Name: Ein Mausmodell der hämorrhagischen Transformation, die durch akute Hyperglykämie in Kombination mit transienter fokaler Ischämie induziert wird (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Erfahren Sie ein reproduzierbares Protokoll zur Induktion hämorrhagischer Transformation mittels MCAO/R bei C57BL/6-Mäusen mit akuter Hyperglykämie. Diese Methode zeichnet sich durch hohe Stabilität und niedrige Mortalität aus.

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<meta charset="utf8"></head><body>Hyperglykämie-verstärkte hämorrhagische Transformation bei tMCAO-induziertem Schlaganfall

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</ol>

<a href="https://app.jove.com/t/6615">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/67371">10.3791/67371</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/67371">A Mouse Model of Hemorrhagic Transformation Induced by Acute Hyperglycemia Combined with Transient Focal Ischemia</a>. The Protocol section was updated.

Erratum: A Mouse Model of Hemorrhagic Transformation Induced by Acute Hyperglycemia Combined with Transient Focal Ischemia

<table><tbody><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108380</td><td>Der Farbstoff für die TTC-Färbung</td></tr><tr><td>24-Well-Kulturplatte</td><td>Corning Incorporated CLS3527</td><td></td><td>Das Gefäß für die TTC-Färbung</td></tr><tr><td>30% Glukoseinjektion</td><td>Kelun Pharmaceutical</td><td>H42021188</td><td>Akute Hyperglykämie-Induktion</td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyd</td><td>Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd. </td><td>G1101</td><td>Gewebefixierung</td></tr><tr><td>5.0 Polyglykolsäure resorbierbares Nahtmaterial</td><td>Jinhuan Medical Co., Ltd</td><td>KCR531</td><td>Ausrüstung für die Chirurgie</td></tr><tr><td>96-Well-Kulturplatte</td><td>Corning Incorporated</td><td>CLS3596</td><td>EB-Gehaltsmessung</td></tr><tr><td>Anästhesiemaschine</td><td>Midmark Corporation</td><td>VMR</td><td>Anästhesie für Tiere</td></tr><tr><td>Antifade-Eindeckmedium mit DAPI</td><td>Beyotime Biotech</td><td>P0131</td><td>Halterung für Gewebeschnitte</td></tr><tr><td>Automatisierung-Gewebe-Dehydrierung&nbsp; Gerät</td><td>Leica Biosystems</td><td>TP1020</td><td>Dehydriertes Gewebe</td></tr><tr><td>Konfokale Mikroskopie</td><td>Leica Biosystems</td><td>STELLARIS 5</td><td>Bildaufnahme</td></tr><tr><td>Diclofenac-Natrium-Gel</td><td>MaYinglong Pharmazeutisches</td><td>H10950214</td><td>Analgesie für tierische</td></tr><tr><td>Eosin-Färbelösung</td><td>Servicebio Technology</td><td>G1001</td><td>Der Farbstoff für H& E-Färbung</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Aladdin</td><td>E104208</td><td>EB-Färbung</td></tr><tr><td>Augengel</td><td>Guangzhou Pharmazeutische</td><td>H44023098</td><td>Material für die Chirurgie</td></tr><tr><td>Fitc-Dextran</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60842-46-8</td><td>BHS-Permeabilitätsbewertung</td></tr><tr><td>Fluoreszenzmikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX51</td><td>Bilderfassung</td></tr><tr><td>Gefrorenes Mikrotom</td><td>Leica Biosystems</td><td>CM1900</td><td>Verwendung für Schnellschnitte</td></tr><tr><td>Blutzuckermessgerät</td><td>YuWell</td><td>580</td><td>Blutzuckermessung</td></tr><tr><td>Hämatoxylin-Färbelösung</td><td>Servicebio</td><td>G1004</td><td>Der Farbstoff für H& E Färbung</td></tr><tr><td>Jod</td><td>Lircon</td><td>20020059</td><td>Material für die Chirurgie</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Rwd Life Science</td><td>R510-22-10</td><td>Anästhesie für Tiere</td></tr><tr><td>Laserdoppler Blutflussmesser</td><td>Moor Instruments</td><td>moorVMS</td><td>Blutflussüberwachung</td></tr><tr><td>MCAO Nähte</td><td>Rwd Life Science</td><td>907-00023-01</td><td>Material für die Chirurgie</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Boehringer-Ingelheim</td><td>J20160020</td><td>Analgesie für Tiere</td></tr><tr><td>Mikrochirurgisches Instrumentenset</td><td>Rwd Life Science</td><td>SP0003-M</td><td>Geräte für die Chirurgie</td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>HM325</td><td>Herstellung von Gewebeschnitten</td></tr><tr><td>Mikrotomklinge</td><td>Leica Biosystems</td><td>819</td><td>Herstellung von Gewebeschnitten</td></tr><tr><td>Mupirocin Salbe</td><td>GlaxoSmithKline</td><td>H10930064</td><td>Anti-Infektion für Tiere</td></tr><tr><td>Neutraler Balsam</td><td>Absin Bioscience</td><td>abs9177</td><td>Dichtung für H& E Färbung</td></tr><tr><td>Paraffin-Einbettungszentrum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>EC 350</td><td>Herstellung von Paraffinblöcken</td></tr><tr><td>Pentobarbital-Natrium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td>Euthanasie für Tiere</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>Beyotime Biotech</td><td>C0221A</td><td>Spülung für Gewebeschnitt</td></tr><tr><td>Scanner</td><td>EPSON</td><td>V330</td><td>Gewebescan-Rasierer</td></tr><tr><td></td><td>Verifizierter Lieferant - Shenzhen Codos Elektrogeräte Co., Ltd.</td><td>CP-9200</td><td>Ausrüstung für die</td></tr><tr><td>Chirurgie Spektralphotometer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1510-02362</td><td>EB-Gehaltsmessung</td></tr><tr><td>Saccharoselösung</td><td>Shanghai Macklin Biochemical</td><td>57-50-1</td><td>Dehydrierung für Gewebe</td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Gewebeeinbettungsmedium</td></tr><tr><td>Trichloressigsäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6399</td><td>EB Messung des Inhalts</td></tr></tbody></table>

ein mausmodell der hämorrhagischen transformation, die durch akute hyperglykämie in kombination mit transienter fokaler ischämie induziert wird

A Mouse Model of Hemorrhagic Transformation Induced by Acute Hyperglycemia Combined with Transient Focal Ischemia

Das experimentelle Vorgehen dieser Studie ist in Abbildung 1 dargestellt. Kurz gesagt, die Mäuse wurden 60 Minuten lang einer Fadenokklusions-induzierten MCAO unterzogen, gefolgt von einer Reperfusion. Glukose (30 % in normaler Kochsalzlösung, 7,2 ml/kg Körpergewicht) wurde intraperitoneal 15 Minuten vor MCAO verabreicht. Die Blutzuckerspiegel wurden zu Studienbeginn (vor der Glukoseinjektion), unmittelbar nach der MCAO und zum Zeitpunkt der Reperfusion gemessen. Nach 24 Stunden Reperfusion wurden die Mäuse eingeschläfert und Hirngewebe zur Analyse des Infarktvolumens, der Leckage der Blut-Hirn-Schranke und der Histopathologie entnommen. Wie in Abbildung 2 dargestellt, wiesen alle vier Gruppen ähnliche Blutzuckerspiegel zu Studienbeginn auf. Die Mäuse, die Glukoseinjektionen erhielten, zeigten jedoch signifikant erhöhte Blutzuckerspiegel im Vergleich zu denen in den Kochsalzgruppen. 
Wie in Abbildung 3A dargestellt, wurde kein sichtbarer Infarkt an Hirnschnitten in der Gruppe Sham + Kochsalzlösung oder Sham + Glukose beobachtet, während ein ausgeprägter Hirninfarkt durch TTC-Färbung an Hirnschnitten aus beiden MCAO-Gruppen deutlich sichtbar wurde. Darüber hinaus wiesen Mäuse, die mit Glukose injiziert wurden, ein größeres Infarktvolumen auf als Mäuse, die in den verschiedenen MCAO-Gruppen mit normaler Kochsalzlösung injiziert wurden. Laut statistischer Analyse betrug das Infarktvolumen 20,8 % ± 0,8 % bzw. 45,1 % ± 1,6 % in der MCAO+-Kochsalzlösungsgruppe bzw. der MCAO+Glukose-Gruppe (Abbildung 3B).
Makroskopische Beobachtungen zeigten keine Blutungen in der linken Gehirnhälfte der MCAO + Kochsalzlösung Gruppe oder der Sham + Kochsalzlösung/Glukose-Gruppe. Im Gegensatz dazu wurden multiple punktförmige Blutungen in der ischämischen Hirnhälfte der MCAO + Glukosegruppe beobachtet (Abbildung 4A). Scan-Bilder von aufeinanderfolgenden koronalen Hirnschnitten zeigten, dass die Blutungen in der MCAO + Glukose-Gruppe innerhalb der Infarktregionen des Kortex und des Striatums verteilt waren (Abbildung 4A). Darüber hinaus zeigte die histologische Analyse mittels H&amp;E-Färbung eine signifikante Infiltration von Blutzellen in die Inthematregionen des Kortex und des Striatums in der MCAO+Glukose-Gruppe (Abbildung 4B). Umgekehrt wurde weder in der MCAO+Kochsalzlösung-Gruppe noch in der Sham+Kochsalzlösung/Glukose-Gruppe eine Infiltration von Blutzellen beobachtet.
Wie in Abbildung 5A dargestellt, wurde kein Austreten von EB in den Hirnschnitten der Sham + Glucose-Gruppe beobachtet. Beide MCAO-Gruppen zeigten jedoch eine deutliche Blaufärbung aufgrund von EB-Leckagen. Darüber hinaus zeigten diejenigen, die mit Glukose injiziert wurden, im Vergleich zu Mäusen, die mit Kochsalzlösung injiziert wurden, eine erhöhte EB-Permeabilität 24 Stunden nach MCAO. Im Vergleich zur Gruppe Sham + Kochsalzlösung zeigte die MCAO + Kochsalzlösung Gruppe einen signifikanten Anstieg des EB-Gehalts (4,2 μg/g ± 1,8 μg/g vs. 28 μg/g ± 0,7 μg/g, p &lt; 0,01), der in der MCAO + Glukosegruppe weiter erhöht war (28 μg/g ± 0,7 μg/g vs. 65,5 μg/g ± 6,0 μg/g, p &lt; 0,01) (Abbildung 5B). Wie in Abbildung 5C dargestellt, war die Leckage von FITC-Dextran in der ischämischen Großhirnrinde und im Striatum der MCAO + Glukose-Gruppe im Vergleich zur MCAO + Kochsalzlösung intensiver.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Schematische Darstellung des experimentellen Vorgehens. Den Mäusen wurde vor der MCAO-Operation intraperitoneal 30 % Glukose oder Kochsalzlösung injiziert, wobei der Blutzuckerspiegel während des Eingriffs überwacht wurde. 24 h nach der Reperfusion wurden die Mäuse für die pathologische und histologische Analyse euthanasiert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Veränderungen des Blutzuckerspiegels zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Injektion von 30 % Glukose. Die Daten werden als Mittelwert ± SD dargestellt. N = 10-20. p &lt; 0,001 im Vergleich zur Gruppe Scham + Kochsalzlösung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig03.jpg"> 
Abbildung 3: Hyperglykämie verschlimmerte die ischämische Hirnschädigung 24 h nach der Reperfusion. (A) Repräsentative Bilder von TTC-gefärbten Koronalschnitten, wobei normales Hirngewebe rosa-rot und ischämische Infarktbereiche grau-weiß erschienen. Maßstabsbalken = 5 mm. (B) Statistische Analyse des Infarktvolumens. Die Daten werden als Mittelwert ± SD dargestellt. N = 3. p &lt; 0,001 im Vergleich zur Gruppe Sham + Kochsalzlösung, ##p &lt; 0,01 im Vergleich zur Gruppe MCAO + Kochsalzlösung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig04.jpg"> 
Abbildung 4: Hyperglykämie erhöhte das HT-Risiko 24 Stunden nach der Reperfusion. (A) Repräsentative Bilder der groben Beobachtung und der koronalen Schnitte. Das Sternchen kennzeichnete die sichtbaren hämorrhagischen Herde. Maßstabsbalken = 5 mm. (B) Repräsentative H&amp;E-gefärbte Halbhirnbilder (oben) und vergrößerte Bilder (unten). Maßstabsleiste = 200 μm für Halbhirnbilder; Maßstabsleiste = 20 μm für vergrößerte Bilder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig05.jpg"> 
Abbildung 5: Hyperglykämie verschlimmerte die BHS-Störung 24 Stunden nach der Reperfusion. (A) Repräsentative Bilder der Evans-Blau-Leckage. Maßstabsbalken = 5 mm. (B) Statistische Analyse der Evans-Blau-Leckage in den ischämischen Hemisphären. Die Daten werden als Mittelwert ± SD, N = 3, **p &lt; 0,01, ***p &lt; 0,001 im Vergleich zur Sham+Kochsalzlösungsgruppe, ##p &lt; 0,01 im Vergleich zur MCAO + Kochsalzlösungsgruppe dargestellt. (C) Repräsentative Bilder von FITC-Dextran-gefärbter ischämischer Großhirnrinde und Striatum. Maßstabsleiste = 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Ein Mausmodell der hämorrhagischen Transformation, die durch akute Hyperglykämie in Kombination mit transienter fokaler Ischämie induziert wird

Hemorrhagic transformation (HT) is a serious complication that can occur as a result of thrombolytic therapy following ischemic stroke (IS), and it poses ...

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Medicine

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Dieses Video zeigt das Verfahren zur Replikation eines thrombotischen Schlaganfalls in einem Mausmodell, indem die rechte Arteria carotis communis blockiert und die Maus einer sauerstoffarmen Umgebung ausgesetzt wird. Dieser Prozess reduziert den Blut- und Sauerstofffluss zum Gehirn, was zur Bildung von Blutgerinnseln und Hirnschäden führt.

Induktion eines thrombotischen Schlaganfalls durch Hypoxie und Ischämie im Mausmodell

Eine standardisierte Maus-Modell der Subarachnoidalblutung durch intraluminale Kreis von Willis Perforation beschrieben. Schiff Perforation und Subarachnoidalblutung durch intrakranielle Drucküberwachung überwacht. Neben verschiedenen Vitalparameter erfasst und gesteuert werden, um physiologische Bedingungen aufrecht zu erhalten.

Einem Mausmodell der Subarachnoidalblutung

Verschiedene Mausmodellen der mittleren Hirnarterie (MCAO) sind weit verbreitet in der experimentellen Hirnforschung. Hier zeigen wir das Modell der transkraniellen Dauer distalen MCAO, die im Einklang kortikalen Infarkt von einer Größe, die von der Mehrheit der menschlichen ischämische Schlaganfälle auferlegt Schaden produziert.

Modellierung Schlaganfall bei Mäusen: Permanent Koagulation der distalen A. cerebri media

Thromboembolische Schlaganfallmodelle sind wichtige Werkzeuge zur Optimierung der Rekanalisationstherapie. In dieser Arbeit berichten wir über ein murines thrombotisches Schlaganfallmodell, das auf einem transitorischen zerebralen hypoxisch-ischämischen (tHI) Insult basiert, der Thrombose und Infarkt auslöst und positiv auf die durch Gewebeplasminogenaktivator (tPA) vermittelte Fibrinolyse in einem therapeutischen Fenster ähnlich wie bei Schlaganfallpatienten anspricht.

A thrombotischer Schlaganfall Modell basierend auf Transient zerebrale Hypoxie-Ischämie

Wir beschreiben ein Mausmodell für einen Schlaganfall, der durch den Verschluss der mittleren Hirnarterie mit einer silikonbeschichteten Naht induziert wird. Das Protokoll kann angewendet werden, um einen dauerhaften Verschluss oder eine vorübergehende Ischämie mit anschließender Reperfusion zu induzieren.

Die Induktion von ischämischem Schlaganfall und Ischämie-Reperfusion bei Mäusen die Mittel Artery Occlusion Technik und Visualisierung von Infarktbereich verwenden

Abdominal-solide Organtransplantationen gehören Pankreas-Transplantationen anfällig für schwere Ischämie Reperfusion Verletzungen-assoziierten Transplantat Schaden, führt schließlich zum frühen Transplantat Verlust zu entwickeln. Dieses Protokoll beschreibt ein Modell der murinen Pankreas-Transplantation mit einer Manschette-Naht-Technik, ideal geeignet für die Analyse dieser frühen, schädlichen Schäden.

Maus-Modell für die Bauchspeicheldrüse Transplantation mit einer modifizierten Manschette-Technik

Unkontrollierte Blutung, eine wichtige Ursache der Mortalität bei Trauma-Patienten, kann mit einer Standard-Leber-Laceration in einem Maus-Modell modelliert werden. Dieses Modell führt zu gleichbleibendem Blutverlust, Überleben und ermöglicht die Prüfung von hämostatischen Mitteln. Dieser Artikel bietet den Schritt-für-Schritt-Prozess, um dieses wertvolle Modell durchzuführen.

Unkontrollierter Hämorrhagischer Schock modelliert über Lebervernichtung bei Mäusen mit Echtzeit-Hämodynamik-Monitoring

Ein Maus-Modell der zerebralen Ischämie-Reperfusion wird gegründet, um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu untersuchen. Wir nach distal verbinden rechts mittlere zerebrale Arterie und rechts gemeinsame Halsschlagader und Blutfluss nach 10 oder 40 min der Ischämie wiederherstellen.

Zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-reperfusion

Hier beschreiben wir ein Mausmodell der retinalen Ischämie durch vorübergehende bilaterale gemeinsame Karotisarterienverschluss mit einfachen Nähten und einer Klemme. Dieses Modell kann nützlich sein, um die pathologischen Mechanismen der retinalen Ischämie zu verstehen, die durch kardiovaskuläre Anomalien verursacht wird.

Ein murines Modell der ischämischen Netzhautverletzung induziert durch transiente bilaterale gemeinsame Carotis ArterieNverschluss

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Etablierung eines distalen Modells für einen Verschluss der mittleren Hirnarterie (dMCAO) durch transkranielle Elektrokoagulation bei C57BL/6J-Mäusen vor und bewerten das anschließende neurologische Verhalten und die histopathologischen Merkmale.

Induktion eines akuten ischämischen Schlaganfalls bei Mäusen mit der Technik des distalen Mittelarterienverschlusses

Erfahren Sie ein reproduzierbares Protokoll zur Induktion hämorrhagischer Transformation mittels MCAO/R bei C57BL/6-Mäusen mit akuter Hyperglykämie. Diese Methode zeichnet sich durch hohe Stabilität und niedrige Mortalität aus.

Ein Mausmodell der hämorrhagischen Transformation, die durch akute Hyperglykämie in Kombination mit transienter fokaler Ischämie induziert wird (Video) | JoVE Journal

Ein Mausmodell der hämorrhagischen Transformation, die durch akute Hyperglykämie in Kombination mit transienter fokaler Ischämie induziert wird

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