Name: 2.5D-Modell zur ex vivo mechanischen Charakterisierung der Keimangiogenese in lebendem Gewebe (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-28T13:10:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Entdecken Sie die mechanische Charakterisierung der Keimangiogenese mit einem 2.5D-Modell aus porzinen Karotiden. Diese Methode kombiniert Zugkraftmikroskopie mit physiologisch relevantem Gewebe für die regenerative Medizin.

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<meta charset="utf8"></head><body>Vielseitiges 2,5D-Modell zur Analyse des zellulären Keimens in Schweinearterien

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in health and disease.</a> Nat Med. 9 (6), 653-660 (2003).</li>
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<li>Kretschmer, M., Rüdiger, D., Zahler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+aspects+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Mechanical aspects of angiogenesis.</a> Cancers. 13 (19), 4987(2021).</li>
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<li>Carmeliet, P., De Smet, F., Loges, S., Mazzone, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Branching+morphogenesis+and+antiangiogenesis+candidates%3A+tip+cells+lead+the+way%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Branching morphogenesis and antiangiogenesis candidates: tip cells lead the way.</a> Nat Rev Clin Oncol. 6, 315-326 (2009).</li>
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<li>Tomita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex+vivo+choroid+sprouting+assay+of+ocular+microvascular+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An ex vivo choroid sprouting assay of ocular microvascular angiogenesis.</a> J Vis Exp. (162), e61677(2020).</li>
<li>Kapoor, A., Chen, C. G., Iozzo, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+aortic+ring+assay%3A+A+useful+ex+vivo+method+to+assess+biochemical+and+functional+parameters+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol+Plus%22%5BJournal%5D)">A simplified aortic ring assay: A useful ex vivo method to assess biochemical and functional parameters of angiogenesis.</a> Matrix Biol Plus. 6-7, 100025(2020).</li>
<li>Stiffey-Wilusz, J., Boice, J. A., Ronan, J., Fletcher, A. M., Anderson, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex+vivo+angiogenesis+assay+utilizing+commercial+porcine+carotid+artery%3A+Modification+of+the+rat+aortic+ring+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">An ex vivo angiogenesis assay utilizing commercial porcine carotid artery: Modification of the rat aortic ring assay.</a> Angiogenesis. 4 (1), 3-9 (2001).</li>
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<li>Lyle, K. S., Corleto, J. A., Wittmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtubule+dynamics+regulation+contributes+to+endothelial+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22BioArchitecture%22%5BJournal%5D)">Microtubule dynamics regulation contributes to endothelial morphogenesis.</a> BioArchitecture. 2 (6), 220-227 (2012).</li>
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<li>Du, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+characterization+of+mechanical+interactions+between+endothelial+cells+and+extracellular+matrix+during+angiogenic+sprouting%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional characterization of mechanical interactions between endothelial cells and extracellular matrix during angiogenic sprouting.</a> Sci Rep. 6, 21362(2016).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>2% Bis-Acrylamid</td><td></td><td>Bio-Rad</td><td>1610143</td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td></td><td>Merck Life Science</td><td>60-24-2</td></tr><tr><td>3-(Trimethoxysilyl)propylmethacrylat</td><td>Bind-Silan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>440159-100ML</td></tr><tr><td>40% Acrylamid</td><td></td><td>Bio-Rad</td><td>1610140</td></tr><tr><td>Aboslute Ethanol (zur Analyse)</td><td></td><td>VWR Deutschland</td><td>1.00983.1000</td></tr><tr><td>Absolutes Ethanol (industriell)</td><td></td><td>VWR International</td><td>83813.41</td></tr><tr><td>Essigsäure, eiskalt 100%</td><td></td><td>Merck</td><td>1000562500</td></tr><tr><td>Ammoniumpersulfat</td><td>APS</td><td>Bio-Rad</td><td>7727-54-0</td></tr><tr><td>Antikörper (primär) - Calponin</td><td></td><td>abcam</td><td>AB46794</td></tr><tr><td>Antikörper (primär) - CD31</td><td></td><td>Serotec</td><td>MCA1746</td></tr><tr><td>Antikörper (primär) - &alpha;-glatte Muskulatur Aktin</td><td>&alpha;SMA</td><td>Dako</td><td>M0851</td></tr><tr><td>Antikörper (sekundär) - ziegen-anti-maus-IgG1 Alexa 488</td><td></td><td>Molekulare Sonden</td><td>A21121</td></tr><tr><td>Antikörper (sekundär) - ziegen-anti-maus-IgG2a Alexa 555</td><td></td><td>Molekulare Sonden</td><td>A21137</td></tr><tr><td>Antikörper (sekundär) - ziegen-anti-kaninchen-IgG Alexa 555</td><td></td><td>Molekulare Sonden</td><td>A21428</td></tr><tr><td>Autoklav</td><td></td><td>Astell</td><td></td></tr><tr><td>Calciumchlorid-Dihydrat</td><td>CaCl2</td><td>Calbiochem</td><td>208291-250GM</td></tr><tr><td>Kollagen Typ I, Rattenschwanz</td><td></td><td>Corning</td><td>354236</td></tr><tr><td>Kollagen Typ IV, menschliche Plazenta</td><td></td><td>Merck Life Science</td><td>C5533-5MG</td></tr><tr><td>Endothelzellwachstumsmedium</td><td>EKG-Medium</td><td></td><td>Promocell C-22111</td></tr><tr><td>Exoxidbeschichtete Pinzette mit runder Spitze</td>, <td>feine Pinzette</td><td>Rubis Pinzette</td><td>E78144-2A</td></tr><tr><td>Fluoreszierender Marker, dunkelrot</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>F8807</td></tr><tr><td>Glasdeckgläser, & Oslash; 13 mm, #1</td><td></td><td>Epredia</td><td>CB00130RA120MNZ0</td></tr><tr><td>Glas-Deckgläser, &Oslash; 13 mm, #1.5</td><td></td><td>Epredia</td><td>CB00120RAC20MNZ0</td></tr><tr><td>Hydrochloridsäure, 25%</td><td>HCl</td><td>Merck</td><td>1.100316.1000</td></tr><tr><td>Krebs-Henseleit Puffer</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K3753</td></tr><tr><td>Mikroskop, Leica Application Suite X Software, Version 3.5.7.23225</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop, Leica DMi8 Epifluoreszenzmikroskop</td><td></td><td>Leica Microsystems</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop, Nikon Ti2 Eclipse</td><td></td><td>Nikon</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop, NIS-Elements AR Software</td><td></td><td>Nikon</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-Tetramethylethan-1,2-diamin</td><td>TEMED</td><td>Merck Life Science</td><td>110-18-9</td></tr><tr><td>Nalgene Flasche</td><td></td><td>Thermo Scientific</td><td>2187-0016</td></tr><tr><td>Nadel, 21Gx1"</td><td></td><td>Henke Sass Wolf</td><td>HK4710008025</td></tr><tr><td>Normales Serum, Ziegen-Gibco</td><td></td><td></td><td>10098792</td></tr><tr><td>Papaverin-Hydrochlorid</td><td></td><td>Sigma</td><td>61-25-6</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomyocin (10 000 U/mL)</td><td>P/S</td><td>Gibco</td><td>15140163</td></tr><tr><td>Petrischale, groß (145x20mm)</td><td></td><td>Greiner Bio-one</td><td>639160</td></tr><tr><td>Petrischale, klein (60x15mm)</td><td></td><td>Greiner Bio-one</td><td>628160</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>PBS</td><td>Sigma</td><td>P4417</td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td></td><td>Merck Life Science</td><td>P2443-250G</td></tr><tr><td>Punktionsnadel, scharfe geschlossene Spitze</td><td></td><td>unbekannt</td><td></td></tr><tr><td>Skalpell, Nr. 4</td><td></td><td>Swann-Morton</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhydrogencarbonat</td><td>NaHCO3</td><td>VWR International</td><td>144-55-8</td></tr><tr><td>Sulfosuccinimidyl 6-(4'-azido-2'-nitrophenylamino)hexanoat</td><td>Sulfo-SANPAH</td><td>Thermo Scientific</td><td>22589</td></tr><tr><td>Chirurgische Klinge, Nr. 20</td><td></td><td>Swann-Morton</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisches Abdecktuch</td><td>Foliodrape</td><td></td><td>2775001</td></tr><tr><td>chirurgische Pinzette</td><td></td><td>Lettix</td><td>400024</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td></td><td>Merck</td><td>9036-19-5 UV-Lampe</td></tr><tr><td></td><td></td><td>Analytik Jena</td><td>95-0042-13&nbsp;</td></tr><tr><td>Well-Platte, 96-Well, F-Boden</td><td></td><td>Greiner Bio-one</td><td>655180</td></tr><tr><td>Well-Platte, Glasboden 12-well</td><td></td><td>MatTek</td><td>P12G-0-14-F</td></tr></tbody></table>

2.5d-modell zur ex vivo mechanischen charakterisierung der keimangiogenese in lebendem gewebe

2.5D Model for Ex Vivo Mechanical Characterization of Sprouting Angiogenesis in Living Tissue

2.5D-Modell zur ex vivo mechanischen Charakterisierung der Keimangiogenese in lebendem Gewebe

Sprouting angiogenesis is the formation of new blood vessels from pre-existing vasculature and is of great importance for physiological such as tissue ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Endotheliale Vorläufer, die aus induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSC-EPs) gewonnen werden, haben das Potenzial, Herz-Kreislauf-Behandlungen zu revolutionieren und die Schaffung von originalgetreueren Herz-Kreislauf-Erkrankungen zu ermöglichen. Dabei werden die Verkapselung von iPSC-EPs in dreidimensionalen (3D) Kollagen-Mikroumgebungen und eine quantitative Analyse des vaskulogenen Potenzials dieser Zellen beschrieben.

Ein In-Vitro-3D-Modell und eine Computational Pipeline zur Quantifizierung des vaskulogenen Potenzials von iPSC-derived endotheliaalen Vorläufern

Diese Methode beschreibt die Kultur von iPSC-abgeleiteten Endothelzellen als 40 durchfundierte 3D-Mikrogefäße in einer standardisierten mikrofluidischen Plattform. Diese Plattform ermöglicht die Untersuchung von gradientengetriebenen angiogenen Keimen in 3D, einschließlich Anastomose und Stabilisierung der angiogenen Sprossen in einer skalierbaren und hochdurchsatzigen Weise.

Standardisierter und skalierbarer Assay zur Untersuchung perfused 3D Angiogenic Sprouting of iPSC-derived Endothelial Cells In Vitro

Hier bieten wir einen mikrofluidischen Chip und ein automatisch gesteuertes, hocheffizientes Kreislauf-Mikrofluidsystem, das die anfängliche Mikroumgebung der Neovaskularisation rekapituliert und es ermöglicht, Endothelzellen (ECs) durch hohe Luminalscherspannung, physiologischen Transendothelfluss und verschiedene vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor (VEGF) gleichzeitig zu stimulieren.

Mikrofluidisches Modell zur Nachahmung des ersten Ereignisses der Neovaskularisation

Dieser Assay verwendet embryonale Stammzellen der Maus, die in Embryoidkörperchen differenziert sind, die in 3D-Kollagengel kultiviert werden, um die biologischen Prozesse zu analysieren, die die Keimangiogenese in vitro steuern. Die Technik kann zum Testen von Medikamenten, zur Modellierung von Krankheiten und zur Untersuchung spezifischer Gene im Zusammenhang mit embryonal tödlichen Deletionen eingesetzt werden.

In vitro Dreidimensionaler Keimtest der Angiogenese unter Verwendung embryonaler Stammzellen der Maus für die Modellierung von Gefäßerkrankungen und Arzneimitteltests

In dieser Arbeit werden der zweidimensionale (2D) Scratch Wound Migration Assay und der dreidimensionale (3D) Sphäroid-Sphäroide-Assay zusammen mit ihren jeweiligen nachgeschalteten Analysemethoden, einschließlich RNA-Extraktion und Immunzytochemie, als geeignete Assays zur Untersuchung der Angiogenese in vitro vorgestellt.

Untersuchung der Angiogenese auf funktioneller und molekularer Ebene durch Nutzung des Scratch Wound Migration Assay und des Spheroid Sprouting Assay

Christopher CW Hughes beschreibt den Nutzen von seiner Kultur für die Untersuchung der Angiogenese in vitro. Er erklärt die Bedeutung der Fibroblasten, die eine kritische, bisher nicht identifizierten löslichen Faktor, der Endothelzellen auf Schiffe in Kultur bilden können, die Filiale, bilden richtige Lumen, und unterziehen Anastomose absondern.

Christopher Hughes: Eine In-vitro-Modell für das Studium der Angiogenese (Interview)

Ein neues in vitro-System für die gleichzeitige Laden vier Sehnen in der Kultur beschrieben wird.

Ex vivo mechanische Belastung der Sehnen

Mit Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) zu Diagnose-Tools entwickeln

Die Steifigkeit der extrazellulären Matrix stark beeinflusst mehrere Verhalten von adhärenten Zellen. Matrix Steifigkeit variiert räumlich in einem Gewebe, und unterliegt Änderungen in verschiedenen Krankheitszuständen. Hier entwickeln wir Methoden, um räumliche Veränderungen der Steifigkeit in normalen und fibrotische Maus Lungengewebe mit Rasterkraftmikroskopie Mikroindentation charakterisieren.

Micro-Mechanische Charakterisierung von Lungengewebe mit Atomic Force Microscopy

Hier präsentieren wir ein Protokoll, das auf der immunhistologischen Detektion von c-FOS-Proteinen basiert, einer klassischen Technik, die zur Identifizierung von neuronalen Populationen verwendet wird, die an spezifischen physiologischen Reaktionen in vivo und ex vivo beteiligt sind.

Die c-fos-Protein Immunohistologische Nachweis: Ein nützliches Werkzeug als Marker der Mittelwegen beteiligt sind in spezifischen physiologischen Antworten<em&gt; In Vivo</em&gt; und<em&gt; Ex Vivo</em

Entdecken Sie die mechanische Charakterisierung der Keimangiogenese mit einem 2.5D-Modell aus porzinen Karotiden. Diese Methode kombiniert Zugkraftmikroskopie mit physiologisch relevantem Gewebe für die regenerative Medizin.

2.5D-Modell zur ex vivo mechanischen Charakterisierung der Keimangiogenese in lebendem Gewebe

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