Name: Nutzung der Kraft von microRNA-Ladungen in kleinen extrazellulären Vesikel, die aus frisch gefrorenen menschlichen Gehirnabschnitten freigesetzt werden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Erfahren Sie eine effiziente Methode zur Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus frisch gefrorenem menschlichem Hirngewebe zur Identifizierung von microRNA-Biomarkern für neurologische Erkrankungen.

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<meta charset="utf8"></head><body>Effiziente Isolierung von sEVs des Gehirns aus minimalem Gewebe zur Entdeckung von Biomarkern

<ol><li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+extracellular+vesicles+isolation+and+separation%3A+Current+techniques%2C+pending+questions+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Small extracellular vesicles isolation and separation: Current techniques, pending questions and clinical applications.</a> Theranostics. 12 (15), 6548-6575 (2022).</li>
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<li>Constantinides, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CSF+A%CE%B242+and+A%CE%B242%2F+A%CE%B240+ratio+in+Alzheimer%27s+disease+and+frontotemporal+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostics%22%5BJournal%5D)">CSF Aβ42 and Aβ42/ Aβ40 ratio in Alzheimer's disease and frontotemporal dementia.</a> Diagnostics. 13 (4), 783(2023).</li>
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<li>Yousif, G., Qadri, S., Parray, A., Akhthar, N., Shuaib, A., Haik, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+derived+neuronal+markers%3A+Immunoaffinity+isolation+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromolecular+Med%22%5BJournal%5D)">Exosomes derived neuronal markers: Immunoaffinity isolation and characterization.</a> Neuromolecular Med. 24 (3), 339-351 (2022).</li>
<li>Kumar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+microfluidic+approaches+for+the+isolation+and+detection+of+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22TRAC-Trend+Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Recent advances in microfluidic approaches for the isolation and detection of exosomes.</a> TRAC-Trend Anal Chem. 159, 116912(2023).</li>
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<li>Pirisinu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+long+journey+of+extracellular+vesicles+towards+global+scientific+acclamation%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Pharm+Bull%22%5BJournal%5D)">The long journey of extracellular vesicles towards global scientific acclamation.</a> Adv Pharm Bull. 13 (3), 489-501 (2023).</li>
<li>Bender, A., Sullivan, B. P., Lillis, L., Posner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+and+chemical-based+methods+to+inactivate+endogenous+blood+ribonucleases+for+nucleic+acid+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Enzymatic and chemical-based methods to inactivate endogenous blood ribonucleases for nucleic acid diagnostics.</a> J Mol Diagn. 22 (8), 1030-1040 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>Merck</td><td>A9418-100G</td><td></td></tr><tr><td>Zellmaske Orange Plasma Membran Färbemittel</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C10045</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase Typ-III</td><td>StemCell Technologies</td><td>07422</td><td></td></tr><tr><td>ExoSpin Säulen und Puffer</td><td>Zellführungssysteme Ltd.</td><td>EX01-50</td><td>Dieses Kit enthält SEC-Säulen, die in diesem Experiment verwendet wurden, Fällungspuffer und EV-freies PBS.</td></tr><tr><td>Halt Protease Inhibitor Cocktail (100x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>78429</td><td></td></tr><tr><td>Hibernate-E Medium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A1247601</td><td></td></tr><tr><td>Laemmli Probenpuffer (4x)</td><td>BioRad</td><td>1610747</td><td></td></tr><tr><td>Lexogen Small RNA-Seq Library Prep Kit</td><td>Lexogen</td><td>052.24</td><td>Dieses Kit enthält eine kleine RNA-Vorbereitungsreagenzbox mit i7 Index Primerplatte.&nbsp;</td></tr><tr><td>miRNeasy Micro Kit (50)</td><td>Qiagen</td><td>217084</td><td>Dieses Kit enthält hochwertiges RNA-Rückgewinnungs-Lysereagenz (Qiazol), RNA-Isolationssäulen, Isolationspuffer (RWT, RPE) und RNase-freies Wasser.</td></tr><tr><td>MiSeq Reagenzienkit v3</td><td>Illumina</td><td>MS-102-3001</td><td>Dies ist das Illumina Preparation Kit</td></tr><tr><td>Nitrozellulosemembran, 0,45 &mu; m</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>88018</td><td></td></tr><tr><td>PE/Dazzle 594 Anti-Human-CD63-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>143914</td><td>Wird für die fNTA-Analyse</td></tr><tr><td>verwendet PE/Dazzle 594 Anti-Human-CD81-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>349520</td><td>Wird für die fNTA-Analyse</td></tr><tr><td>verwendet PE/Dazzle 594 Anti-Human-CD9-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>312118</td><td>Wird für die fNTA-Analyse</td></tr> verwendet <tr><td>PhosSTOP</td><td>Merck</td><td></td><td></td>4906845001</tr><tr><td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25530049</td><td></td></tr><tr><td>Qubit microRNA Assay Kit</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Q32880</td><td></td></tr><tr><td>Qubit 1X dsDNA HS Assay Kit</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Q33230</td><td></td></tr><tr><td>Qubit 3.0 Fluorometer</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Q33216</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Lyse- und Extraktionspuffer</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>RNase A</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>EN0531</td><td></td></tr><tr><td>SuperSignal West Femto Substrat mit maximaler Empfindlichkeit</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>34094</td><td></td></tr></tbody></table>

nutzung der kraft von microrna-ladungen in kleinen extrazellulären vesikel, die aus frisch gefrorenen menschlichen gehirnabschnitten freigesetzt werden 

Harnessing the Power of MicroRNA Cargoes in Small Extracellular Vesicles Released from Fresh-Frozen Human Brain Sections

Um das Vorhandensein von BDsEVs zu bestätigen, wurden drei Techniken verwendet: Western Blotting, NTA und TEM (Abbildung 3). Die Western-Blot-Ergebnisse (Abbildung 3A und ergänzende Datei 1) zeigen das Vorhandensein aller fünf positiven Marker (CD9, CD63, CD81, Flot-1 und TSG101) und das Fehlen von Calnexin in sEVs (als Negativkontrolle verwendet), was bestätigt, dass keine Kontamination mit zellulärem Inhalt vorliegt. Erwartungsgemäß weisen die Gehirnhomogenate (BH) mehr Protein auf, als in den sEVs für die getesteten Marker beobachtet wurde. TEM-Bilder bestätigten die Morphologie der BDsEVs und ihre relative Größe innerhalb der Probe (Abbildung 3B), was durch eine Nanopartikel-Tracking-Analyse weiter bestätigt wurde (Abbildung 3C).
Abbildung 3C (oberes Bild) zeigt die isolierten Partikelgrößen, die zwischen 50 und 200 nm liegen. Aus den NTA-Daten, die das Streuergebnis als 100 % der dargestellten Partikel annehmen, repräsentiert CMO etwa 52,35 % der Partikel (Abbildung 3C, unteres Bild), die eine Lipiddoppelschicht aufweisen. Von diesen CMO-gefärbten Partikeln enthielten 34,66 % CD9, 15,49 % CD63 und 12,01 % CD81. Informationen zu den NTA-Steuerdaten finden Sie in der Ergänzungsdatei 2 .
Die Quantifizierungsdaten der isolierten RNA (Tabelle 2) zeigen Werte zwischen 3,24 und 8,76 (ng/μL), Werte, die bei der Generierung der cDNA-Bibliotheken normalisiert wurden. Die Analyseergebnisse von TapeStation (Abbildung 4) zeigen große Spitzen von etwa 120-160 bp, mit kleineren Spitzen darunter von etwa 50 bp und anderen kleineren Spitzen, die höher bei etwa 484 bp liegen.
Qualitätsprüfungen für die Next-Generation-Sequencing-Daten zeigen nach dem Trimmen des Adapters eine sehr hohe Qualität der Lesevorgänge (Abbildung 5A). Alle Sequenzpositionen weisen einen Phred-Score von &gt;30 auf, was auf Fehlerraten von weniger als 1 zu 1000 Nukleotiden hinweist. Abbildung 5B zeigt, dass die meisten Sequenzen etwa 21-22 bp groß sind, was dem erwarteten Größenbereich für microRNAs entspricht. Durch weitere nachgelagerte Kartierung (unter Verwendung von BowTie2) unter Verwendung des Flagstat-Analyse-Biotools Samtools wurden von 1.304.100 ausgerichteten Sequenzen 1.116.264 (85%) auf die microRNA-Regionen im menschlichen Genom kartiert (build hg38; Tabelle 3).
Von den gesamten miRNAs wurden 808 miRNAs in allen 3 Proben exprimiert, wobei 344 miRNAs auf alle drei Proben (~43 %), 5 auf Kontrolle 1 und Kontrolle 2, 183 auf Kontrolle 1 und Kontrolle 3 und 16 auf Kontrolle 2 und Kontrolle 3 aufgeteilt wurden (Abbildung 6). Aus diesen Daten geht hervor, dass die am höchsten exprimierten miRNAs über alle drei BDsEVs has-let-7b-5p, has-miR-143-3p, has-miR-30a-5p, has-miR-221-3p und has-let7i-5p sind. Ebenso sind die Top 5 der am wenigsten differentiell exprimierten miRNA in BDsEVs-Proben (Reads &gt;10) has-miR-128-2-5p, has-miR-182-5p, has-miR-193b-5p, has-miR-448 und has-miR-505-3p. Alle rohen und normalisierten Lesezahlen sind in der Zusatzdatei 3 angegeben.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67379/67379fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Arbeitsablauf bei der Gewebeverarbeitung. Die Abbildung zeigt den schrittweisen Prozess zur Isolierung von aus dem Gehirn stammenden sEVs (BDsEVs) aus frisch gefrorenen Hirnschnitten mittels Größenausschlusschromatographie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67379/67379fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67379/67379fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Arbeitsablauf bei der RNA-Isolierung aus BDsEVs. Die Abbildung zeigt den schrittweisen Prozess der Isolierung der Gesamt-RNA aus den BDsEVs, einschließlich des Vorbehandlungsschritts der Entfernung extrazellulärer RNA mit Proteinase K und RNase A. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67379/67379fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67379/67379fig03.jpg"> 
Abbildung 3: Arbeitsablauf für die Charakterisierung von BDsEV. Die Abbildung zeigt verschiedene Methoden zur Charakterisierung der BDsEVs. (A) Western Blot zum Nachweis von sEV-spezifischen Proteinmarkern. BH Gehirn homogenat. Calnexin ist eine Negativkontrolle für sEVs - das Fehlen in sEV und das Vorhandensein in BH bestätigen die Reinheit der sEV-Probe. Bei anderen Markern ist die Proteinmenge in BH erwartungsgemäß höher als in den sEV-Proben (20 μg Protein pro Well). (B) Repräsentatives Transmissionselektronenmikroskopie-Bild (TEM) für BDsEVs im 200 μM-Maßstab, das die erwartete Morphologie mit einer Lipid-Doppelschichtmembran bestätigt. (C) Größenverteilungsdiagramm für die Nanopartikel-Tracking-Analyse (NTA) für alle Partikel (oberes Bild). Jeder Datenpunkt stellt die Variation über drei Replikate dar. Normalisierte Anteile für biologische Partikel (sEVs) und relative Anteile für spezifische Oberflächenmarker (unteres Bild) (Daten als Mittelwert ± SEM von dreifachen Vertiefungen (n = 3)). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67379/67379fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67379/67379fig04.jpg"> 
Abbildung 4: Qualitätsprüfung für die Vorbereitung von cDNA-Bibliotheken. Tapestation-Analyse für Einzelproben nach der Erstellung der cDNA-Bibliothek. Die in jedem Diagramm angezeigten Peaks zeigen die Größe jeder Präparation (horizontale Achse, in bp) und die jeweilige Intensität jedes Peaks (vertikale Achse, FU) an. Die erwartete kleine RNA-Bibliothek erreicht ihren Höhepunkt bei etwa 120-160 bp, wie in der Abbildung zu sehen ist. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67379/67379fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67379/67379fig05.jpg"> 
Abbildung 5: Qualitätsprüfung für die miRnome-Sequenzierung. (A) FASTQC-Plot für die Lesequalität der einzelnen Proben nach dem Adaptertrimmen. Die horizontale Achse ist für die Nukleotidposition und die vertikale Achse für die Phred-Scores. Boxplots für jede Position zeigen die Verteilung des Phred-Scores über alle Lesevorgänge für jede Position. Alle Verteilungen innerhalb des grünen Bereichs bestätigen sehr hochwertige Daten (&gt;Q30), was auf eine qualitativ hochwertige Probenvorbereitung hindeutet. (B) Die Sequenzlängenverteilung für jede Probe zeigt, dass bei allen drei Proben die Mehrheit der Reads bei etwa 21-22 Nukleotiden lag - dem erwarteten Größenbereich für microRNA. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67379/67379fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67379/67379fig06.jpg"> 
Abbildung 6: Überlappung der MicroRNA-Expression über alle Proben hinweg. Die Anzahl der miRNAs, die aus jeder Probe nachgewiesen wurden (Lesezahl ≥ 10) und der spezifischen microRNAs, die in mehr als einer Probe geteilt werden, sind im Venn-Diagramm dargestellt. Alle rohen und normalisierten Lesevorgänge werden in der Zusatzdatei 3 angezeigt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67379/67379fig06large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antikörper-Epitop</td>
			<td>Verdünnungsfaktor des Antikörpers </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maus Anti-CD9</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maus Anti-CD63</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maus Anti-CD81</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maus Anti-Flotillin 1</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maus Anti-TSG101</td>
			<td>1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maus Anti-Calnexin</td>
			<td>1:10 000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Maus-Sekundärantikörper</td>
			<td>1:3000</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabelle 1: Antikörper-Epitope, die zur Charakterisierung von BDsEVs verwendet werden, und ihre jeweiligen Verdünnungsfaktoren. 
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Probe</td>
			<td>miRNA-Konzentration (ng/μL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>8.76</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>3.24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>5.33</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabelle 2: Quantifizierungsdaten von isolierter RNA.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Probe</td>
			<td>Ausgerichtete Sequenzen</td>
			<td>Kartierte miRNA</td>
			<td>Prozentsatz (%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kontrollprobe 1</td>
			<td>1 444 665</td>
			<td>1 133 437</td>
			<td>78.46</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kontrollprobe 2</td>
			<td>442 808</td>
			<td>381 631</td>
			<td>86.18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kontrollprobe 3</td>
			<td>2 024 828</td>
			<td>1 983 726</td>
			<td>97.97</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durchschnitt</td>
			<td>1 304 100.33</td>
			<td>1 166 264.67</td>
			<td>89.43</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabelle 3: Anzahl der ausgerichteten und erfolgreich kartierten miRNA-Sequenzen. 
Ergänzende Datei 1: Ergänzende Daten zur Western-Blot-Analyse. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67379/Supplementary%20File%201.pdf" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzende Datei 2: Ergänzende NTA-Kontrolldaten. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67379/Supplementary%20File%202.pdf" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzende Datei 3: Rohe und normalisierte Lesezahlen der miRNA-Expressionsanalyse. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67379/Supplementary%20File%203.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzende Datei 4: Daten zur ergänzenden Proteinkonzentration. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67379/Supplementary%20File%204.pdf" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>

Nutzung der Kraft von microRNA-Ladungen in kleinen extrazellulären Vesikel, die aus frisch gefrorenen menschlichen Gehirnabschnitten freigesetzt werden 

Small extracellular vesicles (sEVs) are crucial mediators of cell-cell communication, transporting diverse cargoes like proteins, lipids, and nucleic ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Die Profilierung der RNA-Expression in diskreten Regionen des Mausgehirns erfordert eine präzise und reproduzierbare Strategie zur Gewinnung von Gewebeproben. Hier wird ein Protokoll beschrieben, das sowohl die koronare Schnittführung des Gehirns als auch die mikrodissektionsbasierte Gewebeentnahme mithilfe eines Gewebecorers nutzt. Die Ausbeute und Qualität der gesamten RNA aus den resultierenden Proben bestätigt die Eignung der dargestellten Methode.

Non-Laser Capture Microscopy Ansatz für die Mikrodissektion von Discrete-Maus Hirnregionen für Gesamt-RNA Isolierung und Downstream Next-Generation Sequencing and Gene Expression Profiling

MicroRNAs haben eine bedeutende Rolle in der Struktur des Gehirns und Funktion. Hier beschreiben wir eine Methode, um durchzusetzen Hippocampus miRNA-Überexpression mit stereotaktische Injektion eines gentechnisch miRNA-Expression lentivirus. Dieser Ansatz kann als eine relativ schnelle Weg zu der Beurteilung...

Stereotaktische Injektion von microRNA-exprimierenden Lentiviren der Maus Hippocampus CA1 Region und Beurteilung der Behavioral Outcome

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Laser Capture Mikrodissektion von Angereichert Populationen von Neuronen oder Single Neurons zur Genexpressionsanalyse Nach Traumatic Brain Injury

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Liquor microRNA Profiling mittels quantitativer Real-Time PCR

MicroRNAs spielen eine entscheidende Rolle im Gehirn und sind potenzielle Ziele für die Modellierung der Neurodegeneration. Die Störung des miRNA-Spiegels ist jedoch aufgrund der kurzen Länge der miRNA und der Unzugänglichkeit des Hirngewebes eine Herausforderung. Dieses Video stellt eine Methode für das Antagomir-Design und die gehirnspezifische Verabreichung unter Verwendung eines Neuropeptids bei Mäusen vor.

Eine einfache Alternative zur stereotaktische Injektion für Hirnspezifische Knockdown von miRNA

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine mikrochirurgische Infusionstechnik für Mäuse, die effektiv Substanzen direkt über die Arteria carotis interna in das Gehirn abgibt.

Maus Mikroinfusionstechnik für Zielsubstanz Lieferung in das ZNS über Die Arteria carotis interna

Dieses Protokoll enthält einen Workflow, künstliche MicroRNA-vermittelten RNA-Interferenz mit Optogenetik Förderung insbesondere präsynaptischen Boutons mit reduzierten Expression von selektiven-Gens in intakte neuronale Schaltkreise zu kombinieren.

Kombination von Optogenetik mit künstlichen Mikro-RNAs, die Effekte gen Knockdown präsynaptischen Funktion innerhalb intakte neuronale Schaltkreise zu charakterisieren

Dieses Protokoll wird veranschaulicht, wie extrazelluläre MicroRNAs von Zellkulturmedien für kleine RNA Bibliotheksbau und Sequenzierung der nächsten Generation zu reinigen. Verschiedenen Qualitätskontrolle Checkpoints werden beschrieben, Leser zu verstehen, was beim Arbeiten mit niedrigen Eingabesamples wie ExRNAs zu erwarten.

Isolieren, Sequenzierung und Analyse von extrazellulären MicroRNAs aus humanen mesenchymalen Stammzellen

Wir bieten ein Protokoll zur Isolierung von Mikroglia aus verschiedenen sezierten Regionen einer erwachsenen Maushirnhälfte, gefolgt von halbautomatischer Bibliotheksvorbereitung für die tiefe einzelzellige RNA-Sequenzierung von Transkriptomen in voller Länge. Diese Methode wird dazu beitragen, die funktionelle Heterogenität von Mikroglia bei Gesundheit und Krankheit aufzuklären.

Isolierung von regionsspezifischer Mikroglia von einer Erwachsenenmaus Gehirnhälfte für tiefe einzellige RNA-Sequenzierung

Dieses Verfahren beschreibt die Sammlung diskreter gefrorener Hirnregionen, um hochwertiges Protein und RNA mit kostengünstigen und allgemein verfügbaren Werkzeugen zu erhalten.

Sammlung von gefrorenen Nagetier-Hirnregionen für Downstream-Analysen

Hier beschreiben wir ein Nukleofektionssystem, das die Effizienz der Genübertragung in expandierten neuralen Stammzellen (NSCs) verbessern soll, die aus der adulten subventrikulären Zone von Mäusen isoliert wurden. Die Ergebnisse zeigen, dass diese Methode die Genstörung in NSCs signifikant verbessert, die Wirksamkeit traditioneller Transfektionsprotokolle übertrifft und die Überlebensrate der Zellen erhöht.

Isolierung, Expansion und Nukleofektion von neuralen Stammzellen aus der adulten subventrikulären Zone der Maus

Erfahren Sie eine effiziente Methode zur Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus frisch gefrorenem menschlichem Hirngewebe zur Identifizierung von microRNA-Biomarkern für neurologische Erkrankungen.

Nutzung der Kraft von microRNA-Ladungen in kleinen extrazellulären Vesikel, die aus frisch gefrorenen menschlichen Gehirnabschnitten freigesetzt werden (Video) | JoVE Journal

Nutzung der Kraft von microRNA-Ladungen in kleinen extrazellulären Vesikel, die aus frisch gefrorenen menschlichen Gehirnabschnitten freigesetzt werden

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