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DOI: 10.3791/67519-v
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Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur direkten Messung der Ionenkanalaktivität auf intrazellulären Vesikeln unter Verwendung eines manuellen endolysosomalen Patch-Clamp-Systems. Wir veranschaulichen die Methode, bei der Endolysosomen vergrößert und diese Vesikel manuell isoliert werden. Dieser Ansatz stellt sicher, dass die Forscher das Verfahren genau replizieren und anwenden können.
Endolysosomale Kompartimente sind die kleinsten Organellen in Zellen. Herkömmliche elektrophysiologische Verfahren sind nicht in der Lage, ihre Spannungs- und Stromänderungen direkt zu messen. Die Endolysosomen-Patch-Clamp-Technik ermöglicht direkte Aufnahmen, die es uns ermöglichen, zuvor in den Ionenkanälen zu untersuchen.
Die größte experimentelle Herausforderung besteht darin, dass nicht alle Verbindungen die Lysosomen effektiv vergrößern. Die Identifizierung geeigneter Zellen ist schwierig, und selbst mit idealen Lysosomen ist eine erfolgreiche Ionenkanalaufzeichnung nicht garantiert. Wir haben die Endolysosomen-Patch-Clamp-Technik entwickelt, um direkte elektrophysiologische Ableitungen von endolysosomalen Membranen zu ermöglichen.
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