Name: Intradermale Inokulation von Mycobacterium avium im Mausohr (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: Erfahren Sie die intradermale Inokulation von Mycobacterium avium im Mausohr zur Untersuchung von Immunantworten auf nicht-tuberkulöse Mykobakterien. Dieses Modell ermöglicht kontrollierte Infektionsstudien in vivo.

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<ol><li>Abdelaal, H. F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+It%27s+Complex%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: It's Complex.</a> Microorganisms. 10 (7), (2022).</li>
<li>Baldwin, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+complexities+and+challenges+of+preventing+and+treating+nontuberculous+mycobacterial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">The complexities and challenges of preventing and treating nontuberculous mycobacterial diseases.</a> PLoS Negl Trop Dis. 13 (2), p. e0007083(2019).</li>
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<li>Honda, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+and+transmission+of+nontuberculous+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Environmental sources and transmission of nontuberculous mycobacteria.</a> Clin Chest Med. 44 (4), 661-674 (2023).</li>
<li>Pfaller, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+revisited%3A+Mycobacterium+avium+and+Mycobacterium+intracellulare+in+potable+water+in+the+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Occurrence revisited: Mycobacterium avium and Mycobacterium intracellulare in potable water in the USA.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 106 (7), 2715-2727 (2022).</li>
<li>Mercaldo, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+risk+of+nontuberculous+mycobacterial+infection%3A+Strategies+for+advancing+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Environmental risk of nontuberculous mycobacterial infection: Strategies for advancing methodology.</a> Tuberculosis (Edinb). 139, 102305(2023).</li>
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<li>Ghasemi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+non-tuberculous+mycobacteria+on+BCG+vaccine+efficacy%3A+A+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Tuberc+Other+Mycobact+Dis%22%5BJournal%5D)">Effects of non-tuberculous mycobacteria on BCG vaccine efficacy: A narrative review.</a> J Clin Tuberc Other Mycobact Dis. 36, 00451(2024).</li>
<li>Njagi, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+tuberculin+skin+test+responses+associated+with+Mycobacterium+intracellulare+sputum+colonization+in+an+adolescent+TB+prevalence+survey+in+Western+Kenya%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Attenuated tuberculin skin test responses associated with Mycobacterium intracellulare sputum colonization in an adolescent TB prevalence survey in Western Kenya.</a> Tuberculosis (Edinb). 147, 102514(2024).</li>
<li>Larsen, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit+vaccine+protects+against+a+clinical+isolate+of+Mycobacterium+avium+in+wild+type+and+immunocompromised+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Subunit vaccine protects against a clinical isolate of Mycobacterium avium in wild type and immunocompromised mouse models.</a> Scientific Reports. 11 (1), 9040-9040 (2021).</li>
<li>Dutt, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+exposure+to+non-tuberculous+mycobacteria+elicits+B+cell-mediated+immunity+against+pulmonary+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Mucosal exposure to non-tuberculous mycobacteria elicits B cell-mediated immunity against pulmonary tuberculosis.</a> Cell Rep. 41 (11), 111783(2022).</li>
<li>Kupz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+of+Latent+Tuberculosis+Infection+to+Study+Intervention+Strategies+to+Prevent+Reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model of Latent Tuberculosis Infection to Study Intervention Strategies to Prevent Reactivation.</a> PLoS One. 11 (7), e0158849(2016).</li>
<li>Reece, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease+activity+contributes+to+control+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+hypoxic+lung+granulomas+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Serine protease activity contributes to control of Mycobacterium tuberculosis in hypoxic lung granulomas in mice.</a> J Clin Invest. 120 (9), 3365-3376 (2010).</li>
<li>Nemeth, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contained+Mycobacterium+tuberculosis+infection+induces+concomitant+and+heterologous+protection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Contained Mycobacterium tuberculosis infection induces concomitant and heterologous protection.</a> PLoS Pathogens. 16 (7), e1008655(2020).</li>
<li>Jarchow-MacDonald, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+Incidence+and+Characteristics+of+Nontuberculous+Mycobacterial+Infections+in+Scotland+and+Comparison+With+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+Incidence+%282011+to+2019%29%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Forum+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Changing Incidence and Characteristics of Nontuberculous Mycobacterial Infections in Scotland and Comparison With Mycobacterium tuberculosis Complex Incidence (2011 to 2019).</a> Open Forum Infect Dis. 10 (1), ofac665(2023).</li>
<li>Thomson, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+climate+variables+on+the+rising+incidence+of+nontuberculous+mycobacterial+%28NTM%29+infections+in+Queensland%2C+Australia+2001-2016%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Influence of climate variables on the rising incidence of nontuberculous mycobacterial (NTM) infections in Queensland, Australia 2001-2016.</a> Sci Total Environ. 740, 139796(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,05 % Tween80</td><td>Sigma</td><td>P6224</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Spritze</td><td>Fisher</td><td>15-823-434</td><td></td></tr><tr><td>7H10 Agar Triplates</td><td>Moltox</td><td>21-40S234</td><td></td></tr><tr><td>26G stumpfe Nadel</td><td>Fisher</td><td>NC0981254</td><td></td></tr><tr><td>Biosicherheitswerkbank</td><td>Nuaire</td><td>NU-543-400</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Inkubator</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-103-0513</td><td></td></tr><tr><td>Doppelseitiges Klebeband</td><td>Scotch</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton 701N Mikroliterspritze</td><td>Fisher</td><td>14-824-16</td><td></td></tr><tr><td>Hartgewebe-Kugelspitzen</td><td>Fisher</td><td>15-340-102</td><td></td></tr><tr><td>Heizkissen</td><td>Kent Scientific</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>Insulinnadel</td><td>Fisher</td><td>NC1551333</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-890-8598</td><td></td></tr><tr><td>Beleuchtete Lupe</td><td>Brightech</td><td>B07MMZ27QK</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Homogenisator</td><td>Omni</td><td>TH115</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Homogenisator-Stativ</td><td>Omni</td><td>S1000</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-808-1947</td><td></td></tr></tbody></table>

intradermale inokulation von mycobacterium avium im mausohr

Intradermal Inoculation of Mycobacterium avium in the Mouse Ear

Wir verwendeten das oben beschriebene Protokoll, um zu bestimmen, ob ein reproduzierbares NTM-Challenge-Modell unter Verwendung der Ohrdermis als Infektions- oder Expositionsweg etabliert werden kann. Die Ohren wurden von zwei Tieren 28 Tage nach der Provokation entnommen, homogenisiert und plattiert, wie auf dem Mykobakterien-selektiven 7H10-Medium beschrieben. Wir beobachteten, dass M. avium bis zu 28 Tage in Ohren persistierte, die intradermal herausgefordert wurden, und dass M. avium in den unbestrittenen Ohren fehlte (Abbildung 2).
Während wir 28 Tage nach der Infektion keine Ausbreitung in das unbehelligte Ohr beobachteten, haben andere, die dieses Ohrdermismodell für die Modellierung latenter TB verwendeten, eine Ausbreitung auf andere distale Organstellen beobachtet14. Wir stellten die Hypothese auf, dass eine niedrigere Dosis der Provokation und die Verwendung von M. avium-Isolat die Ausbreitung auf spätere Zeitpunkte reduzieren könnte, die die Exposition im Vergleich zu einer chronischen Infektion besser widerspiegeln könnten. Daher wurde die Euthanasie an Kohorten von n=5 M. avium herausgeforderten Mäusen 28, 56, 90 und 132 Tage nach der Infektion durchgeführt. Die folgenden Organe wurden mit dem gleichen Protokoll wie für das Ohrgewebe homogenisiert: Lunge, Milz, drainierender Lymphknoten (DLN) und Gehirn. Dieser Provokationsweg führte zu einer sporadischen Ausbreitung im Laufe der Zeit, wobei weniger als die Hälfte der Tiere 56 oder 90 Tage nach der Infektion eine zählbare KBE in den getesteten Organen aufwiesen (Tabelle 1). 132 Tage nach der Provokation hatten alle Mäuse nachweisbare M. avium in ihrer Milz (n = 5/5 bewertete Tiere), schienen aber zu diesem Zeitpunkt nur minimale (n = 1/5 in DLN) oder keine (n = 0/5 in Lunge oder Gehirn) Bakterien in anderen Organen zu beherbergen (Tabelle 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig1.jpg"> 
Abbildung 1: Ausrichtung einer Nadel mit der abgeschrägten Seite nach oben. Vor dem Einführen der Nadel muss die abgeschrägte Seite nach oben zeigen, um das Inokulum richtig zu verabreichen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig2.jpg"> 
Abbildung 2: Besiedlung des Ohrgewebes durch M. avium 28 Tage nach der Provokation. Weibliche C57BL/6-Mäuse wurden im Ohr mit 102 KBE Mycobacterium avium provoziert. Das herausgeforderte Ohr (+) wurde nach 28 Tagen mit dem unbehelligten Ohr (-) verglichen, n=2 einzelne Tiere aus einem einzigen gezeigten Experiment, wobei jedes Tier eine andere Farbe und ein anderes Symbol hatte. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Uhrzeit (Tag)</td>
			<td colspan="4">Organprotokoll10 KBE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lunge</td>
			<td>Milz</td>
			<td>DLN</td>
			<td>Gehirn</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28</td>
			<td>3.08, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>2.81, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,78, 0,90, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>56</td>
			<td>2.30, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1.53, 3.43, ND, ND, ND</td>
			<td>2.78, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1.20, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,60, 3,35, 3,26, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0.60, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>132</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>4.03, 3.58, 3.58, 4.03, 3.69</td>
			<td>2.41, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="5">DLN = drainierender Lymphknoten, ND = nicht erkannt</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabelle 1: Ausbreitung von M. avium aus dem Ohr im Laufe der Zeit nach der Provokation. Lunge, Milz, drainierender Lymphknoten (DLN) und Gehirn wurden von n=5 Mäusen pro Zeitpunkt nach der Challenge entnommen. Homogenisierte Gewebe wurden plattiert und auf Bakterienwachstum untersucht. Organ-KBE dargestellt als logarithmisch10 transformierte Werte, bei denen Bakterien gezählt und nicht nachgewiesen wurden (ND), bei denen bei keiner der plattierten Konzentrationen KBE beobachtet wurden. Zeitverlaufsdaten, die für ein Experiment repräsentativ sind.

Intradermale Inokulation von Mycobacterium avium im Mausohr

In contrast to natural nontuberculous mycobacterial (NTM) exposures or infections whose pathology is founded on a slow-replicating organism, the aerosol ...

intradermal-inoculation-of-mycobacterium-avium-in-the-mouse-ear

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video zeigt die Induktion einer systemischen Entzündung bei einer anästhesierten Maus. Die Injektion von mykobakteriellen Antigen-Adjuvans-Depots löst die Freisetzung von Zytokinen und eine lokalisierte Entzündung aus. Die Lymphgefäße öffnen sich, was den Eintritt von Immunzellen in die Lymphknoten und die Aktivierung von T-Zellen ermöglicht, die entzündungsfördernde Zytokine freisetzen, was zu einer weit verbreiteten Entzündung führt.

Subkutane Injektion von bakteriellem Antigen zur Induktion einer systemischen Entzündung in einem Mausmodell

Dieses Video zeigt eine Methode zur Generierung eines Mausmodells der geprimten mykobakteriellen Uveitis (PMU) zur Untersuchung der postinfektiösen Uveitis. Bei der Induktion von PMU durch intravitreale Injektion von hitzeabgetötetem Mycobacterium tuberculosis bei einer Maus, die zuvor mit demselben Immungen immunisiert wurde, wird das Fortschreiten der chronischen Entzündung im Auge mittels Bildgebung und histopathologischer Untersuchung...

Ein Mausmodell der geprimten mykobakteriellen Uveitis zur Untersuchung der postinfektiösen Uveitis

Das Video zeigt die Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in einem Mausmodell durch Injektion einer Kombination aus Myelin-Oligodendrozyten-Glykoproteinen und inaktiviertem Mycobacterium tuberculosis. Das Modell ermöglicht es Forschenden, Krankheitsmechanismen zu untersuchen und therapeutische Interventionen zu testen.

Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis im Mausmodell

Dieses Video zeigt einen Assay zur Immunisierung eines Mausmodells mit lebenden abgeschwächten Sporozoiten. Die strahlengedämpften  Plasmodium-Sporozoiten werden in die dorsale Seite des Ohrs der Maus injiziert. Nach Injektionen an mehreren Stellen auf beiden Ohren kann sich die Maus erholen.

Intradermale Immunisierung mit lebenden abgeschwächten Sporozoiten in einem Mausmodell

In diesem Video wird ein Mausmodell für Multiple Sklerose mit Hilfe der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) erstellt. Der Maus wird eine Emulsion injiziert, die ein neuronales Peptid und ein Adjuvans enthält, wodurch eine Immunantwort ausgelöst wird, die autoreaktive T-Zellen aktiviert. Darauf folgt eine Injektion von Pertussis-Toxin (PTX), um die Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke zu erhöhen, so dass die autoreaktiven T-Zellen das Gehirn infiltrieren können. Diese...

Die extrazelluläre Matrix unterliegt erheblichen Umbau während der Wundheilung, Entzündung und Tumorgenese. Wir präsentieren einen neuartigen Ansatz Intravital-Immunfluoreszenz-Mikroskopie, die Dynamik der Fibrillen sowie netzartige Matrix-Komponenten mit hoher räumlicher und zeitlicher Auflösung mit Epi-Fluoreszenz-oder Zwei-Photonen-Mikroskopie visualisieren.

Langzeit-Intravitalimmunfluoreszenz-Imaging von Gewebematrix Bestandteile mit Epifluoreszenz und Zwei-Photonen-Mikroskopie

Die Mechanismen, die die interstitielle Motilität von CD4 Effektor T-Zellen an Entzündungsstellen bestimmen, sind relativ unbekannt. Wir stellen eine nicht-invasive Ansatz zu visualisieren und in vitro -geprimte CD4 - T - Zellen in den entzündeten Ohr Dermis, so dass für das Studium des dynamischen Verhaltens dieser Zellen in situ zu manipulieren.

Imaging CD4 T-Zell-Interstitial Migration in den entzündeten Dermis

Ein Assay an Mäusen zur Verfolgung der Zellmigration von der Haut zum drainierenden Lymphknoten wird beschrieben, der die Charakterisierung von dendritischen Zellen der Haut ermöglicht, die nach einer Balleninfektion mit Bacille Calmette-Guérin zum Lymphknoten mobilisiert wurden.

Ein CFSE-basierten Assay die Migration von murinen Haut Dendritischen Zellen in Lymphknoten während der Infektion zu studieren mit<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bazillus Calmette-Guérin

In diesem Bericht stellen wir ein Protokoll vor, das es dem Prüfarzt ermöglicht, ein Mausmodell der intraokularen Uveitis zu erstellen. Dieses etablierte Modell, das gemeinhin als experimentelle Autoimmun-Uveitis (EAU) bezeichnet wird, erfasst viele Aspekte menschlicher Erkrankungen. Im Folgenden beschreiben wir, wie das Fortschreiten der Krankheit mit mehreren Ablesungen induziert und überwacht werden kann.

Experimentelle autoimmune Uveitis: Ein intraokulares entzündliches Mausmodell

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte zur Induktion der Primed Mycobacterial Uveitis (PMU) bei Mäusen. Diese Methode beschreibt die Schritte, um eine zuverlässige und robuste Augenentzündung im Mausmodellsystem zu erzeugen. Mit diesem Protokoll erzeugten wir uveitische Augen und entzündete Augengenossen von einzelnen Tieren zur weiteren Auswertung mit immunologischen, transkriptomischen und proteomischen Assays.

Primed Mycobacterial Uveitis (PMU) als Modell für postinfektiöse Uveitis

Mäuse sind im Allgemeinen resistent gegen Infektionen mit Mycobacterium abscessus, was die Entdeckung und Entwicklung dringend benötigter Antibiotika gegen Lungeninfektionen erschwert. Hier beschreiben wir eine Methode der Inokulumvorbereitung und intratrachealen Infektion, die bei immunkompetenten Mäusen nachweislich eine anhaltende Infektion auslöst.

Vorbereitung von in Agarperlen eingebettetem Mycobacterium abscessus zur intratrachealen Inokulation immunkompetenter Mäuse

Erfahren Sie die intradermale Inokulation von Mycobacterium avium im Mausohr zur Untersuchung von Immunantworten auf nicht-tuberkulöse Mykobakterien. Dieses Modell ermöglicht kontrollierte Infektionsstudien in vivo.

Intradermale Inokulation von Mycobacterium avium im Mausohr

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