Name: Entwicklung eines Kohl-Protoplasten-Systems zur Untersuchung der Hypoxietoleranz bei Brassica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: Erfahren Sie die Entwicklung eines Kohl-Protoplasten-Systems zur Untersuchung der Hypoxietoleranz bei Brassica. Diese Methode ermöglicht die Analyse molekularer Stressantworten auf Sauerstoffmangel.

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<meta charset="utf8"></head><body>Effizientes Kohl-Protoplasten-System zur Untersuchung von Mechanismen der Überschwemmungstoleranz

<ol><li>Tanoue, M., Hirabayashi, Y., Ikeuchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global-scale+river+flood+in+the+last+50+years%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Global-scale river flood in the last 50 years.</a> Sci Rep. 6 (1), 36021(2016).</li>
<li>Voesenek, L. aC. J., Bailey-Serres, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flood+adaptive+traits+and+processes%3A+An+overview%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Flood adaptive traits and processes: An overview.</a> New Phytol. 206 (1), 57-73 (2015).</li>
<li>Sheen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signal+transduction+in+maize+and+Arabidopsis+mesophyll+protoplasts%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Signal transduction in maize and Arabidopsis mesophyll protoplasts.</a> Plant Physiol. 127 (4), 1466-1475 (2001).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+transient+protoplast+system+for+analyzing+defense+gene+expression+and+protein-protein+interactions+in+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">A highly efficient transient protoplast system for analyzing defense gene expression and protein-protein interactions in rice.</a> Mol Plant Pathol. 7 (5), 417-427 (2006).</li>
<li>Yoo, S. -D., Cho, Y. -H., Sheen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+mesophyll+protoplasts%3A+A+versatile+cell+system+for+transient+gene+expression+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis mesophyll protoplasts: A versatile cell system for transient gene expression analysis.</a> Nat Protoc. 2 (7), 1565-1572 (2007).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+protoplast+isolation%2C+transformation%2C+and+its+application+in+sugarcane+%28Saccharum+spontaneum+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+J%22%5BJournal%5D)">Optimization of protoplast isolation, transformation, and its application in sugarcane (Saccharum spontaneum L).</a> Crop J. 9 (1), 133-142 (2021).</li>
<li>Adedeji, O. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+protocol+for+efficient+protoplast+isolation+and+transient+gene+expression+in+carnation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Hortic%22%5BJournal%5D)">Optimization of protocol for efficient protoplast isolation and transient gene expression in carnation.</a> Sci Hortic. 299, 111057(2022).</li>
<li>Lin, H. -Y., Chen, J. -C., Fang, S. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protoplast+transient+expression+system+to+enable+molecular%2C+cellular%2C+and+functional+studies+in+Phalaenopsis+orchids%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">A protoplast transient expression system to enable molecular, cellular, and functional studies in Phalaenopsis orchids.</a> Front Plant Sci. 9, (2018).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+mesophyll+protoplast+isolation+and+PEG-mediated+transient+expression+system+in+eggplant%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Hortic%22%5BJournal%5D)">A highly efficient mesophyll protoplast isolation and PEG-mediated transient expression system in eggplant.</a> Sci Hortic. 304, 111303(2022).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+protoplast+isolation+system+for+functional+gene+expression+and+characterization+using+petals+of+Camellia+oleifera%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Development of a protoplast isolation system for functional gene expression and characterization using petals of Camellia oleifera.</a> Plant Physiol Biochem. 201, 107885(2023).</li>
<li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+isolation+of+Populus+mesophyll+protoplasts+and+its+application+in+transient+expression+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Highly efficient isolation of Populus mesophyll protoplasts and its application in transient expression assays.</a> PLOS One. 7 (9), e44908(2012).</li>
<li>Gottschald, O. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TIAR+and+TIA-1+mRNA-binding+proteins+co-aggregate+under+conditions+of+rapid+oxygen+decline+and+extreme+hypoxia+and+suppress+the+HIF-1%CE%B1+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">TIAR and TIA-1 mRNA-binding proteins co-aggregate under conditions of rapid oxygen decline and extreme hypoxia and suppress the HIF-1α pathway.</a> J Mol Cell Biol. 2 (6), 345-356 (2010).</li>
<li>Cho, H. -Y., Chou, M. -Y., Ho, H. -Y., Chen, W. -C., Shih, M. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethylene+modulates+translation+dynamics+in+Arabidopsis+under+submergence+via+GCN2+and+EIN2%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Ethylene modulates translation dynamics in Arabidopsis under submergence via GCN2 and EIN2.</a> Sci Adv. 8 (22), eadm7863(2022).</li>
<li>Boudreau, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitation+light+dose+engineering+to+reduce+photo-bleaching+and+photo-toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Excitation light dose engineering to reduce photo-bleaching and photo-toxicity.</a> Sci Rep. 6 (1), 30892(2016).</li>
<li>Shcherbakova, D. M., Cox Cammer, N., Huisman, T. M., Verkhusha, V. V., Hodgson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+multiplex+imaging+and+optogenetics+of+Rho+GTPases+enabled+by+near-infrared+FRET%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct multiplex imaging and optogenetics of Rho GTPases enabled by near-infrared FRET.</a> Nat Chem Biol. 14 (6), 591-600 (2018).</li>
<li>Jiang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium+sulfite+is+a+potential+hypoxia+inducer+that+mimics+hypoxic+stress+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Inorg+Chem%22%5BJournal%5D)">Sodium sulfite is a potential hypoxia inducer that mimics hypoxic stress in Caenorhabditis elegans.</a> J Biol Inorg Chem. 16 (2), 267-274 (2011).</li>
<li>Lin, C. -C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SUB1A-1+anchors+a+regulatory+cascade+for+epigenetic+and+transcriptional+controls+of+submergence+tolerance+in+rice%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS+Nexus%22%5BJournal%5D)">SUB1A-1 anchors a regulatory cascade for epigenetic and transcriptional controls of submergence tolerance in rice.</a> PNAS Nexus. 2 (7), pgad229(2023).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bis-molybdopterin+guanine+dinucleotide+modulates+hemolysin+expression+under+anaerobiosis+and+contributes+to+fitness+in+vivo+in+uropathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bis-molybdopterin guanine dinucleotide modulates hemolysin expression under anaerobiosis and contributes to fitness in vivo in uropathogenic Escherichia coli.</a> Mol Microbiol. 116 (4), 1216-1231 (2021).</li>
<li>Liu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+light+and+hypoxia-induced+gene+zmPORB1+determines+tocopherol+content+in+the+maize+kernel%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The light and hypoxia-induced gene zmPORB1 determines tocopherol content in the maize kernel.</a> Sci China Life Sci. 67 (3), 435-448 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2-(N-Morpholino)-Ethansulfonsäure (MES)</td><td>PhytoTech Labs</td><td>M825</td><td>Für die Zubereitung von Enzymlösungen</td></tr><tr><td>228 Kohlsamen</td><td>Takii & Co., Ltd. (Kyoto, Japan)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mL Konisches Röhrchen</td><td>SPL Life Sciences</td><td>50050</td><td>Für die Zubereitung</td></tr> von <tr><td>Enzymlösungen 6-Well-Gewebekulturplatte</td><td>Alpha Plus</td><td>16106</td><td>Für die Protoplasten-Inkubation</td></tr><tr><td>70 &mu; m Zellen Sieb</td><td>Sorfa &nbsp;</td><td>SCS701</td><td>Für die Protoplastenfiltration</td></tr><tr><td>9 cm Petrischale</td><td>Alpha Plus</td><td>16001</td><td>Für die enzymatische Verdauung</td></tr><tr><td>Anaerobes Glas</td><td>HIMEDIA</td><td>Anaerobes Glas 3,5 L</td><td>Für die Behandlung von Hypoxie&nbsp;</td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td>Für die Herstellung von W5-Lösungen und die Beschichtung von Kulturplatten</td></tr><tr><td>Calciumchlorid</td><td>J.T.Baker</td><td>131301</td><td>Für die Herstellung von W5-Lösungen und PEG-Lösungen</td></tr><tr><td>Cellulase R10</td><td>Yakult</td><td></td><td>Für die Zubereitung von Enzymlösungen</td></tr><tr><td>Exsikkator</td><td>Tarsons</td><td>402030</td><td>Für die Vakuuminfiltration</td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Bioshop</td><td>GLU501</td><td>Für die Herstellung von W5-Lösungen</td></tr><tr><td>Messgerät für gelösten Sauerstoff</td><td>Thermo Scientific</td><td>Orion Star A223</td><td>Für die Sauerstoffmessung</td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1902</td><td>Für die Herstellung von Enzymlösungen, PEG-Lösungen und MMG-Lösungen</td></tr><tr><td>Dual-Luciferase Reporter Assay System</td><td>Promega</td><td>E1960</td><td>Für Dual-Luciferase-Reporter-Assay</td></tr><tr><td>EC-Oxyrase</td><td>Oxyrase Inc.</td><td>EC-0005</td><td>Zur Behandlung von Hypoxie</td></tr><tr><td>Fuyudori Kohlsamen</td><td>Kobayashi Seed Co., Ltd. (Kakogawashi, Japan)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hochgeschwindigkeits-Kühlzentrifuge</td><td>Hitachi</td><td>CR21GIII</td><td>Für die Protoplastenernte</td></tr><tr><td>Macerozym R10&nbsp;</td><td>Yakult</td><td></td><td>Für die Herstellung von Enzymlösungen</td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid Alfa</td><td>Aesar</td><td>12315</td><td>Für die Herstellung von MMG-Lösungen</td></tr><tr><td>Mikrozentrifuge</td><td>Hitachi</td><td>CT15RE</td><td>Für die Protoplastenernte</td></tr><tr><td>Mikroplatte</td><td>Greiner</td><td>655075</td><td>Für Dual-Luciferase-Reporter-Assay</td></tr><tr><td>Mikroplatten-Reader</td><td>Molekulare Geräte</td><td>SpectraMax Mini</td><td>Für Dual-Luciferase-Reporter-Assay</td></tr><tr><td>Millex 0,22 &mu; m Spritzenfilter</td><td>Merck</td><td>SLGP033RS</td><td>Für die Zubereitung von Enzymlösungen</td></tr><tr><td>Ölfreie Vakuumpumpe</td><td>Wippe</td><td>Rocker 300</td><td>Für Vakuuminfiltration</td></tr><tr><td>OxyFluor</td><td>Oxyrase Inc.</td><td>OF-0005</td><td>Für die Hypoxiebehandlung</td></tr><tr><td>Sauerstoffabsorberpaket</td><td>Mitsubishi Gas Chemical Company</td><td>AnaeroPack, MGCC1</td><td>Für die Hypoxiebehandlung</td></tr><tr><td>Sauerstoffkonzentrator</td><td>HIGHEST PERFECT</td><td>AII-X</td><td>Für die Sauerstoffblasbildung in W5-Lösung</td></tr><tr><td>Pflanzensubstrat</td><td>Klasmann-Deilmann</td><td>Potgrond H Substrat</td><td>Für die Zubereitung von Kohlsämlingen</td></tr><tr><td>Plasmid Midi Kit</td><td>QIAGEN</td><td>12145</td><td>Zur Aufreinigung von Plasmid-DNA in Transfektionsqualität&nbsp;</td></tr><tr><td>Polyethylenglykol 4000</td><td>Fluka</td><td>81240</td><td>Für die Protoplastentransfektion</td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>J.T.Baker 304001</td><td></td><td>Für die Herstellung von W5-Lösungen</td></tr><tr><td>Rasierklinge</td><td>Gillette</td><td></td><td>Für die Zubereitung von Kohlblattstreifen</td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Bioshop</td><td>SOD002</td><td>Für die Herstellung von W5-Lösungen</td></tr><tr><td>Natriumsulfit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0505</td><td>Zur Behandlung von Hypoxie</td></tr><tr><td>Wasserbad</td><td>Yihder</td><td>BU-240D</td><td>Zur Herstellung von Enzymlösungen</td></tr></tbody></table>

entwicklung eines kohl-protoplasten-systems zur untersuchung der hypoxietoleranz bei brassica

Development of a Cabbage Protoplast System for Studying Hypoxia Tolerance in Brassica

In dieser Arbeit wurde erfolgreich ein transientes Expressionssystem unter Verwendung von Kohlprotoplasten entwickelt (siehe Abbildung 1 für den Arbeitsablauf). Protoplasten wurden aus 2 bis 3 Wochen alten echten Kohlblättern geeigneter Größe (Abbildung 2A) von kommerziellen Kohlsorten 'Fuyudori' und '228' mittels Cellulase/Macerozym-Aufschluss und Dunkelvakuuminfiltration isoliert (Abbildung 2B,C). Um die hypoxischen Bedingungen zu mildern, die bei submersen Protoplasten während der Inkubation auftreten, wurde die W5-Lösung mit einem Ausströmer-Bubbler, der mit einer Sauerstoffmaschine verbunden war, mit Sauerstoff angereichert (Abbildung 2D). Dieser Prozess erhöhte die Konzentration des gelösten Sauerstoffs in der W5-Lösung signifikant von 7,84 mg· L-1 ± 0,05 mg· L-1 bis 29,18 mg· L-1 ± 0,43 mg· L-1 nach 5 min Sauerstoffsprudeln. Nach dem Isolationsprozess betrug die Ausbeute an Protoplasten 1,04 x 107 für 'Fuyudori' und 4,00 x 106 Protoplasten·g−1 Frischgewicht für '228' nach einer nächtlichen Verdauungsphase (Abbildung 2E). Anschließend wurde GFP als Reportergen verwendet, um die Transformationseffizienz der PEG-vermittelten Transfektionsmethode zu bewerten, wobei gezeigt wurde, dass die Transfektionseffizienz der Protoplasten bei Kohl in beiden Sorten über 40% lag (Abbildung 2F), was die Lebensfähigkeit dieses Systems bestätigt.
Darüber hinaus wurden Promotorkonstrukte der anaeroben Atmungsreaktionsgene von Kohlköpfen, BoADH1p::Luc und BoSUS1Lp::Luc Vektoren (Abbildung 3A), als Reporter in Kohlprotoplasten eingeführt, um die hypoxischen Induktionseffekte verschiedener Behandlungen zu bewerten. Verschiedene sauerstoffregulierende Behandlungen wurden auch auf dieses transiente Expressionsmodellsystem angewendet. Die Ergebnisse zeigten, dass alle sauerstoffabsorbierenden Behandlungen, mit Ausnahme von Natriumsulfit, erfolgreich eine Hypoxiereaktion in den Kohlprotoplasten induzierten (Abbildung 3B). Insbesondere stieg die Promotoraktivität von BoADH1 im Vergleich zur Kontrolle nach Behandlung mit EC-Oxyrase bzw. OxyFluor etwa um das 2,6- bzw. 3,2-fache und insbesondere um mehr als das 7,0-fache bei der Behandlung mit Sauerstoffabsorberpacken (Abbildung 3B). In ähnlicher Weise stieg die Promotoraktivität des BoSUS1L bei der Behandlung mit EC-Oxyrase bzw. OxyFluor um das 1,7-fache bzw. 1,8-fache, während die Behandlung mit dem Sauerstoffabsorberpack einen erheblichen Anstieg um das 5,6-fache induzierte (Abbildung 3B). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass das Sauerstoffabsorberpaket eine überlegene Wirksamkeit bei der Schaffung einer hypoxischen Umgebung in diesem Kohl-Protoplasten-Versuchssystem zeigt.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67444/67444fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Grafische Darstellung des Arbeitsablaufs bei der Protoplasten-Isolation. Diese Abbildung veranschaulicht den schrittweisen Prozess der Isolierung von Protoplasten aus Kohlblattgewebe. Der Arbeitsablauf wird visuell dargestellt, um ein klares Verständnis des Verfahrens zu vermitteln. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/67444fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67444/67444fig02v2.jpg"> 
Abbildung 2: Protoplastenisolierung aus dem Blattgewebe von Kohl. (A) Das Aussehen der kommerziellen Kohlsorten 'Fuyudori' und '228' im empfohlenen Wachstumsstadium ist dargestellt. Die zweiten, neu vollständig ausgebreiteten echten Blätter (gekennzeichnet durch die Pfeilspitze) von Kohlköpfen im 2-Blatt-Stadium werden für die Protoplastenisolierung ausgewählt. Maßstab: 2 cm. (B) Eine Vakuumpumpe und ein Exsikkator werden für den Vakuuminfiltrationsprozess von Kohlblattstreifen verwendet, wobei eine 30-minütige Infiltration vor dem enzymatischen Aufschluss durchgeführt wird. (C) Der Zustand der Kohlblattstreifen während der enzymatischen Verdauung ist dargestellt. Die vollständige Verdauung des Blattgewebes dauert insgesamt 4-16 h. Maßstab: 3 cm. (D) Die Fotos zeigen die Verwendung eines Sauerstoffkonzentrators, der mit einem Ausströmerstein verbunden ist, um die Konzentration des gelösten Sauerstoffs in der W5-Lösung zu erhöhen. Maßstabsbalken: 5 cm. (E) Über 4,00 x 106 Mesophyll-Protoplasten pro Gramm Frischgewicht (FW) wurden sowohl von den Kohlsorten 'Fuyudori' als auch von '228' gewonnen und unter dem Mikroskop betrachtet. Maßstabsbalken: 200 μm. (F) Die Transfektionseffizienz von Protoplasten beider Kohlgenotypen unter Verwendung eines konstitutiv exprimierten GFP-Reporters liegt bei über 40 %. Maßstab: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/67444fig02largev2.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67444/67444fig03.jpg"> 
Abbildung 3: Hypoxiereaktion von Kohlprotoplasten unter sauerstoffarmen Bedingungen. (A) Hypoxie-Response-Genkonstrukte, BoADH1 - und BoSUS1L-Promotoren , werden als Reporter verwendet, um die Hypoxie-Reaktion in 'Fuyudori'-Kohlprotoplasten zu bewerten. (B) Insgesamt 5 μg Reporterplasmide werden in "Fuyudori"-Kohlprotoplasten transfiziert, die in einer sauerstoffblasenartigen W5-Lösung inkubiert werden, bevor sie 4 Stunden lang einer Hypoxiebehandlung ausgesetzt werden. Der Sauerstoffgehalt wird während der Inkubation durch Zugabe von EC-Oxyrase (0,6 Einheiten·mL-1), OxyFluor (0,6 Einheiten·mL-1) und Natriumsulfit (1 g·mL-1) zur W5-Lösung reduziert. Die Behandlung mit dem Sauerstoffabsorberpack wird durchgeführt, indem zwei Sauerstoffabsorberbeutel in ein anaerobes 3,5-Liter-Glas gegeben werden. Die "CK"-Gruppe stellt die Kontrollgruppe ohne jegliche Hypoxiebehandlung dar. Nach der Behandlung werden Protoplasten für einen dualen Luciferase-Assay entnommen. Jeder Wert stellt den Mittelwert ± SD dar, wobei n = 4 ist. Unterschiedliche Buchstaben weisen auf signifikante Unterschiede (P &lt; 0,05) hin, basierend auf einer Einweg-ANOVA mit LSD-Post-hoc-Test. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/67444fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Tabelle 1: Zubereitung von Enzymlösung, W5-Lösung und MMG-Lösung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/Table%201.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>
Ergänzende Datei 1: Plasmiddetails für die Protoplastentransfektion. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/Plasmids.zip" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>

Entwicklung eines Kohl-Protoplasten-Systems zur Untersuchung der Hypoxietoleranz bei Brassica

As climate change brings more heavy rainfall, cabbage, a key Brassicaceae vegetable, faces significant yield losses due to flooding-induced hypoxia ...

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Biologie

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Isolation von Protoplasten aus Geweben von 14-Tage alte Keimlinge von Arabidopsis thaliana</em

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