Name: Ein Makrophagen-Tumor-Sphäroid-Co-Invasions-Assay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T13:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Lernen Sie einen Makrophagen-Tumor-Sphäroid-Co-Invasions-Assay in einer 3D-Kollagen-I-Matrix kennen. Diese Methode untersucht die Interaktion zwischen primären humanen Makrophagen und Tumorsphäroiden.

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<meta charset="utf8"></head><body>Untersuchung von Makrophagen-Tumor-Sphäroid-Interaktionen in einem 3D-Kollagenmatrix-Setup

<ol><li>Lendeckel, U., Venz, S., Wolke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages%3A+shapes+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22ChemTexts%22%5BJournal%5D)">Macrophages: shapes and functions.</a> ChemTexts. 8 (2), 12(2022).</li>
<li>Dallavalasa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+tumor+associated+macrophages+%28TAMs%29+in+cancer+progression%2C+chemoresistance%2C+angiogenesis+and+metastasis+-+Current+status%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">The role of tumor associated macrophages (TAMs) in cancer progression, chemoresistance, angiogenesis and metastasis - Current status.</a> Curr Med Chem. 28 (39), 8203-8236 (2021).</li>
<li>Pan, Y., Yu, Y., Wang, X., Zhang, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-associated+macrophages+in+tumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor-associated macrophages in tumor immunity.</a> Front Immunol. 11, 583084(2020).</li>
<li>Boutilier, A. J., Elsawa, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+Polarization+States+in+the+Tumor+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Macrophage Polarization States in the Tumor Microenvironment.</a> Int J Mol Sci. 22 (13), 6995(2021).</li>
<li>Wenzel, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+transfer+of+cancer+cell+invasiveness+via+endosome-mediated+protease+shedding%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Intercellular transfer of cancer cell invasiveness via endosome-mediated protease shedding.</a> Nat Commun. 15 (1), 1277(2024).</li>
<li>Anfray, C., Ummarino, A., Calvo, A., Allavena, P., Torres Andon, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+tumor-associated+macrophages+in+the+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of tumor-associated macrophages in the tumor microenvironment.</a> Methods Mol Biol. 2614, 93-108 (2023).</li>
<li>Hey, S., Wiesner, C., Barcelona, B., Linder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KIF16B+drives+MT1-MMP+recycling+in+macrophages+and+promotes+co-invasion+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">KIF16B drives MT1-MMP recycling in macrophages and promotes co-invasion of cancer cells.</a> Life Sci Alliance. 6 (11), e202302158(2023).</li>
<li>Wu, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+cancer+cell+invasion%3A+Patterns+and+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">Plasticity of cancer cell invasion: Patterns and mechanisms.</a> Transl Oncol. 14 (1), 100899(2021).</li>
<li>Shi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+insights+and+therapeutic+intervention+of+tumor+metastasis%3A+latest+developments+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Mechanism insights and therapeutic intervention of tumor metastasis: latest developments and perspectives.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 192(2024).</li>
<li>Li, G. N., Livi, L. L., Gourd, C. M., Deweerd, E. S., Hoffman-Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+and+morphological+changes+of+neuroblastoma+cells+in+response+to+three-dimensional+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Genomic and morphological changes of neuroblastoma cells in response to three-dimensional matrices.</a> Tissue Eng. 13 (5), 1035-1047 (2007).</li>
<li>Lin, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+cancer+cell+invasion+and+T-cell+cytotoxicity+in+3D+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Monitoring cancer cell invasion and T-cell cytotoxicity in 3D culture.</a> J Vis Exp. 160, e61392(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>15 &micro;-Slide Angiogenese&nbsp;</td><td>ibidi</td><td>81506</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Invitrogen</td><td>00-4555-56</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Phalloidin&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A12380</td><td></td></tr><tr><td>CD14 Mikrobeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-050-201</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Inkubator</td><td>Binder</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kollagen I Rattenschwanz&nbsp;</td><td>Corning</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>AppliChem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM (1x) + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>31966-021</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Anprotec</td><td>MS01Y71003</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Bio& Zelle</td><td>FBS. S 0613</td><td></td></tr><tr><td>Fidschi&nbsp;</td><td>NIH</td><td>ImageJ 2 Version: 2.3.0/1.53s</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyd 37%&nbsp;</td><td>252549-500ml</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>H1299-GFP Zelllinie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Humanserum Albumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5843</td><td></td></tr><tr><td>Leica TCS SP8 X</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Lymphozyten-Trennmedium (LSM) 1077</td><td>PromoCell</td><td>C-44010</td><td></td></tr><tr><td>MS-Säulen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>nicht-essentielle Aminosäuren&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>81275-034</td><td></td></tr><tr><td>TC-Platte 96 Well, BIOFLOAT, R&nbsp;</td><td>SARSTEDT</td><td>83,39,25,400</td><td></td></tr><tr><td>VORTEX-GEN 2&nbsp;</td><td>Wissenschaftliche Industrien</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ein makrophagen-tumor-sphäroid-co-invasions-assay

A Macrophage-Tumor Spheroid Co-Invasion Assay

Abbildung 1 zeigt einen H1299-GFP-Sphäroid, der an den jeweiligen Inkubationstagen in einer Kollagen-I-Matrix abgebildet wurde. Ein entsprechendes Hellfeldbild, das an Tag 0 aufgenommen wurde, zeigt auch die primären menschlichen Makrophagen, die mit dem Sphäroid kokultiviert wurden. Das repräsentative Bild, das an Tag 3 des Experiments aufgenommen wurde, wird nach der Verarbeitung vergrößert. Es werden verschiedene Parameter angegeben, die analysiert werden können, darunter die Anzahl der eindringenden Zellen, die Orte der kollektiven Invasion und der Sphäroidumfang. Die beigefügte Tabelle zeigt die Ergebnisse, die aus diesem Bild gewonnen wurden. Die Anzahl der erkannten Signale entspricht dem visuellen Eindruck. Es sind keine Störungen des zentralen Sphäroids sichtbar, was auf eine tatsächliche Invasion einzelner Krebszellen und nicht auf Zellen hindeutet, die aus Sphäroidtrümmern stammen. Die Ergebnisse verschiedener Sphäroide und Bedingungen können nun über statistische Analysen verglichen werden.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67374/67374fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Repräsentative Ergebnisse. (Bild oben) H1299-GFP-Sphäroide, aufgenommen an Tag 0, Tag 1, Tag 2 und Tag 3 der Inkubation in einer Kollagen-I-Matrix. (Mittleres linkes Feld) Ein Hellfeldbild des Sphäroids, das die in Kokultur gezüchteten primären menschlichen Makrophagen zeigt. (Mittleres rechtes Feld) Ein repräsentatives Bild, das an Tag 3 aufgenommen wurde, vergrößerte sich nach der Verarbeitung und zeigt die verschiedenen Parameter, die analysiert werden können (Sphäroidumfang in rot; manuell nachgezeichnet zur besseren Visualisierung). (Untere Platte) Die Ergebnisse, die aus dem Bild in der Mitte rechts erhalten wurden. Hinweis: Makrophagen sind nicht sichtbar, da nur der GFP-Kanal aufgezeichnet wurde, um das Verhalten der Krebszellen aufzuklären. Maßstabsbalken: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67374/67374fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Ein Makrophagen-Tumor-Sphäroid-Co-Invasions-Assay

The interaction of immune and cancer cells and their respective impact on metastasis represents an important aspect of cancer research. So far, only a few ...

Wir wollen das Zusammenspiel von Krebs- und Immunzellen untersuchen, um besser zu verstehen, wie sie während der Metastasierung interagieren. In den meisten Fällen sind in vivo Modelle der routinemäßige Weg, um Forschungsfragen zur 3D-Invasion von Krebszellen im Kontext des Immunsystems nachzugehen, oder isolierte Komponenten des Systems stehen im Fokus. Eine Methode, die die Analyse des zellulären Verhaltens ermöglicht, die die Komplexität der In-vivo-Situation nachahmt, aber eine direktere Manipulation spezifischer Umwelteigenschaften unter dem Mikroskop ermöglicht.Wir zeigen, dass unveränderte Krebszellen die Invasion in die 3D-Kollagen-I-Matrix reduzieren, wenn sie zusammen mit Makrophagen kultiviert werden, die für das Motorprotein KIF16B abgereichert wurden. Dies deutet auf eine Rolle des KIF16B-getriebenen Recyclings von Makrophagen-Oberflächenproteinen in der Tumormikroumgebung hin. Wir möchten unsere Methode so weiterentwickeln, dass der Matrixabbau an der Schnittstelle zwischen Makrophagen-Krebszellen sichtbar gemacht werden kann, um so ein besseres Verständnis der abbauenden und adhäsiven Mechanismen zu erhalten.Kultivieren Sie zunächst H1299-GFP-Zellen mit einem Krebszellmedium in einem 25 Quadratzentimeter großen Zellkulturkolben bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid, bis sie 80 % Konfluenz erreichen. Waschen Sie die Zellen einmal mit DPBS und fügen Sie einen Milliliter Trypsin-EDTA für zwei bis drei Minuten hinzu, bis sich die Zellen gelöst haben. Stoppen Sie die enzymatische Reaktion durch Zugabe von zwei Millilitern Krebszellmedien.Als nächstes zentrifugieren Sie die abgelöste Zellsuspension in einem 15-Milliliter-Röhrchen bei 245 g für fünf Minuten. Entfernen Sie den Überstand, der die Trypsinlösung enthält, bevor Sie das Pellet mit fünf Millilitern DPBS waschen. Nach der Zentrifugation wird das Pellet in fünf Millilitern Krebszellmedium wieder suspendiert.Zählen Sie die Zellen mit einer Neubauer-Kammer. Übertragen Sie 8.000 Zellen in eine 96-Well-Platte mit extrem geringer Adhäsion in einem Endvolumen von 25 Mikrolitern Krebszellmedium. Inkubieren Sie die Zellen drei Tage lang bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid.Überprüfen Sie nach drei Tagen die Sphäroide unter dem Mikroskop auf Gleichmäßigkeit. Nach der Entnahme der menschlichen Blutprobe werden 20 Milliliter Blut aus einem Transfusionsbeutel in ein 50-Milliliter-Reaktionsröhrchen überführt. Geben Sie 15 Milliliter Lymphozytentrennmedium in ein neues 50-Milliliter-Röhrchen.Übertragen Sie vorsichtig 20 Milliliter Blut ohne Mischen in das Lymphozytentrennmedium-haltige Röhrchen und zentrifugieren Sie das Gemisch bei 450 g für 30 Minuten bei vier Grad Celsius. Während der Zentrifugation 10 Milliliter kaltes RPMI 1640 Medium in ein neues 50-Milliliter-Röhrchen geben. Nach der Zentrifugation wird die dichte weiße Phase aus dem bluthaltigen Röhrchen in das vorbereitete RPMI-haltige Röhrchen überführt und bis zu 50 Milliliter mit kaltem RPMI gefüllt.Die Suspension wird bei 450 g 10 Minuten lang bei vier Grad Celsius zentrifugiert und der Überstand verworfen. Suspendieren Sie das Pellet wieder in 10 Millilitern kaltem RPMI und füllen Sie es bis zu 50 Milliliter mit RPMI 1640. Zentrifugieren Sie die Mischung erneut und suspendieren Sie das Pellet wieder in 50 Millilitern U/min.Zentrifugieren Sie die Probe erneut und suspendieren Sie das Zellpellet erneut in 1,5 Millilitern kaltem Monozytenpuffer. Geben Sie anschließend 250 Mikroliter Anti-CD14-Mikroperlen in die Zellsuspension und inkubieren Sie 15 Minuten lang auf Eis. Bereiten Sie während der Inkubation eine Trennsäule vor, indem Sie einen Filter an einem magnetischen Abscheidergestell befestigen.900 Mikroliter Monozytenpuffer zur Äquilibrierung in die Säule geben. Gießen Sie nach der Inkubation die Zellsuspension auf den Filter und lassen Sie sie durch die Schwerkraft in ein Abfallrohr fließen. Fügen Sie einen Milliliter Monozytenpuffer hinzu, um die Säule mit den an magnetische Kügelchen gebundenen Zellen zu waschen.Ersetzen Sie das Abfallrohr unter der Säule durch ein frisches 50-Milliliter-Röhrchen mit 20 Millilitern RPMI. Geben Sie drei Milliliter Monozytenpuffer in die Säule. Nehmen Sie die Säule aus dem Magnetgestell und befestigen Sie den Stempel.Drücken Sie die Zellen in das vorbereitete 50 Milliliter Röhrchen und füllen Sie es bis zu 30 Milliliter mit RPMI. Zählen Sie die Zellen mit einer Neubauer-Zählkammer unter einem Lichtmikroskop und stellen Sie die Zellzahl auf zwei mal 10 ein, um mit RPMI die Leistung von sechs Zellen pro Milliliter zu erreichen. Säen Sie einen Milliliter Zellsuspension in jede Vertiefung einer Sechs-Well-Kammer und inkubieren Sie zwei bis vier Stunden lang bei 37 Grad Celsius mit 5 % Kohlendioxid.Überprüfen Sie nach der Inkubation, ob die Zellen richtig haften, und ersetzen Sie das RPMI durch 1,5 Milliliter Monomedium. Die Inkubation wird bis zu sechs Tage fortgesetzt, bis sich die Monozyten zu Makrophagen differenzieren. Nachdem Sie primäre menschliche Makrophagen aus den Blutproben des Spenders in einer Sechs-Well-Platte gewonnen haben, fügen Sie 500 Mikroliter Accutase hinzu und inkubieren Sie 40 Minuten lang, um die Makrophagen zu lösen.Fügen Sie dann 500 Mikroliter Medium hinzu und geben Sie es zur Zentrifugation in ein 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen. Dann waschen Sie die Zellen einmal mit zwei Millilitern DPBS und zählen Sie sie mit einer Neubauer-Kammer. Verdünnen Sie die gewünschte Anzahl von Makrophagen in 40 Mikrolitern Kollagen, das ich mische, und wirbeln Sie das Röhrchen kurz ein.Um die Sphäroide zu waschen, geben Sie 300 Mikroliter DPBS in die Vertiefungen einer 96-Well-Platte. Verwenden Sie eine blaue Pipettenspitze von einem Milliliter mit einem abgeschnittenen Ende, um das Steroid mit DPBS aufzufangen. Sobald sich das Steroid in der Spitze abgesetzt hat, schieben Sie die Pipette kurz auf den Boden der Bildgebungskammer, um das Tumorsteroid durch Oberflächenspannung zu übertragen.Entfernen Sie so viel restliches DPBS wie möglich, das mit dem Steroid übertragen wurde. Geben Sie schnell 40 Mikroliter Kollagen-I-Makrophagenmischung in die Bildgebungskammer, die Steroide enthält. Inkubieren Sie die Platte 30 Minuten lang bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid unter feuchten Bedingungen, um die Kollagenmischung vollständig zu polymerisieren.Geben Sie nach der Polymerisation vorsichtig 25 Mikroliter Krebszellmedium in jede Vertiefung und setzen Sie die Inkubation drei Tage lang fort. Bilden Sie die lebende Probe mit einem Laser-Scanning-Mikroskop zu den gewünschten Zeitpunkten ab. Die Sphäroidfläche von H1299 GFP wurde am dritten Tag der Invasion mit 40.307 Quadratmikrometern gemessen, während der Sphäroidumfang 1700,17 Mikrometer betrug, was auf ein Wachstum im Laufe der Zeit hinweist.Es wurde eine kollektive Invasion von Krebszellen aus dem Sphäroid beobachtet, wobei 51 isolierte Partikel identifiziert wurden, die als Indikator für eine individuelle Invasion von Krebszellen dienen. Das Sphäroid behielt ein Aspektverhältnis von 1,10 und eine Zirkularität von 0,18 bei, was eine geringe Verformung zeigte.

a-macrophage-tumor-spheroid-co-invasion-assay

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Ein Test zur quantitativen Messung Transforming Growth Factor (TGF)-β-induzierte Invasion im 3-dimensionalen Kollagen-Gelen beschrieben. Dieser Assay nutzt die MCF10A Reihe von Zelllinien, die verschiedenen Stadien der Entwicklung von Brustkrebs darstellen. Diese Methode kann angenommen, um mit anderen Zelllinien verwendet werden und könnte verwendet werden, um andere potenzielle Aktivatoren oder Inhibitoren der Invasion zu untersuchen sein.

Spheroid Assay zur TGF-β-induzierte Invasion Measure

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Etablierung einer dreidimensionalen Co-Kultur von Tumor-Sphäroid und T-Zell. Es wird ein Agarose-Abguss mit Mikrovertiefungen hergestellt, die Tumor-Sphäroide enthalten, gefolgt von der Zugabe von T-Zellen. Nach der Inkubation ermöglicht dieser Aufbau die Untersuchung der Interaktion von T-Zellen mit Tumorsphäroiden in einer kontrollierten dreidimensionalen Umgebung.

Ein dreidimensionales Co-Kultur-Modell der Infiltration von T-Zellen in Tumor-Sphäroiden

Die Invasion des umgebenden normalen Gewebes ist ein definierendes Merkmal von bösartigen Tumoren. Wir stellen hier einen einfachen, halbautomatischen Mikroplatten-Assay der Invasion in eine natürliche 3D-Biomatrix zur Verfügung, der mit einer Reihe von Modellen fortgeschrittener menschlicher Krebsarten veranschaulicht wurde.

Dreidimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasionsassay

Diese Methode bewertet die Invasion von Krebszellen von Sphäroiden in eine umgebende 3D-Matrix.  Sphäroide werden über die Methode der hängenden Tropfenkultur erzeugt und dann in eine Matrix eingebettet, die aus Basalmembranmaterialien und Kollagen vom Typ I besteht.  Die Invasion aus den Sphäroiden wird anschließend überwacht.

Eine Krebszelle Spheroid Assay zur Invasion in einem 3D-Rahmen Beurteilen

Um das bösartige Verhalten von Krebs zu verstehen, müssen genaue Modelle erstellt werden, wie Tumorzellen mit Komponenten der Tumormikroumgebung, wie z.B. Makrophagen, interagieren. Hier beschreiben wir zwei Methoden zur Untersuchung der Interaktion von Glioblastomzellen mit tumorassoziierten Makrophagen und Mikroglia, bei denen die Wirkung auf die Glioblastominvasion bewertet wird.

Cokultur Assays zur Untersuchung Makrophagen und Mikroglia Stimulation von Glioblastom-Invasion

Die Mikroumgebung von Tumoren ist ein wesentlicher Bestandteil des Krebswachstums und-einmarsches. Um die Fortschreibung des Karzinoms zu imitieren, wird eine biologisch relevante menschliche Matrix benötigt. Dieses Protokoll führt eine Verbesserung für den in vitro dreidimensionalen spheroizider Invasionsuntergang ein, indem es eine menschliche, auf Gelotem basierende Matrix verwendet. Das Protokoll führt auch eine computergestützte Zellinvasion ein.

Voll menschliche Tumor-basierte Matrix im dreidimensionalen Spheroid-Invasions-Assay

Dieser Artikel stellt einen nützlichen In-vitro-Assay dar, um die Fähigkeit des konditionierten Mediums aus Tumorzellen zu bewerten, Makrophagen anzuziehen.

In Vitro-Assay zur Untersuchung der Tumor-Makrophage-Interaktion

Ziel dieses Protokolls ist es, ein 3D-In-vitro-Modell zu etablieren, um die Differenzierung krebsassoziierter Fibroblasten (CAFs) in einer tumormassenähnlichen Umgebung zu untersuchen, die in verschiedenen Analysesystemen wie Immunfluoreszenz, Transkription behandelt werden kann. Analyse und Lebenszellbildung.

Ein 3D-Spheroid-Modell als physiologischeres System für krebsassoziierte Fibroblasten Differenzierung und Invasion In Vitro-Studien

Hier präsentieren wir eine Methode mit durchlässigen Membranstützen, um die Untersuchung der berührungslosen Parakrinsignalisierung zu erleichtern, die von Tumorzellen verwendet wird, um die Immunantwort zu unterdrücken. Das System ist für die Untersuchung der Rolle von tumorsezerseten Faktoren bei der Dämpfung der Makrophagenaktivierung geeignet.

Untersuchung der Auswirkungen von tumorgeheimen Parakrinliganden auf die Makrophagenaktivierung mit Co-Culture mit permeableMembranen unterstützt

Der vorgestellte Ansatz bewertet gleichzeitig die Krebszellinvasion in 3D-Sphäroid-Assays und t-Zell-Zytotoxizität. Sphäroide werden in einem gerüstfreien Agarose-Multi-Mikrowell-Guss erzeugt. Co-Kultur und Einbettung in Typ I Kollagenmatrix werden innerhalb des gleichen Geräts durchgeführt, das Krebszellinvasion und T-Zell vermittelte Zytotoxizität zu überwachen ermöglicht.

Überwachung der Krebszellinvasion und T-Zell-Zytotoxizität in der 3D-Kultur

Hier wird ein Protokoll für die Herstellung eines sphäroiden Bildgebungsgeräts vorgestellt. Dieses Gerät ermöglicht eine dynamische oder Längsfluoreszenzbildgebung von Krebszellsphäroiden. Das Protokoll bietet auch ein einfaches Bildverarbeitungsverfahren für die Analyse der Krebszellinvasion.

Zeitaufgelöste Fluoreszenz-Bildgebung und Analyse der Krebszellinvasion im 3D-Sphäroid-Modell

Lernen Sie einen Makrophagen-Tumor-Sphäroid-Co-Invasions-Assay in einer 3D-Kollagen-I-Matrix kennen. Diese Methode untersucht die Interaktion zwischen primären humanen Makrophagen und Tumorsphäroiden.

Ein Makrophagen-Tumor-Sphäroid-Co-Invasions-Assay

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