmäßige Routine haben.
Abbildung 3 zeigt eine Kachelansicht des Schädeldach-BM-Gefäßsystems, das aus heterogenen Kapillaren besteht, einschließlich Arteriolen, Übergangskapillaren und Sinusoiden. Die Gefäße sind in eine komplexe Gewebemikroumgebung eingebettet und stehen in engem Kontakt mit der Knochenoberfläche und den perivaskulären mesenchymalen Zellen. Während der Entwicklung einer Leukämie können einzelne isolierte leukämische Zellen in der BM-Mikroumgebung in unmittelbarer Nähe der Gefäße nachgewiesen werden, und ihre Transplantation nimmt mit der Zeit zu, wodurch sich die Schädeldecke in späten Stadien der Erkrankung füllt.
Abbildung 4 zeigt, wie Bilder, die mit diesem Protokoll aufgenommen wurden, quantitative Daten liefern können, die mit statistischen Methoden analysiert werden können. Wir zeigen, wie man Gefäße mit dem IMARIS Filamentwerkzeug segmentiert und die Länge und den Durchmesser von Gefäßfragmenten sowie deren Geradheit misst. Auch die Korrelation dieser Parameter kann ausgewertet werden.
Abbildung 5 zeigt die longitudinale bildgebende Erfassung von zwei verschiedenen Positionen des Schädeldach-BM während des AML-Fortschreitens an den Tagen 4, 7 und 10, wobei Tag 10 mit einer ~50%igen Transplantation des BM mit leukämischen Zellen assoziiert war, gemessen mittels Durchflusszytometrie (nicht gezeigt). Wir können eine wichtige Umgestaltung der Größe der bereits bestehenden Gefäße sowie die Bildung neuer Gefäße in bestimmten Bereichen beobachten, die mit lokalem Knochenverlust verbunden sind.
In Abbildung 6 zeigen wir schließlich, wie die Gefäßpermeabilität als dynamischer Parameter gemessen werden kann, wobei die Zeitrafferbildgebung die Fähigkeit verschiedener Gefäßbarrieren zeigt, einen Fluoreszenzfarbstoff über die Zeit zu erhalten.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Design und Produktion eines biokompatiblen Kopfhalters auf Titanbasis. (A) Teile des Implantats in situ: 1 Beobachtungsring, 2 Zementierungsmerkmale, 3 Stabilisierungsanker, 4 Schwanz, 5 Schwalbenschwanz, 6 Gewindebohrungen, 7 Bregma. (B) Verbindung des Kopfimplantats mit dem Halter: 8 Fixierkörper, 9 Klemme, 10 Exzenterhebel, 11 Struktur, 12 Mikroskopobjektiv. (C) Verformung des Implantats gegen Last durch FEM-Simulation, bei der die maximale Verschiebung 0,23 μm bei 0,04 N Kraft beträgt. (D) Schutz der Abdeckung und ihrer Schraube. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Vorbereitung der Maus für die intravitale Bildgebung. (A) Blick auf das Kopfimplantat und den vor der Bildgebung chirurgisch freigelegten Bildgebungsbereich. (B) Kopfimplantat, das fest mit dem Schädel der Maus verbunden ist. (C) Die Maus ist im Aufwachkäfig mit geschlossener Abdeckung auf dem Kopfimplantat wach. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig03.jpg"> 
Abbildung 3: Intravitale Bildgebung des Gefäßsystems der Calvaria. (A) Z-Projektion der Kachelansicht des mit cdh5-DSRED markierten Gefäßsystems der Calvaria. (B) Vergrößern Sie die dargestellten Bereiche, um verschiedene Arten von Gefäßen zu beschreiben, die durch Pfeile, Arteriolen durch rote Pfeile, Übergangskapillaren durch orangefarbene Pfeile und Sinusoide durch gelbe Pfeile dargestellt werden. i) und ii) z-Projektionen von X μm Gewebe; iii) einzelne Scheibe. (C) Einzelne Ausschnitte aus mehreren Gesichtsfeldern von BM-Gefäßen, die die Knochenoberfläche (SHG), die perivaskulären Zellen (nes-GFP+) und das Gefäßlumen (dextran-TRITC) zeigen. (D) Vaskuläre Nische, die mit dem Fortschreiten der AML assoziiert ist. Repräsentative Ausschnitte der frühen (oben) und späten (unten) Zeitpunkte der AML-Entwicklung. MLL-AF9-Leukämie ist mit tdTOMATO (rote Pfeile) markiert, während Gefäße mit pdgfb-GFP (grüne Pfeile), Knochenoberfläche mit SHG und Makrophagen mit gelb (Autofluoreszenz, gelbes Sternchen) markiert sind. Maßstabsleisten = 200 μm (A), 40 μm (B,D-untere Platte), 50 μm (C). Abkürzungen: BM = Knochenmark; GFP = grün fluoreszierendes Protein; AML = akute myeloische Leukämie; EC= Endothelzellen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig04.jpg"> 
Abbildung 4: Quantifizierung der vaskulären Parameter. (A) Messung der vaskulären Parameter mittels IMARIS-Filamentwerkzeug in einer repräsentativen z-Projektion von Knochenmarkgefäßen, die mit TRITC-Dextran markiert sind. Linien- und Kegeldarstellungen werden angezeigt. (B) Quantifizierung der Schiffsparameter in dem in A gezeigten Bild. (C) Korrelation zwischen vaskulären Parametern, die eine gegensätzliche Korrelation zwischen Geradheit und Länge des Gefäßes zeigt (negativ, Spearman r = -3523; p &lt; 0,0001; R2 = 0,2102) vs. Durchmesser (positiv; Spearman r = 0,4110; p &lt; 0,0001; R2 = 0,1299). Maßstabsbalken = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig05.jpg"> 
Abbildung 5: Längsschnittdarstellung von zwei verschiedenen Positionen des BM der Calvaria über der AML-Entwicklung. Endothelzellen, die die Gefäße auskleiden, werden mit cdh5-GFP markiert, die Knochenoberfläche mit SHG und Makrophagen gelb (Autofluoreszenz). Dargestellt sind der Umbau bereits bestehender Gefäße (rote Pfeile) und die Bildung neuer Gefäße (gelbe Pfeile). Maßstabsbalken = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig06.jpg"> 
Abbildung 6: Gefäßpermeabilität. (A) Schematische Darstellung der Messung der Gefäßpermeabilität mit dem IMARIS-Oberflächenwerkzeug. (B) Z-Projektion des gleichen Bereichs, der über 1 h in Längsrichtung abgebildet wurde. (C) Quantifizierung der Gefäßpermeabilität innerhalb der in A dargestellten Bereiche. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig06large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Ergänzende Abbildung S1: Präparierter Schädel. Erstellen Sie in der Medianebene eine Achse, die tangential zum Schädeldach verläuft, und speichern Sie dann den vorbereiteten Schädel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_1_JoVE67332R1_screenfile5_prepared_skull.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzende Abbildung S2: Pläne im Abstand von 2 mm. Wie man einen Satz von gleichmäßig verteilten Ebenen (2 mm Abstand) über den Schädel erstellt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_2_JoVE67332R1_screenfile4_plans_2mm_spaced.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzende Abbildung S3: Beobachtbare Oberflächenkontur. Erstellen Sie eine Skizze in der Schädelbahn, und erstellen Sie einen birnenförmigen Spline von AP +6,5 bis -2, 6 mm Breite bei AP 0,0. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_3_JoVE67332R1_screenfile3_Observable_Surface_Contour.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzende Abbildung S4: Beobachtung vindow. Erstellen Sie eine Skizze in der Schädelebene, und zeichnen Sie eine 0,5 mm dicke C-Form, die mit dem Beobachtungsfenster verbunden ist. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_4_JoVE67332R1_screenfile1_1.4.1.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzende Abbildung S5: Klicken Sie auf Neue Studie. Navigieren Sie zur Registerkarte Simulation (falls sichtbar) oder gehen Sie zu Simulation | Studie. Wählen Sie im Dialogfeld Studie die Option Statisch als Studientyp aus. Klicken Sie auf OK , um die neue Studie zu erstellen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_5_JoVE67332R1_screenfile2_clic_new_study.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzende Abbildung S6: Rechtsklick, um ein Netz zu erstellen. Verfeinern Sie das Netz in Bereichen, in denen hohe Spannungen oder Verformungen zu erwarten sind. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_6_JoVE67332R1_screenfile6_right_clic_create_mesh.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>

Intravitale longitudinale Bildgebung der Gefäßdynamik im Schädeldachknochenmark

Intravital longitudinal fluorescence microscopy imaging has emerged as a crucial technique for studying dynamic biological processes, notably in the ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

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Die Art der Wechselwirkung zwischen hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen (HSPCs) und Knochenmark Nischen schlecht verstanden. Kundenspezifische Hardware-Modifikationen und eine mehrstufige Akquisitionsprotokoll ermöglichen den Einsatz von Zwei-Photonen-Mikroskopie und konfokaler Bild ex vivo markierten HSPCs innerhalb des Knochenmarks Bereichen referenziert, Tracking-Wechselwirkungen und Bewegung.

In-vivo-4-Dimensional-Tracking von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen im erwachsenen Maus Schädeldachknochenmark

Monozyten sind Schlüsselregulatoren der angeborenen Immunität und spielen eine entscheidende Rolle bei der Erneuerung des peripheren mononukleären phagozytischen Systems und im Falle von Entzündungen. Dieses Manuskript beschreibt das Verfahren der Echtzeit-Bildgebung des Schädeldachknochenmarks der Maus, um den Mobilisierungsmechanismus der Monozyten zu untersuchen.

Tracking-Maus-Knochenmark-Monozyten<em&gt; In-vivo-</em

Implantation von autologen und allogenen Knochentransplantaten bilden akzeptiert Ansätze zur Hauptgesichtsschädelknochenverlust zu behandeln. Doch die Wirkung der Transplantatzusammensetzung auf das Zusammenspiel zwischen den Neovaskularisation, Zelldifferenzierung und Knochenbildung, ist unklar. Wir präsentieren eine multimodale Bildgebungsprotokoll zum Ziel, die Angiogenese-Osteogenese Interdependenz im Transplantat Nähe aufzuklären.

Computertomographie und Optical Imaging von Osteogenesis-Angiogenese-Kopplung an Integration von Schädelknochen Autografts und Allografts Beurteilen

Dieser Artikel beschreibt eine Methode, mit der die Gefäßarchitektur im Gehirn mittels in vivo und ex vivo Zwei-Photonen-Mikroskopie quantifiziert werden kann.

Die Quantifizierung der zerebrale vaskuläre Architektur unter Verwendung von Zwei-Photonen-Mikroskopie in einem Mausmodell der HIV-induzierten Neuroinflammation

Mit Längs Zwei-Photonen - Mikroskopie Dieses Manuskript beschreibt ein Verfahren , um den Umbau des cerebrovasculature während Amyloid - Plaque - Akkumulation in vivo zu verfolgen. Ein ausgedünnten Schädel Vorbereitung ermöglicht die Visualisierung von Fluoreszenzfarbstoffen, das Fortschreiten von zerebrovaskulären Schädigung in einem Mausmodell der Alzheimer-Krankheit zu bewerten.

in Längsrichtung<em&gt; In Vivo</em&gt; Imaging des Cerebrovasculature: Bedeutung für ZNS-Erkrankungen

Das Ziel dieses Artikels ist es, eine Methode zu präsentieren, die ermöglicht eine 3-dimensionale Rekonstruktion des Baumes zerebrovaskuläre bei Mäusen nach Mikro berechnet, Tomographie und Ermittlung der Volumina der gesamte Behälter-Segmente, die verwendet werden können, zu quantifizieren, zerebralen Vasospasmus in Murine Modelle der Subarachnoidalblutung.

Eine Volumetrische Methode zur Quantifizierung der zerebralen Vasospasmus in einem Mausmodell der Subarachnoidalblutung

Wir beschreiben hier die Methode zur Abbildung von Megakaryozyten und Blutplättchen im Knochenmark des Schädelknochens lebender Mäuse mittels Zwei-Photonen-Mikroskopie.

In Vivo Zwei-Photonen-Bildgebung von Megakaryozyten und Blutplättchen im Knochenmark des Mausschädels

Dieses Protokoll enthält Schritte zur Erfassung und Analyse fluoreszierender Kalziumbilder von Gehirnummantelungsperizyten und Blutflussdaten aus nahe gelegenen Blutgefäßen bei anästhesierten Mäusen. Diese Techniken sind nützlich für Studien der Wandzellphysiologie und können angepasst werden, um Kalziumtransienten in jedem Zelltyp zu untersuchen.

Gehirn Perizyten-Kalzium und hämodynamische Bildgebung bei transgenen Mäusen in Vivo

Die Rekrutierung von Leukozyten und Blutplättchen stellt eine wesentliche Komponente dar, die für das effektive Wachstum von Kollateralarterien während der Arteriogenese notwendig ist. Die Multiphotonenmikroskopie ist ein effizientes Werkzeug zur Verfolgung der Zelldynamik mit hoher räumlicher und zeitlicher Auflösung in vivo und geringerer Phototoxizität, um die Rekrutierung und Extravasation von Leukozyten während der Arteriogenese zu untersuchen.

Multiphotonen-Intravital-Bildgebung zur Überwachung der Leukozytenrekrutierung während der Arteriogenese in einem murinen Hintergliedmaßenmodell

Erfahren Sie die intravitalen Bildgebungsmethoden zur Untersuchung der Gefäßdynamik im Schädeldachknochenmark. Diese Technik ermöglicht die Langzeitbeobachtung von Blutgefäßen bei normaler und pathologischer Hämatopoese in vivo.

Intravitale longitudinale Bildgebung der Gefäßdynamik im Schädeldachknochenmark

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