Ein chirurgischer Ansatz zur Quetschung des Sehnervs in einem Kaninchenmodell

Hallo und herzlich willkommen. In diesem Video demonstrieren wir ein Protokoll für die Durchführung der Optikus-Crush (ONC) in einem Kaninchenmodell unter Verwendung von Standard-ophthalmochirurgischen Techniken. Diese experimentelle Technik generiert Modelle für kontrollierte Sehnervenverletzungen, die für die Untersuchung von Optikusneuropathien und die Erforschung therapeutischer Interventionen unerlässlich sind. Durch die Anwendung von ONC bei Kaninchen wollen wir unser Verständnis von Sehnervenverletzungen bei neurodegenerativen Erkrankungen verbessern und neue therapeutische Strategien entwickeln. Fahren wir mit dem detaillierten Protokollabschnitt fort. Legen Sie zunächst eine partielle Hornhautnaht durch die obere periphere Hornhaut in der Nähe des Limbus. Führen Sie eine überlegene Bindehaut von 10 bis zwei Uhr mit einer Westcott-Schere und einer 12-Millimeter-Pinzette durch. Präparieren Sie vorsichtig die Tenon-Kapsel, um den darunter liegenden oberen Rektus und die oberen Sehmuskeln freizulegen. Verwenden Sie einen Muskelhaken, um den Musculus rectus superior zu isolieren. Nun wird die doppelarmige Vicryl-Naht in voller Dicke durch die Mitte des Rectus superior geführt. Dieser wird mit einem chirurgischen Knoten gebunden. Die Nadel wird in Teildicke durch die Länge des Muskels geführt, von der Mitte bis zum Muskelrand. Die Nadel wird nach hinten geladen und dann in voller Dicke von der Unterseite des Muskels nach vorne geführt. Der Nadelhalter wird durch die Schlaufe geführt und die Nadel gegriffen. Wenn die Nadel gezogen wird, verriegelt die Naht diese Hälfte des Muskels. Die zweite Nadel wird verwendet, um die andere Hälfte des Muskels auf ähnliche Weise zu sichern. Verwenden Sie eine Westcott-Schere, um den oberen Rektusmuskel von der Kugel zu lösen, und achten Sie darauf, dass die Nähte nicht durchtrennt werden. Infraduzieren Sie den Globus vorsichtig mit einer Hornhautnaht und ziehen Sie die Muskelnaht überlegen zurück. Präparieren Sie vorsichtig das umgebende Orbitagewebe, um den Sehnerv vollständig freizulegen. Vermeiden Sie es, Gewebe zu durchtrennen, und verwenden Sie nur stumpfes Sezieren. Es ist Vorsicht geboten, um eine Beschädigung der Wirbelvene zu vermeiden. Ein Muskelhaken kann verwendet werden, um den Sehnerv zu isolieren. Der Sehnerv des Kaninchens ist leicht überlegen und von retroorbitalen Fetten umgeben. Der Nerv ist weiß und hat einen Durchmesser von etwa einem Millimeter. Klemmen Sie den Sehnerv mit einem Nadelhalter 60 Sekunden lang fest, um eine Quetschverletzung zu induzieren. Die Quetschstelle befindet sich etwa drei Millimeter hinter dem Sehnervenkopf, um eine Schädigung der Augenarterie zu vermeiden. Nähern Sie sich nun dem Musculus rectus superior wieder an seine ursprüngliche Position auf dem Globus an. Führen Sie die beiden Nadeln, die zuvor verwendet wurden, um den Musculus rectus superior teilweise durch den ursprünglichen Muskelansatz zu sichern. Ziehen Sie die Naht fest und platzieren Sie einen chirurgischen Knoten. Schließen Sie den Eingriff ab, indem Sie die Bindehaut mit drei neuroptiven Nähten an den Limbus nähen. Während der Genesung und der Zeit nach der Genesung sollten Sie dem Tier Analgesie und unterstützende Pflege zukommen lassen. Um die Sehfunktion zu beurteilen, messen wir das Verhältnis von Pupillendurchmesser zu Weiß-Weiß-Durchmesser unter mesopischen und Blitzlichtbedingungen. Vor ONC verengte sich die Pupille als Reaktion auf Licht erheblich. Bereits am ersten Tag nach ONC zeigte sich der Pupillendurchmesser kaum bis gar nicht verändert, was auf einen signifikanten Verlust der Sehfunktion hindeutet. Wir zeichneten auch visuell evozierte Potentiale (VEPs) sowohl aus dem Sehnervenquetsch als auch aus unbehandelten kontralateralen Augen auf. Flash-VEP-Messungen spiegeln die Reaktion von der Netzhaut über den Sehnerv bis zum Gehirn wider. Während die P1-Latenz konstant blieb, nahm die P1-Amplitude in den ONC-Augen signifikant ab, was auf einen signifikanten Verlust der Sehfunktion hinweist. Um den Axonverlust nach dem ONC-Verfahren zu beurteilen, verwendeten wir Fluoreszenzbildgebung von Schnitten des Sehnervs longitudinal. In der unbehandelten Gruppe zeigte der anterograde Axon-Tracer CTB eine kontinuierliche Markierung im gesamten Sehnerv. In der gequetschten Gruppe stoppte die Axonmarkierung jedoch an der Quetschstelle, was auf eine Nervenverletzung hinweist. Die Fluoreszenzintensitätsprofile bestätigten dies quantitativ und zeigten einen signifikanten Abfall der durchschnittlichen CTB-markierten Axonintensität distal der Quetschstelle. Abschließend haben wir eine Schritt-für-Schritt-Anleitung für das ONC-Verfahren in einem Kaninchenmodell vorgestellt, die eine zuverlässige Replikation gewährleistet. Wir beobachteten keine Komplikationen. Die Wirksamkeit der ONC-Technik bei der Entstehung von Sehnervenverletzungen und Sehbehinderungen wurde durch Pupillenreaktions- und VEP-Bewertungen validiert. Dieses Kaninchenmodell bietet eine kostengünstige Alternative zu größeren Tiermodellen, mit größerer anatomischer und physiologischer Ähnlichkeit mit dem Menschen. Danke für das Aufpassen.