Name: Kryosektion und Immunfärbung von Innenohrgewebe von Mäusen: vom Embryonalstadium bis zum Erwachsenenstadium (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Lernen Sie die Kryosektion und Immunfärbung von Innenohrgewebe bei Mäusen vom Embryonal- bis zum Erwachsenenstadium. Diese Methode ermöglicht präzise Analysen der Cochlea-Strukturen für die Hör- und Entwicklungsbiologie.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Chemicals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning, Inc.</td><td>46-013-CM</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich, LLC.</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose&nbsp;</td><td>VWR International, Inc.</td><td>97061-432</td><td></td></tr><tr><td>Natriumazid&nbsp;</td><td>Amresco, Inc.</td><td>0639-250G</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd-Elektronenmikroskopie</td><td>Wissenschaften</td><td>15714</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs, Inc.</td><td>v1001</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylbutan&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>19387-AP</td><td></td></tr><tr><td>Verbindung mit optimaler Schnitttemperatur (OCT)</td><td>VWR International, Inc.</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>Spezifische Ausrüstung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kryostat</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>14-071-459</td><td></td></tr><tr><td>Dissektionszange</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>72700-DZ</td><td></td></tr><tr><td>Hydrophobe Barriere-Peroxidase-Antiperoxidase-Pen (PAP)</td><td>Vector Laboratories, Inc.</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>Konfokales Mikroskop</td><td>Carl Zeiss Microscopy, LLC.</td><td>LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>P20 Mikropipette</td><td>Gilson, Inc.</td><td></td><td></td>F144056M</tr><tr><td>Sezierschere</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>08-951-20</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard Schale</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>24236-10</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td>Einbettmaterialien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount</td><td>Elektronenmikroskopie</td><td>Sciences 17984-25</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost plus Objektträger</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>1255015</td><td></td></tr><tr><td>Immunfärbereagenzien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normales Eselserum</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus-FAB-Fragmente&nbsp;</td><td>Jackson ImmunResearch, Inc.</td><td>715-007-003</td><td></td></tr><tr><td>BlokHen</td><td>Aves labs, Inc.</td><td>BH-1001</td><td></td></tr><tr><td>Tuj1 (Beta-III-Tubulin) monoklonaler Maus-Antikörper</td><td>Biolegend, Inc.</td><td>MMS-435P</td><td></td></tr><tr><td>Sox2 polyklonaler Antikörper für Ziegen</td><td>R& D Systems, Inc.</td><td>AF2018</td><td></td></tr><tr><td>Myo6 Kaninchen polyklonaler Antikörper</td><td>Proteus Biosciences</td><td>25&ndash; 6791</td><td></td></tr><tr><td>Myo7A polyklonaler Kaninchen-Antikörper</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>PA1-936</td><td></td></tr><tr><td>Plexin-B1 polyklonaler Ziegen-Antikörper</td><td>R& D Systems, Inc.</td><td>AF3749</td><td></td></tr><tr><td>Sekundärantikörper (hergestellt in Esel; Alexa-488, Cy3, Cy5)</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>Siehe Katalog</td><td></td></tr></tbody></table>

kryosektion und immunfärbung von innenohrgewebe von mäusen: vom embryonalstadium bis zum erwachsenenstadium

Cryosectioning and Immunostaining Mouse Inner Ear Tissue: From Embryonic to Adult Stages

Wir präsentieren Beispiele aus unserem eigenen Labor der Apex- und Basaldrehung einer Maus-Cochlea am embryonalen Tag 16.5 (E16.5) und der Basaldrehung der Cochlea nach der Geburt Tag 0 (P0) und P30. Diese Proben wurden unter Verwendung von Markern für Haarzellen (Myo7A und Myo6), Spiralganglien-Neuronen (SGNs; Tuj1), Glia- und Stützzellen (Sox2) und Plexin-B1, das die Basalmembran um den Cochlea-Ductus und die SGNs markiert. Die Querschnitte der Cochlea in verschiedenen Entwicklungsstadien zeigen signifikante Unterschie...

Kryosektion und Immunfärbung von Innenohrgewebe von Mäusen: vom Embryonalstadium bis zum Erwachsenenstadium

This protocol details general histology methods for preparing inner ear samples from embryonic, neonatal, and adult mice. The purpose of this protocol is ...

cryosectioning-immunostaining-mouse-inner-ear-tissue-from-embryonic

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Ein einfaches Verfahren der Vibratom Schneiden des Corti-Organ, durch Immunhistochemie und konfokale Mikroskopie folgt beschrieben. Dieses Verfahren ermöglicht eine verbesserte Erhaltung der feinen Zytoarchitektur der Säugetier-Corti-Organ, und somit ermöglicht eine präzise Quantifizierung der Zelltypen.

Vibratom Sectioning für Enhanced Erhaltung der Zytoarchitektur der Säugetier-Corti-Organ

Wir stellen eine Methode vor, die die Isolierung und Kultur von Cochlea-Explantaten aus embryonalen Maus-Innenohren beschreibt.  Wir demonstrieren auch eine Methode für den Gentransfer in Cochlea-Explantate mittels Rechteck-Elektroporation. Die In-vitro-Explantatkultur in Verbindung mit der Gentransfertechnik ermöglicht es den Forschern, die Auswirkungen einer Veränderung der Genexpression während der Entwicklung zu untersuchen.

Kultur von embryonalen Maus Cochlear Explantate und Gentransfer durch Elektroporation

Wir präsentieren eine Methode, um die Erwachsenen Corti-Organ als drei intakte Cochlea-Windungen (Spitze, mittlere und Base) zu isolieren. Wir haben auch ein Verfahren zur Immunfärbung mit fluoreszenzmarkierten Antikörpern nachzuweisen. Zusammen ermöglichen diese Verfahren die Untersuchung der Haarzellen, Stützzellen und anderen Zelltypen in der Cochlea vorhanden.

Ganze Berge Dissection und Immunfluoreszenz der erwachsenen Maus Cochlea

Wir präsentieren ein Protokoll zur Isolierung der auditorischen Bulla, der Kapsel und der Gehörknöchelchen von postnatalen Mäusen für die gesamte und histologische Analyse.

Dissektion der Auditory Bulla in postnatale Mäuse: Die Isolierung der Gehörknöchelchen und histologische Analyse

Hier stellen wir ein detailliertes Protokoll zur Erkennung und Quantifizierung des Proteinspiegels während der craniofacialmorphogenese/pathogenese durch Immunfärbung anhand von Maus-Craniofacial-Geweben als Beispiele vor. Darüber hinaus beschreiben wir eine Methode zur Herstellung und Kryosektion von nicht verkalkten harten Geweben von jungen Mäusen zur Immunfärbung.

Gewebevorbereitung und Immunostainierung von Craniofacial Tissues und unkalkulierten Knochen

Dieses Manuskript beschreibt ein experimentelles Protokoll zur Bewertung der morphologischen Eigenschaften und des Funktionellen Status von Bandsynapsen bei normalen Mäusen. Das vorliegende Modell eignet sich auch für lärminduzierte und altersbedingte Cochlea-Synaptopathie-eingeschränkte Modelle. Die korrelativen Ergebnisse früherer Mausstudien werden ebenfalls diskutiert.

Morphologische und funktionelle Bewertung von Bandsynapsen an bestimmten Frequenzregionen der Maus cochlea

Dieser Artikel stellt eine modifizierte Cochlea-Oberflächenvorbereitungsmethode vor, die eine Entkalkung und Verwendung eines Zell- und Gewebeklebers erfordert, um die Stücke der Cochlea-Epithel an 10 mm runden Abdeckungsscheinen für die Immunhistochemie bei erwachsenen Mauscochleae zu haften.

Cochlea-Oberflächenvorbereitung in der Erwachsenenmaus

In dieser Studie wird beschrieben, wie der endolymphatische Sack aus dem Innenohr der Maus in verschiedenen Altersstufen präpariert werden kann. Das Ergebnis einer ähnlichen Dissektion ist in einem Slc26a4-null-Mausmodell der Vergrößerung des endolymphatischen Sacks gezeigt. Eine transgene Maus mit einem fluoreszierenden Reporter, der im endolymphatischen Sack exprimiert wird, wird als Modell zur einfachen Visualisierung des endolymphatischen Sacks und als Lehrmittel vorgestellt.

Dissektion des endolymphatischen Sacks von Mäusen

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll für ein Mausmodell des lärminduzierten Hörverlusts (NIHL) vor. Um NIHL zu induzieren, haben wir ein neues und einfaches Gerät aus gewelltem Kunststoff, einem Rattenfallenkäfig und einem Lautsprecher entwickelt. Die auditorische Hirnstammantwort und die Immunfluoreszenzbildgebung wurden eingesetzt, um die Hörfunktion bzw. die Schädigung der äußeren Haarzellen zu beurteilen.

Modifizierte Versuchsbedingungen für lärminduzierten Hörverlust bei Mäusen und Beurteilung der Hörfunktion und der Schädigung der äußeren Haarzellen

Die Stria vascularis ist für die Bildung des endocochleären Potentials von entscheidender Bedeutung. In dieser Arbeit stellen wir die Präparation der adulten Stria vascularis der Maus für die Einzelkernsequenzierung oder Immunfärbung vor.

Präparation von Stria vascularis der adulten Maus zur Einzelkernsequenzierung oder Immunfärbung

Es wird ein Protokoll zur Vorbereitung von Kryoschnitten der Maus-Netzhaut und zur Durchführung von Immunfärbungen an Photorezeptoren beschrieben. Dieser Artikel ermöglicht es Forschern, konsistente Schnellschnitte der Netzhaut von Mäusen mit gut erhaltener Morphologie und qualitativ hochwertigen Immunfärbeergebnissen zu erstellen.

Kryosektion und Immunfärbung der Netzhaut der Maus

Lernen Sie die Kryosektion und Immunfärbung von Innenohrgewebe bei Mäusen vom Embryonal- bis zum Erwachsenenstadium. Diese Methode ermöglicht präzise Analysen der Cochlea-Strukturen für die Hör- und Entwicklungsbiologie.

Kryosektion und Immunfärbung von Innenohrgewebe von Mäusen: vom Embryonalstadium bis zum Erwachsenenstadium

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