Quantitative Polymerase-Kettenreaktionsanalyse der Magenschleimhaut zum Nachweis von Helicobacter pylori und Antibiotikaresistenz

In dieser Studie wird QPCR an der Magenschleimhaut verwendet, um Helicobacter pylori und seine Antibiotikaresistenz schnell zu erkennen, und bietet ein schnelles, genaues diagnostisches Instrument mit großer klinischer Bedeutung für die Behandlung dieser Infektion. Es ist von entscheidender Bedeutung, die Qualitätskontraststandards für die QPCR sicherzustellen. Folglich ist die QPCR-IC zum Nachweis von Helicobacter pylori an bestimmte Kriterien gebunden, und jede Bedingung muss gleichzeitig erfüllt werden.

Frühe Abweichung macht den Test ungültig, der wiederholt werden muss. Wir brauchen ein leistungsfähiges und umfassendes diagnostisches Instrument, um Helicobacter pylori und Arzneimittelresistenzen zu erkennen. Wir verwenden die Magenschleimhaut QPCR.

Zu diesem Zweck verwenden wir spezielle Grundierungen. Wir glauben, dass zukünftige Studien mit größeren Patientengruppen das volle Potenzial der QPCR der Magenschleimhaut validieren und ausschöpfen werden, um die Diagnose, Überwachung und Behandlung von Helicobacter pylori zu verbessern. Öffnen Sie zunächst das Biopsie-Klemmventil und bewegen Sie es langsam zur dominanten Hand.

Wenn sich der Kopf der Pinzette im Sichtfeld befindet, öffnen Sie die Klemmklappe und manipulieren Sie das Endoskop an der Magenschleimhaut der Probenahmestelle. Üben Sie leichten Druck aus und schließen Sie die Biopsiezange, um das Magenschleimhautgewebe zu klemmen. Entnehmen Sie mit einer Zange die Gewebeproben und legen Sie sie in das Probenahmeröhrchen mit der Konservierungsflüssigkeit.

Sobald alle Stellen beprobt wurden, ziehen Sie den Deckel des Probenahmeröhrchens fest und versiegeln Sie ihn, um ein Austrocknen zu verhindern. Beschriften Sie die Röhrchen mit einer eindeutigen Identifikationsnummer auf der Außenseite. Senden Sie die entnommenen Proben so schnell wie möglich zum Testen und vermeiden Sie eine Lagerung.

Stellen Sie die Temperatur eines Metallbades im Voraus auf 100 Grad Celsius ein. Wenn die Probe gefroren ist, nehmen Sie sie heraus und lassen Sie sie Raumtemperatur erreichen. Mischen Sie das Lysat gründlich, um das Aminodiessigsäureharz zu suspendieren.

Nehmen Sie 100 Mikroliter Lysat in ein Zentrifugenröhrchen mit einem Filterelement und fügen Sie Magenschleimhaut hinzu. Mischen Sie den Inhalt mit Hilfe der Wirbeloszillation. Legen Sie das Zentrifugenröhrchen für 10 Minuten bei 100 Grad Celsius in das Metallbad.

Entfernen Sie nach dem Erhitzen das Rohr und lassen Sie es auf Raumtemperatur abkühlen. Zentrifugieren Sie die Probe fünf bis 10 Minuten lang bei 9.500 g und überführen Sie den Überstand vorsichtig in ein anderes sterilisiertes, markiertes Zentrifugenröhrchen. Wenn Sie nicht sofort mit dem nächsten Schritt fortfahren, lagern Sie die Probe vorübergehend bei vier Grad Celsius.

Entfernen Sie die Primersonde, die gemischte Enzymlösung und den Nachweispuffer aus dem Kit. Schmelzen Sie alle Komponenten auf Eis oder bei zwei bis acht Grad Celsius. Um die Proben zu mischen, schütteln Sie sie vorsichtig und führen Sie eine kurze Zentrifugation bei niedriger Geschwindigkeit durch.

Mischen Sie 12,5 Mikroliter Nachweispuffer, sieben Mikroliter Primersonde und 0,5 Mikroliter Enzymlösung. Den Inhalt im Röhrchen mischen und kurz zentrifugieren. Geben Sie 20 Mikroliter der PCR-Reaktionslösung ab und geben Sie fünf Mikroliter Nukleinsäure in jede PCR-Reaktionsvertiefung.

Setzen Sie das Reaktionsröhrchen in den Fluoreszenz-PCR-Thermocycler ein. Stellen Sie die Zyklusparameter ein und führen Sie das Programm aus. Sammeln Sie Fluoreszenzsignale bei 58 Grad Celsius für die gewünschten Marker.

Speichern Sie nach der Reaktion die Daten und analysieren Sie sie mit einer speziellen QPCR-Software. Die QPCR-Tests bestätigten das Vorhandensein von Helicobacter pylori in den Proben A, B, C und E, während Probe F negativ getestet wurde. Probe A war empfindlich gegenüber beiden Antibiotika.

Probe B zeigte eine Resistenz sowohl gegen Clarithromycin als auch gegen Levofloxacin. Probe C zeigte eine Resistenz gegen Clarithromycin, bleibt aber anfällig für Levofloxacin. Probe E war resistent gegen Levofloxacin, aber anfällig für Clarithromycin.