Name: Bewertung abnormer wachstumsbezogener Gene von hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen durch Kombination der CRISPR/Cas9-Technologie mit der Zellzählung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Erfahren Sie die Kombination von CRISPR/Cas9 mit CCK-8-Assays zur Identifizierung abnorm wachsender Gene in hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen. Diese Methode unterstützt die Leukämieforschung.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,45 &mu; m Mikrofiltrationsmembran</td><td>Sartoriu</td><td>16533K-1</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL EP-Röhrchen</td><td>LABLEAD</td><td>MCT-150-CLD-1</td><td></td></tr><tr><td>10 cm Schale</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Röhrchen</td><td>LABLEAD</td><td>LXG1500</td><td></td></tr><tr><td>1 mL sterile Spritze</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2x Accurate Taq Master Mix (Farbstoff plus)</td><td>Accurate Biology</td><td>AG11010</td><td>Für die Kolonie-PCR</td></tr><tr><td>50-ml-Röhrchen</td><td>LABLEAD</td><td>LXG5000</td><td></td></tr><tr><td>5-Fluorouracil</td><td>Sigma</td><td>F6627-1</td><td></td></tr><tr><td>6-Well-Platte</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>70 & micro; m-Zellen-Sieb</td><td>Falcon&reg;</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Platten</td><td>Corning</td><td>3599</td><td></td></tr><tr><td>ACK Lysepuffer</td><td>Leagene</td><td>CS0001</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>BIODEE</td><td>DE0010</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Solarbio</td><td>A8180</td><td></td></tr><tr><td>Applied Biosystems Thermocycler für PCR</td><td>Thermofisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zellzählkit-8</td><td>Bimake</td><td>B34304</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>eppendorf</td><td>Centrifuge 5810R</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Inkubator</td><td>Thermo SCIENTIFIC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td></td></tr><tr><td>DNA Clean& Konzentrator-5</td><td>ZYMO</td><td>D4014</td><td></td></tr><tr><td>Dneasy Blut & Tissure Kit</td><td>Qiagen</td><td>69504</td><td></td></tr><tr><td>Esp3I (BsmbI)</td><td>NEB</td><td>R0580L</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>ExCell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 9.3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK-293T</td><td>ATCC; Virginia,USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEPEs</td><td>Sigma</td><td>V900477</td><td></td></tr><tr><td>KOD-Plus-Neo</td><td>TOYOBO</td><td>KOD-401</td><td></td></tr><tr><td>lentiGuide-Puro</td><td>Addgene</td><td>52963</td><td>Rückgratvektor</td></tr><tr><td>LSL-Cas9 Mäuse</td><td>Model Animal Forschungszentrum von NANJING UNIVERSITY&nbsp;</td><td></td><td></td>T002249</tr><tr><td>Mikroplatten-Absorptionsspektralphotometer</td><td>BIO-RAD</td><td>xMark&trade;</td><td></td></tr><tr><td>Nacl</td><td>Rhawn</td><td>R019772</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Solarbio</td><td>P1003</td><td></td></tr><tr><td>PEI</td><td>Proteintech</td><td>B600070</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin-Lösung, 100x</td><td>Solarbio</td><td>P1400</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Plasmid Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>Polybren</td><td>Beyotime</td><td>C0351</td><td></td></tr><tr><td>Polyinosimin-Polycytidylsäure-Natriumsalz</td><td>Sigma</td><td>P1530</td><td></td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick PCR-Aufreinigungskit&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>RekombinantMurineIL-3</td><td>Peprotech</td><td>213-13-10ug</td><td></td></tr><tr><td>RekombinantMurineIL-6</td><td>Peprotech</td><td>216-16-2ug</td><td></td></tr><tr><td>RekombinantMurineSCF</td><td>Peprotech</td><td>250-03-10ug</td><td></td></tr><tr><td>Reguläre Agarose</td><td>BIOWEST</td><td>BY-R0100</td><td></td></tr><tr><td>Alkalische Phosphatase (rSAP)</td><td>NEB</td><td>M0371S</td><td></td></tr><tr><td>SpectraMax QuickDrop Ultra-Mikro-Spektralphotometer</td><td>MOLECULAR DIVICES</td> Stbl3 Kompetente <td></td><td></td></tr><tr><td>Zellen</td><td>BioMed</td><td>BC108-01&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>T4 Polynukleotidkinase</td><td>NEB</td><td>M0201L</td><td></td></tr><tr><td>T4-Ligase</td><td>Takara</td><td>2011B</td><td></td></tr><tr><td>TIANprep Rapid Mini Plasmid Kit</td><td>TIANGEN</td><td>DP105-03</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Lösung</td><td>LABLEAD</td><td>C0040-100ml</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Trypton</td><td>OXOID</td><td>LP0042</td><td></td></tr><tr><td>WEHI-CM</td><td>Nanjing Fuksai Biotechnologie&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CBP50079 HEFE-EXTRAKT</td><td></td><td>OXOID LP0021</td><td></td></tr></tbody></table>

bewertung abnormer wachstumsbezogener gene von hämatopoetischen stamm- und vorläuferzellen durch kombination der crispr/cas9-technologie mit der zellzählung

Evaluation of Abnormal Growth-related Genes of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells by Combining CRISPR/Cas9 Technology with Cell Counting

Wirkung des Trp53-Knockouts auf die proliferative Kapazität von Maus-HSPCs Hier haben wir den Trp53-Knockout als Beispiel verwendet, um dieses Protokoll zu demonstrieren. Um den Effekt des Trp53-Knockouts auf die proliferative Kapazität von Maus-HSPCs zu untersuchen, verwendeten wir lentivirale Transfektion, um Trp53 sgRNA in Cas9-exprimierende Knochenmarkzellen einzuführen, die nach 5-FU-Behandlung mit HSPCs angereichert waren. Gl...

Bewertung abnormer wachstumsbezogener Gene von hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen durch Kombination der CRISPR/Cas9-Technologie mit der Zellzählung

Hematopoietic stem cells possess the ability for long-term self-renewal and the potential to differentiate into various types of mature blood cells. ...

evaluation-abnormal-growth-related-genes-hematopoietic-stem

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Gezielte gen bearbeiten CRISPR/Cas9 hat das Verständnis der biologischen Funktionen der Gene erheblich erleichtert. Hier nutzen wir die CRISPR/Cas9-Methodik zu Modell Calreticulin Mutationen in hämatopoetischen Zellen Zytokin-abhängige um ihre onkogenen Aktivität zu studieren.

Mit CRISPR/Cas9 gen untersuchen die Onkogene Aktivität des mutierten Calreticulin in Cytokine abhängigen hämatopoetischen Zellen bearbeiten

Ein Protokoll für schnelle CRISPR/Cas9-vermittelte gen Störung bei Maus und humane primäre hämatopoetische Zellen wird in diesem Artikel beschrieben. Cas9-SgRNA Ribonucleoproteins sind über Elektroporation mit SgRNAs erzeugt durch in-vitro- Transkription und kommerzielle Cas9 eingeführt. Hohe Wirkungsgrade Bearbeitung werden mit wenig Zeit und finanziellem Aufwand erreicht.

Hocheffiziente gen Störung der murinen und menschlichen hämatopoetischen Vorläuferzellen von CRISPR/Cas9

Dieses Manuskript beschreibt eine gruppierte regelmäßig dazwischen kurze palindromische wiederholt (CRISPR) CRISPR-Cas9-basierte Methode für eine einfache und rasche Untersuchung der Rolle der mehrere Kandidaten-Gene in der akuten myeloischen Leukämie (AML) Zellproliferation in Parallel. Diese Technik ist skalierbar und kann in anderen Krebszelllinien angewendet werden.

Untersuchung der genetischen Abhängigkeiten mit CRISPR-Cas9-Wettbewerb-Assays

Eine CRISPR/SgRNA-Bibliothek wurde zur Vernehmung Protein-kodierenden Gene angewandt. Die Machbarkeit einer SgRNA Bibliothek um die Funktion einer CTCF Grenze in Genregulation zu entdecken bleibt jedoch unerforscht. Hier beschreiben wir eine HOX Loci spezifische SgRNA Bibliothek um die Funktion von CTCF Grenzen in HOX Loci zu erhellen.

HOX Loci Focused CRISPR/SgRNA Bibliothek Screening identifizieren kritische CTCF Grenzen

Beschrieben werden Protokolle für die hocheffiziente Genombearbeitung von murinen hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen (HSPC) durch das CRISPR/Cas9-System zur schnellen Entwicklung von Mausmodellsystemen mit hämatopoetischen systemspezifischen Genmodifikationen.

Lentiviral CRISPR/Cas9-Vermittelte Genombearbeitung zur Untersuchung hämatopoetischer Zellen in Krankheitsmodellen

Die direkte Lieferung von vormontierten Cas9/Guide-RNA-Ribonukleoprotein-Komplexen ist ein schnelles und effizientes Mittel zur Genombearbeitung in hämatopoetischen Zellen. Hier nutzen wir diesen Ansatz, um einen RUNX1 intronic Schalldämpfer zu löschen und die Transkriptionsreaktionen in OCI-AML3-Leukämischen Zellen zu untersuchen.

Untersuchung der Transkriptionsrolle eines RUNX1 Intronic Schalldämpfers durch CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein in akuten myeloischen Leukämiezellen

Das vorliegende Protokoll beschreibt ein optimiertes hämatopoetisches Stamm- und Vorläuferzell-Kulturverfahren (HSPC) für die robuste Anpflanzung von geneditierten Zellen in vivo.

CRISPR/Cas9-Gen-Editing von hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen für gentherapeutische Anwendungen

Neue Strategien zur getreuen Modellierung somatischer Mutationen in hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen (HSPCs) sind notwendig, um die hämatopoetische Stammzellbiologie und hämatologische Malignome besser zu untersuchen. Hier wird ein Protokoll zur Modellierung heterozygoter Gain-of-Function-Mutationen in HSPCs durch Kombination der Verwendung von CRISPR/Cas9 und dualer rAAV-Donortransduktion beschrieben.

Entwicklung onkogener heterozygoter Gain-of-Function-Mutationen in humanen hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen

Die vorgestellte Methode beschreibt die Erzeugung eines CRISPR-vermittelten Gen-Knockouts in der humanen embryonalen Stammzelllinie (hESC) H9, die sgRNAs, die auf das L2HGDH-Gen abzielen, unter Verwendung eines hocheffizienten lentiviralen Gentransfersystems stabil exprimiert.

CRISPR-Cas9-vermittelte Gendeletion in humanen pluripotenten Stammzellen, die unter feederfreien Bedingungen kultiviert wurden

Wir entwickelten ein optimiertes CRISPR-Cas9-Knockout-Screening-Protokoll für primäre CAR-T-Zellen. Durch die Reduzierung der gDNA-Übertragung durch enzymatische Verdauung und sgRNA-Kassettenpulldown minimiert dieser Ansatz PCR-Artefakte und gewährleistet eine genaue SGRNA-Detektion sowie eine robuste Identifikation funktioneller Genziele.

Verbesserung von CRISPR-Cas9-Bildschirmen in CAR-T-Zellen: Eine verfeinerte Methode zur Bibliotheksvorbereitung

Erfahren Sie die Kombination von CRISPR/Cas9 mit CCK-8-Assays zur Identifizierung abnorm wachsender Gene in hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen. Diese Methode unterstützt die Leukämieforschung.

Bewertung abnormer wachstumsbezogener Gene von hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen durch Kombination der CRISPR/Cas9-Technologie mit der Zellzählung (Video) | JoVE Journal

Bewertung abnormer wachstumsbezogener Gene von hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen durch Kombination der CRISPR/Cas9-Technologie mit der Zellzählung

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