Name: Isolierung und dendritische Zellaufnahme von kleinen extrazellulären Vesikeln aus Echinococcus granulosus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus Echinococcus granulosus und deren Aufnahme durch dendritische Zellen. Diese Methode untersucht immunmodulatorische Effekte und Parasit-Wirt-Interaktionen.

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<table><tbody><tr><td>1,5 mL Röhrchen</td><td>Henso</td><td>N14059</td><td></td></tr><tr><td>24-Well-Platte&nbsp;</td><td>JetBiofil</td><td>CAP011024</td><td>Polystyrol, flacher Boden, sterile</td></tr><tr><td>6-Well-Platte&nbsp; &nbsp;</td><td>Henso Medical Co., Ltd.</td><td>N14221</td> Flacher <td>Boden, PS-Material,</td></tr><tr><td>Steriles 70 mm Polypropylen-Zellsieb</td><td>Biologix Group Limited</td><td>15-1070</td><td>Steriles</td></tr><tr><td>Alcianblau 8 GX Farbstoff</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-214517B</td><td></td></tr><tr><td>Automatischer CO2 Inkubator</td><td>Nuarire</td><td>UN-5100E/G DH</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>Wiener Labor</td><td>1443151</td><td></td></tr><tr><td>CD11c Monoklonaler Antikörper-PECy5&nbsp; &nbsp; 100 &Mikro; g</td><td>eBioscience</td><td>15-0114-82</td><td>Klon (N418)</td></tr><tr><td>CD40 Monoklonaler Antikörper-FITC 100 & micro; g</td><td>eBioscience</td><td>11-0402-82</td><td>Klon (HM40-3)</td></tr><tr><td>CD80 Monoklonaler Antikörper-APC 100 & micro; g</td><td>eBioscience</td><td>17-0801-82</td><td>Klon (16-10A-1)</td></tr><tr><td>CD86 Monoklonaler Antikörper-FITC&nbsp; 100 & micro; g</td><td>eBioscience</td><td>11-0862-82</td><td>Klon (GL-1)</td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td>IEC CL31R Multispeed</td><td></td></tr><tr><td>Konfokales Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>Nikon Konfokales Mikroskop C1</td><td></td></tr><tr><td>Konische Tuben 15 mL Ø 17 x 120 mm</td><td>Citotest</td><td>4610-1865</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>107K4034</td><td></td></tr><tr><td>D-Glukose</td><td>Merk</td><td>1.78343</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid&nbsp;</td><td>Anedra</td><td>6646</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum 500 mL</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td>12352207</tr><tr><td>Durchflusszytometrie-System</td><td>BD Biosciences</td><td>BD FACSCanto&trade; II</td><td></td></tr><tr><td>Gefaltete kapilläre Zetazelle&nbsp;</td><td>Malvern Panalytical</td><td>DTS1070</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicinsulfatsalz</td><td>Sigma</td><td>G1264</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehydlösung</td><td>Fluka</td><td>49630</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Gibco</td><td>11344041</td><td></td></tr><tr><td>Injektionsnadel 21 G x 1"25/8</td><td>Weigao</td><td></td><td>Sterile</td></tr><tr><td>Injektionsnadel 25 G x 5/8"</td> <td>Weigao</td><td></td><td>keimfrei</td></tr><tr><td>Inverses Mikroskop&nbsp;</td><td>Leica</td><td>DMIL LED Fluo&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Holliday</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipopolysaccharid&nbsp; 5 mg</td><td>Invitrogen</td><td>tlrl-rslps</td><td>LPS aus dem gramnegativen Bakterium E. coli K12 . TLR2/4 Agonisten</td></tr><tr><td>Loperamid Hydrochlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5.08162</td><td></td></tr><tr><td>Medium 199&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11150059</td><td></td></tr><tr><td>Methylenblau</td><td>Anedra</td><td>6337</td><td></td></tr><tr><td>MHC Klasse I (H2kb) Monoklonaler Antikörper-PE 100 & Mikro; g</td><td>eBioscience</td><td>12-5958-82</td><td>Klon (AF6-88.5.5.3)</td></tr><tr><td>MHC class II (IA/IE) Monoklonaler Antikörper-FITC&nbsp; 100 & micro; g</td><td>eBioscience</td><td>11-5321-82</td><td>Klon (M5/114.15.2)</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>CX31</td><td></td></tr><tr><td>Maus rekombinante Maus Flt3L.</td><td>PrepoTech</td><td>250-31L-10UG</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Thermo Scientific</td><td>ND-One</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Agar Scientific</td><td>R1018</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin G Natriumsalz</td><td>Sigma</td><td>P3032-10MU</td><td></td></tr><tr><td>PKH26</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MINI26</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumphosphat Monobasischer</td><td>Timper</td><td></td><td>für phosphatgepuffert Kochsalzlösung (PBS)</td></tr><tr><td>Erythrozyten-Lysepuffer 100 mL</td><td>Roche</td><td>11814389001</td><td></td></tr><tr><td>RPMI Medium &nbsp; 1640 1x 500 mL</td><td>Sigma-Aldrich (Gibco)</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Natriumcacodylat&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0250</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Anedra</td><td>7647-14-5</td><td>für phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td></tr><tr><td>Natriumphosphat zweibasig (wasserfrei) p. a.</td><td>Biopack</td><td>1639.07</td><td>Für phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td></tr><tr><td>Streptomycinsulfatsalz</td><td>Sigma</td><td>S9137</td><td></td></tr><tr><td>Spritze 10 mL</td><td>Bremen</td><td></td><td>Sterile</td></tr><tr><td>dickwandige Polycarbonat-Röhrchen</td><td>Beckman Schar</td><td></td><td>13 x 55 mm , Nennkapazität 4 mL</td></tr><tr><td>Transmissionselektronenmikroskop</td><td>Jeol</td><td>JEOL JSM 100CX II</td><td></td></tr><tr><td>Ultrazentrifuge</td><td>Beckman</td><td>Optima LE-80k&nbsp;</td><td>90 Ti Rotor</td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>Richmond</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer Nano&nbsp;</td><td>Malvern&nbsp;</td><td>Nano ZSizer-ZEN3600</td><td>Zur Messung von dynamischer Lichtstreuung und Zetapotentialmessung</td></tr></tbody></table>

isolierung und dendritische zellaufnahme von kleinen extrazellulären vesikeln aus echinococcus granulosus

Isolation And Dendritic Cell-Uptake of Small Extracellular Vesicles from Echinococcus granulosus

In Abbildung 1 ist ein Flussdiagramm dargestellt, das die wichtigsten Schritte zur Aufrechterhaltung reiner Kulturen des Larvenstadiums von E. granulosus, die Isolierung und Charakterisierung von sEVs und deren Aufnahme durch dendritische Zellen der Maus zusammenfasst. Um eine hohe sEV-Produktion aus E. granulosus-Protoskolen und Metazestoden zu erreichen, wurde eine zuvor im Labor entwickelte in vitro-Kulturmethode eingesetzt, um das Überleben und die metabolische...

Isolierung und dendritische Zellaufnahme von kleinen extrazellulären Vesikeln aus Echinococcus granulosus

The secretion of extracellular vesicles by cestodes is crucial for enabling cellular communication not only among parasites but also with host tissues. In ...

isolation-dendritic-cell-uptake-small-extracellular-vesicles-from

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Quelle: Watson, D. C., et.al. Skalierbare Isolierung und Reinigung von extrazellulären Vesikeln aus Escherichia coli und anderen Bakterien. J. Vis. Exp. (2021)Dieses Video zeigt die Isolierung und Konzentration von extrazellulären Vesikeln (EVs), die aus der äußeren Membran von gentechnisch veränderten Bakterien gewonnen werden. Der Prozess umfasst die Kultivierung der Bakterien, um EVs freizusetzen, gefolgt von sequenziellen Zentrifugations- und Filtrationsschritten, um Zellen und Ablagerungen...

Isolierung und Anreicherung von extrazellulären Vesikeln aus der äußeren Membran aus Bakterien

Dieses Video beschreibt eine Methode, die auf Größenausschlusschromatographie (SEC) basiert, um extrazelluläre Vesikel oder EVs zu isolieren, die aus den Immunzellen des Gehirns – den Mikroglia – stammen. Die EVs fungieren als molekulare Fracht, um Mediatoren zu liefern, die eine Immunantwort regulieren. Daher können die isolierten EVs als in vitro Modell verwendet werden, um die Mikroglia-Neuronen-Wechselwirkung während einer neuronalen Immunantwort zu untersuchen.

SEC-basierte Isolierung von extrazellulären Vesikeln aus Mikroglia: Eine Technik zur Isolierung extrazellulärer Vesikel aus Mikroglia-konditionierten Kulturmedien

Es gibt ein wachsendes Interesse für das Verständnis der immunologischen Funktionen von bestimmten Subpopulationen von Zellen in Peyer-Plaques (PP), die primären induktiven Seiten des Darm-assoziierten lymphatischen Gewebe. Hier beschreiben wir parallele Protokolle zur Herstellung PP Einzelzelle Zubereitungen für die durchflusszytometrische Analyse und PP Kryoschnitten für Immunfärbung.

Isolierung und Immunfärbung Lymphozyten und dendritische Zellen aus Murine Peyer-Plaques

Diese Protokollinformationen ein Verfahren zur Isolierung von Antigen-präsentierenden Zellen menschlichen Thymus über verschiedene Schritte der enzymatischen Verdauung des Gewebes, gefolgt von Dichtegradientenzentrifugation der Einzelzellsuspension und schließlich magnetisch und / oder FACS-Sortierung von Zellpopulationen von Interesse.

Isolierung von myeloider dendritischer Zellen und Epithelzellen Menschliche Thymus

Wir beschreiben hier eine Methode um zu isolieren und reinigen von dendritischen Zellen aus verschiedenen anatomischen Fächer in der menschlichen weiblichen Fortpflanzungsorgane für die Bewertung ihrer phänotypischen und funktionellen Eigenschaften. Diese Methode kann zu anderen Immunzellen oder dendritische Zellen aus anderen Schleimhaut-Gewebe isolieren angepasst werden.

Isolation von dendritischen Zellen aus menschlichen weiblichen Fortpflanzungsorgane für phänotypische und funktionelle Studien

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur extrazellulären Vesikel (EVs) Isolierung in in Vitro kultivierten Medium von Erwachsenen Schistosoma Japonicumbeschreiben.

Isolierung und Charakterisierung von extrazellulären Vesikel von Erwachsenen Schistosoma japonicum

Der vorliegende Bericht hebt die chronologischen Anforderungen an die extrazelluläre Vesikel-Isolierung (EV) von Mikroglia oder Blutmakrophagen hervor. Mikroglia-abgeleitete Elektrofahrzeuge wurden als Regulatoren des Neuritenwachstums evaluiert, während von Blutmakrophagen abgeleitete Elektrofahrzeuge bei der Kontrolle der C6-Gliomzellinvasion in In-vitro-Assays untersucht wurden. Ziel ist es, diese EV-Funktionen als Immunvermittler in bestimmten Mikroumgebungen besser zu verstehen.

Charakterisierung von immunzellulären Vesikeln und Untersuchung der funktionellen Auswirkungen auf die Zellumgebung

Wir beschreiben eine schnelle transiente Transduktionstechnik in verschiedenen Entwicklungsstadien von Echinococcus granulosus unter Verwendung von lentiviralen Vektoren der dritten Generation.

Transiente Transduktion der strobatierten Formen von Echinococcus granulosus

Bakterien sezernieren nanometergroße extrazelluläre Vesikel (EVs), die bioaktive biologische Moleküle tragen. Die EV-Forschung konzentriert sich auf das Verständnis ihrer Biogenese, ihrer Rolle bei Mikroben-Mikroben- und Wirt-Mikroben-Interaktionen und Krankheiten sowie ihrer potenziellen therapeutischen Anwendungen. Ein Workflow für die skalierbare Isolierung von EVs aus verschiedenen Bakterien wird vorgestellt, um die Standardisierung der EV-Forschung zu erleichtern.

Skalierbare Isolierung und Reinigung extrazellulärer Vesikel aus Escherichia coli und anderen Bakterien

Das vorgeschlagene Protokoll enthält Richtlinien, wie eine Kontamination mit Endotoxin während der Isolierung von extrazellulären Vesikeln aus Zellkulturüberständen vermieden und richtig bewertet werden kann.

Isolierung von extrazellulären Vesikeln mit niedrigem Endotoxingehalt, die aus Krebszelllinien stammen

Erfahren Sie die Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus Echinococcus granulosus und deren Aufnahme durch dendritische Zellen. Diese Methode untersucht immunmodulatorische Effekte und Parasit-Wirt-Interaktionen.

Isolierung und dendritische Zellaufnahme von kleinen extrazellulären Vesikeln aus Echinococcus granulosus

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