Name: Kochsalzspülung zur Probenahme der nasalen Immunmikroumgebung des Hundes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: Lernen Sie die Kochsalzspülung zur Probenahme der nasalen Immunmikroumgebung bei Hunden mit Nasentumoren. Diese nicht-invasive Methode ermöglicht serielle Analysen während der Strahlentherapie.

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<ol><li>Cohn, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+nasal+disease%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Clin%3A+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Canine nasal disease: An update.</a> Vet Clin: Small Anim Pract. 50 (2), 359-374 (2020).</li>
<li>Mortier, J., Blackwood, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+nasal+tumours+in+dogs%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Treatment of nasal tumours in dogs: A review.</a> J Small Anim Pract. 61 (7), 404-415 (2020).</li>
<li>Plickert, H., Tichy, A., Hirt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+canine+nasal+discharge+related+to+intranasal+diseases%3A+A+retrospective+study+of+105+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Characteristics of canine nasal discharge related to intranasal diseases: A retrospective study of 105 cases.</a> J Small Anim Pract. 55 (3), 145-152 (2014).</li>
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<li>Van Pelt, D. R., Mckiernan, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+canine+rhinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Clin+North+Am+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of canine rhinitis.</a> Vet Clin North Am Small Anim Pract. 24 (5), 789-806 (1994).</li>
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<li>Ashbaugh, E. A., Mckiernan, B. C., Miller, C. J., Powers, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+hydropulsion%3A+A+novel+tumor+biopsy+technique%5BTitle%5D)+AND+%22JAAHA%22%5BJournal%5D)">Nasal hydropulsion: A novel tumor biopsy technique.</a> JAAHA. 47 (5), 312-316 (2011).</li>
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<li>Darragh, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elective+nodal+irradiation+mitigates+local+and+systemic+immunity+generated+by+combination+radiation+and+immunotherapy+in+head+and+neck+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Elective nodal irradiation mitigates local and systemic immunity generated by combination radiation and immunotherapy in head and neck tumors.</a> Nat Commun. 13 (1), 7015(2022).</li>
<li>Pinard, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+lymphocyte-specific+programmed+cell+death+protein+1+receptor+expression+and+cytokines+in+blood+and+urine+in+canine+urothelial+carcinoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Comp+Oncol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of lymphocyte-specific programmed cell death protein 1 receptor expression and cytokines in blood and urine in canine urothelial carcinoma patients.</a> Vet Comp Oncol. 20 (2), 427-436 (2022).</li>
<li>Choi, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+canine+pd-1%2Fpd-l1+specific+monoclonal+antibodies+and+amplification+of+canine+t+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of canine pd-1/pd-l1 specific monoclonal antibodies and amplification of canine t cell function.</a> PLoS One. 15 (7), e0235518(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 ml&nbsp; Rohre</td><td>Eppendorf</td><td>05-402</td><td></td></tr><tr><td>1000 &micro; L Pipette</td><td>VWR</td><td>89079-974</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>20 mL Spritzen</td><td>VWR</td><td>BD302830</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Konische Röhrchen</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>70 &micro; m Zellsieb</td><td>Fisherbrand</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>8FR Steriler roter Gummikatheter</td><td>Med Vet International</td><td>50-252-2428</td><td></td></tr><tr><td>ACK Lysepuffer</td><td>Gibco</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Beckman Schar</td><td>366816</td><td></td></tr><tr><td>Physiologische Kochsalzlösung (0,9%)</td><td>Vetivex</td><td>17033-492-01</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td>Tel.: 10153-838</td><td></td></tr></tbody></table>

kochsalzspülung zur probenahme der nasalen immunmikroumgebung des hundes

Saline Lavage for Sampling of the Canine Nasal Immune Microenvironment

Bei dieser Nasenspülmethode erscheint die entnommene Probe leicht trüb, möglicherweise mit sichtbaren Stücken von Zelltrümmern und Schleim, wenn der Schlauch verwirbelt wird. Eine Probe gilt als mit peripherem Blut kontaminiert, wenn das Spülverfahren versehentlich Blutungen hervorruft und die Probe rot gefärbt ist. Während ein Teil der infundierten Kochsalzlösung während des Eingriffs verloren geht, wird eine negative Spülung in Betracht gezogen, wenn die infundierte Kochsalzlösung nicht aus dem Nasenloch in den Schlauch zurückfließt. Mögliche Ursachen können sein, dass der Kopf nicht ausreichend nach unten geneigt ist, um einen effektiven Rückfluss zu ermöglichen, dass die Probe kaudal oder lateral durch das kontralaterale Nasenloch abfließt oder dass der rote Gummikatheter nicht fest an der Spritze befestigt ist und die Kochsalzlösung von der Verbindungsstelle nach außen ausgetreten ist.
Wenn Nasenspülproben von Hunden mit Nasenkrebs erfolgreich entnommen wurden, wird mit einer Keimzahl von 1 × 106 × 10600 10 6 gerechnet, wobei 75 bis 96 % lebende Zellen vorliegen. Wenn Nasenspülproben von Hunden mit ansonsten gesunden, nicht entzündeten Nasenhöhlen entnommen wurden, lagen die Zellzahlen im Bereich von 7 × 105-2 × 106, mit 6-16 % lebenden Zellen. Ein repräsentatives Bild von zytologischen Proben, die aus Nasenspülproben von tumortragenden Hunden gewonnen wurden, ist in Abbildung 2 dargestellt. Darüber hinaus ist in Abbildung 3 die durchflusszytometrische Auswertung von Zellpopulationen dargestellt, die aus Nasenspülproben gesunder und tumortragender Hunde analysiert wurden. Es wäre zu erwarten, dass Zellzahlen und prozentuale Lebensfähigkeit, die unter diesen Bereichen liegen, darauf hindeuten, dass das Nasenspülverfahren und die Probenentnahme nicht erfolgreich waren. Tabelle 1 fasst die Ergebnisse der von den Autoren durchgeführten Nasenspültechnik in Bezug auf die Anzahl der durchgeführten Eingriffe, die Anzahl der Hunde, den Zustand der Nasenhöhle (gesund oder tumortragend), die Ausbeute an kernhaltigen Zellzahlen, die Lebensfähigkeit der für das Verfahren erhaltenen Zellen und die Frage, ob die Spülprobe für die nachgelagerte Analyse als Erfolg oder Misserfolg angesehen wurde, zusammen. Für die Zwecke der Experimente, die mit den in Tabelle 1 enthaltenen Nasenspülproben durchgeführt wurden, wurde eine Mindestzellzahlausbeute von 150.000 als erfolgreiche Probenentnahme für die Nasenspülung angesehen.
Bei dieser Nasenspültechnik wird sterile 0,9%ige Kochsalzlösung verwendet, um die Zellen zu sammeln. Alternativ könnte die Hartmann-Lösung (laktierte Ringer-Lösung) in Betracht gezogen werden; Proben, die entweder mit Kochsalzlösung oder Hartmann-Lösung entnommen wurden, müssten jedoch getestet werden, um eine vergleichbare Lebensfähigkeit und Ergebnisse für die interessierenden Zellen zu gewährleisten. Darüber hinaus könnte eine Alternative zur Verwendung eines roten Gummikatheters bei Hunden ohne Tumor darin bestehen, die Nasenspülung mit einem Foley-Katheter durchzuführen. Obwohl sie bei der hier vorgestellten Nasenspültechnik nicht verwendet wird, würde die Verwendung eines Foley-Katheters das Aufblasen des Ballons an der Spitze des Katheters ermöglichen, wodurch die Nasenhöhle verschlossen und ein Flüssigkeitsverlust nach kaudal verhindert wird. Auch wenn die Zugabe von Hyaluronidase zur Nasenspülprobe nicht in der hier vorgestellten Nasenspülungsprobe getestet wurde, könnte sie in Betracht gezogen werden, um den in der Nasenspülprobe gesammelten Schleim aufzubrechen und mehr Zellen für die Analyse freizusetzen. Dies müsste auch optimiert werden, um sicherzustellen, dass die Ergebnisse nicht durch die Zugabe von Hyaluronidase zum Verarbeitungsverfahren der Nasenspülung verändert werden.
Veröffentlichte Ergebnisse aus erfolgreichen Nasenspülungen, die an Hunden durchgeführt wurden, die an einer klinischen Studie zu Hundekrebs teilgenommen haben, sind in Abbildung 310 dargestellt. Die in Abbildung 3 dargestellten Ergebnisse stammen aus einer Studie, in der der Einfluss einer elektiven Knotenbestrahlung auf die lokale Immunmikroumgebung von Hunden mit sinonasalen Tumoren untersucht wurde, deren Tumoren entweder allein oder in Kombination mit einer regionalen zervikalen Lymphknotenbestrahlung bestrahlt wurden. Durch serielle Probenahme der Nasenhöhle von Hunden in der klinischen Studie mit Nasenspülung ergab die durchflusszytometrische Analyse der entnommenen Zellen eine signifikante Abnahme der Populationen von Effektor-T-Zellen am letzten Tag der Strahlentherapie, wenn regionale Lymphknoten gleichzeitig mit dem sinonasalen Tumor bestrahlt wurden, im Vergleich zu Hunden, die eine auf den Tumor abzielende Strahlentherapie erhielten und die regionalen Lymphknoten verschont blieben. Dies zeigt, wie nützlich es ist, die Nasenhöhle seriell mit Spülung zu beproben, um Verschiebungen in den Zellpopulationen zu verschiedenen Zeitpunkten und unter verschiedenen Behandlungsbedingungen zu untersuchen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Schematische Darstellung der Nasenspülungsmethode. Erwärmte, sterile Kochsalzlösung wird mit einem roten Gummikatheter in die Nasenhöhle von anästhesierten Hunden infundiert. Die Nasenspülflüssigkeit wird in einem Schlauch gesammelt, während sie aus der Nase abfließt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Zelluläre Zusammensetzung einer Nasenspülprobe, die von einem Hund mit einem Nasentumor entnommen wurde. Repräsentatives Bild von zytologischen Proben, die aus Nasenspülproben gewonnen wurden (500-fache Vergrößerung, modifizierte Wright-Giemsa-Färbung). Neutrophile Zellen (Pfeile) sind die vorherrschenden Zellen, aber auch einige Plattenepithelzellen (Pfeilspitze) und kleine reife Lymphozyten (im quadratischen Kasten hervorgehoben). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig3v2.jpg"> 
Abbildung 3. Durchflusszytometrische Analyse von Nasenspülproben, die von gesunden und tumortragenden Hunden entnommen wurden. Vergleich der Abundanz von lebenden Zellen, Immunzellen und Neutrophilen zwischen gesunden Hunden (blau, n = 3) und tumortragenden Hunden mit sinonasales Karzinom (rot, n = 4). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig3v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig04.jpg"> 
Abbildung 4: Durchflusszytometrische Analyse von Zellen, die aus der Nasenspülung von Hunden entnommen wurden, die an einer klinischen Studie teilnahmen, in der der Einfluss der elektiven Knotenbestrahlung (ENI) auf die lokale Immunmikroumgebung untersucht wurde. Quantifizierung von CD4 (CD5+CD4+) und CD8 (CD5+CD8+) T-Zellen aus Nasenspülproben. Hunde, die gleichzeitig mit einer Tumorbestrahlung (n = 3) mit ENI behandelt wurden, hatten am letzten Tag der Bestrahlung (Tag 3) signifikant reduzierte Effektor-CD4- und CD8-T-Zellen im Vergleich zu Hunden, die mit einer Bestrahlung behandelt wurden, die nur auf den Tumor gerichtet war (n = 3). Diese Abbildung wurde von Darragh et al.10 modifiziert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Fehlerfrei (n=3)</td>
			<td>Tumor (n= 19)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anzahl der durchgeführten Eingriffe</td>
			<td>3</td>
			<td>80</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zellzahl</td>
			<td>0,7 x 106 - 2,8 x 106</td>
			<td>1,6 x 106 - 210 x 106; Median: 8,7 x 106</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lebensfähigkeit der Zellen</td>
			<td>6.3 - 15.9%</td>
			<td>75% - 96%; Median: 87 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erfolgsquote</td>
			<td>100%</td>
			<td>98.80%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabelle 1: Zusammenfassung der durchgeführten Nasenspülungen und der zellulären Eigenschaften der entnommenen Proben.

Kochsalzspülung zur Probenahme der nasalen Immunmikroumgebung des Hundes

Evaluating the local immune microenvironment of the canine nasal cavity can be important for investigating normal tissue health and disease conditions, ...

saline-lavage-for-sampling-of-the-canine-nasal-immune-microenvironment

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

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Kochsalzspülung zur Probenahme der nasalen Immunmikroumgebung des Hundes

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