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Patch-Clamp-Techniken für die Analyse einzelner endolysosomaler Vesikel
Patch-Clamp-Techniken für die Analyse einzelner endolysosomaler Vesikel
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JoVE Journal Biology
Patch-Clamp Techniques for Single Endolysosomal Vesicle Analysis

Patch-Clamp-Techniken für die Analyse einzelner endolysosomaler Vesikel

Full Text
1,204 Views
05:47 min
April 4, 2025

DOI: 10.3791/67519-v

Hsuan-Ti Wang1, Cheng-Chang Chen1,2

1Clinical Laboratory Sciences and Medical Biotechnology, College of Medicine,National Taiwan University, 2Department of Laboratory Medicine,National Taiwan University Hospital

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur direkten Messung der Ionenkanalaktivität auf intrazellulären Vesikeln unter Verwendung eines manuellen endolysosomalen Patch-Clamp-Systems. Wir veranschaulichen die Methode, bei der Endolysosomen vergrößert und diese Vesikel manuell isoliert werden. Dieser Ansatz stellt sicher, dass die Forscher das Verfahren genau replizieren und anwenden können.

Endolysosomale Kompartimente sind die kleinsten Organellen in Zellen. Herkömmliche elektrophysiologische Verfahren sind nicht in der Lage, ihre Spannungs- und Stromänderungen direkt zu messen. Die Endolysosomen-Patch-Clamp-Technik ermöglicht direkte Aufnahmen, die es uns ermöglichen, zuvor in den Ionenkanälen zu untersuchen.

Die größte experimentelle Herausforderung besteht darin, dass nicht alle Verbindungen die Lysosomen effektiv vergrößern. Die Identifizierung geeigneter Zellen ist schwierig, und selbst mit idealen Lysosomen ist eine erfolgreiche Ionenkanalaufzeichnung nicht garantiert. Wir haben die Endolysosomen-Patch-Clamp-Technik entwickelt, um direkte elektrophysiologische Ableitungen von endolysosomalen Membranen zu ermöglichen.

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