Name: Effektive und sichere Genabgabe an die Mausniere durch langsame retrograde Injektion von Adeno-assoziierten Virusvektoren in das Nierenbecken (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Lernen Sie eine sichere Methode zur Gentransfer in die Mäuseniere durch langsame retrograde Injektion von AAV-Vektoren in das Nierenbecken. Diese Technik ermöglicht effiziente Transduktion proximaler Tubuli ohne Gewebeschäden.

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<table><tbody><tr><td>0,45 &micro;m PVDF Spritzfilter</td><td>MilliporeSigma</td><td>SLHVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Polypropylen-Röhrchen</td><td>Corning</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>16% Paraformaldehyd (PFA)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>250 ml Zentrifugenflasche</td><td>Fisher Scientific</td><td>055641S24</td><td></td></tr><tr><td>2F Silikonschlauch</td><td>Sai Infusion Technologies</td><td>SIL-2-50&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>25G Schmetterlingsnadel</td><td>Medex Supply</td><td>26708</td><td></td></tr><tr><td>2-Methylbutan</td><td>MilliporeSigma</td><td>MX0760</td><td></td></tr><tr><td>2x qPCR-Reaktionspuffer</td><td>Fisher Scientific</td><td>43-676-59</td><td>Power SYBR Green PCR Master Mix</td></tr><tr><td>30G Nadel</td><td>Becton-Dickinson &amp; Co</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Polypropylen-Röhrchen</td><td>Corning</td><td>430291</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Monofilamentnaht</td><td>Ethicon</td><td>Y463G</td><td></td></tr><tr><td>5 M NaCl</td><td>Lonza</td><td>51202</td><td></td></tr><tr><td>6-0 absorbierbare Naht</td><td>Ethicon</td><td>J489G</td><td></td></tr><tr><td>7,5% Mini-PROTEAN TGX Fertiggele Protein-Gele, 10-Well, 30 &micro;L</td><td>Bio-Rad</td><td>4561023</td><td></td></tr><tr><td>Amersham ImageQuant 800 Western Blot Imaging System (Cytiva)</td><td>Cytiva</td><td>29459405</td><td></td></tr><tr><td>Amicon 100 kDa MWCO, 15 ml Röhrchen</td><td>Millipore Sigma</td><td>UFC910024</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Aquaporin 2 (AQP2) Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab199975</td><td>Ein Marker für Sammelrohrzellen</td></tr><tr><td>Anti-Na-K-2Cl-Cotransporter 2 (NKCC2) Antikörper</td><td>StressMarq Biosciences</td><td>SPC-401</td><td>Ein Marker für Zellen des aufsteigenden Dickenteils</td></tr><tr><td>Anti-Kaninchen IgG Alexa Fluor 647 Antikörper</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>111-605-144</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Wilms-Tumor 1 (WT1) Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab89901</td><td>Ein Marker für Podozyten</td></tr><tr><td>Beckman Coulter OptiSeal Tube, Polypropylen, 29,9 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9691210</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Coulter OPTISEAL TUBES</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9611575</td><td></td></tr><tr><td>Benzonase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1016970001</td><td></td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5470</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugales Ultrafiltrationsröhrchen</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC9100</td><td>Amicon 100 kDa MWCO, 15 ml</td></tr><tr><td>Keramikperlenröhrchen</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-340-154</td><td></td></tr><tr><td>Cäsiumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3032-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Klammerzange</td><td>Fine Science Tools</td><td>00071-14</td><td></td></tr><tr><td>Geschlossene Wärmematte</td><td>Stryker Medical</td><td>8002-062-012</td><td></td></tr><tr><td>Baumwollspitzen-Applikator</td><td>Puritan</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>Deckglas</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541B</td><td></td></tr><tr><td>Kryostatmikrotom</td><td>Tanner Scientific</td><td>TN50</td><td></td></tr><tr><td>Gebogene Zange</td><td>Fine Science Tools</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Mikrogefäßklemme gekrümmter Typ</td><td>Kleinert-Kutz</td><td>65145</td><td>Klammer für die Nierenarterie und die Nierenvene</td></tr><tr><td>Dialysekassette</td><td>Fisher Scientific</td><td>PIA52976</td><td></td></tr><tr><td>DNA-Extraktionskit</td><td>Qiagen</td><td>57704</td><td>QIAamp MinElute Virus Spin Kit</td></tr><tr><td>D-Sorbitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6021-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modifiziertes Eagle-Medium- mit hohem Glukosegehalt</td><td>Corning</td><td>15-013-CV</td><td>DMEM-hoch Glucose (4,5 g/L)</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-575-020</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>2716GEA</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Kalbsserum (FBS)</td><td>VWR</td><td>89510-186</td><td></td></tr><tr><td>Gasdichte Spritze aus Glas</td><td>Hamilton</td><td>1710 TLL</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehydlösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6257</td><td></td></tr><tr><td>Wärmetherapiepumpe</td><td>Kent Scientific</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4034-100G</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Invitrogen</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>Homogenisator</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-340-163</td><td></td></tr><tr><td>Menschliches embryonales Nieren- (HEK) 293 Zellen</td><td>Agilent</td><td>240073</td><td></td></tr><tr><td>Eiswanne</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-210-104</td><td></td></tr><tr><td>Infusionsspritzenpumpe</td><td>Harvard Apparatus</td><td>70-4507</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Fisher Scientific</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Liquid Blocker Pen</td><td>Ted Pella</td><td>22309</td><td></td></tr><tr><td>Lotus tetragonolobus Lektin (LTL)- Fluorescein</td><td>Vector Laboratories</td><td>FL-1321-2</td><td>Ein Marker für proximale Tubuli</td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid (MgCl2)</td><td>MilliporeSigma</td><td>M1028</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>VetOne</td><td>NDC 86136-012-10</td><td>Analgetikum</td></tr><tr><td>Mikroskop-Objektträger</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Montiermittel</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Fine Science Tools</td><td>12501-13</td><td></td></tr><tr><td>OCT-Compound</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Ophthalmische Salbe</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td>NDC 24208-313-34</td><td></td></tr><tr><td>PE-10 Polyethylen-Röhrchen</td><td>BD</td><td>427401</td><td>Innendurchmesser: 0,28 mm</td></tr><tr><td>Penicillin &amp; Streptomycin Mix</td><td>Fisher Scientific</td><td>15140

effektive und sichere genabgabe an die mausniere durch langsame retrograde injektion von adeno-assoziierten virusvektoren in das nierenbecken

Effective and Safe Gene Delivery to the Mouse Kidney via Slow Retrograde Renal Pelvis Injection of Adeno-Associated Virus Vectors

Effektive und sichere Genabgabe an die Mausniere durch langsame retrograde Injektion von Adeno-assoziierten Virusvektoren in das Nierenbecken

The development of effective in vivo tools and methods for gene delivery to the kidney is crucial for advancing basic kidney research and gene therapy for ...

effective-safe-gene-delivery-to-mouse-kidney-via-slow-retrograde

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In diesem Video demonstrieren wir die rekombinante Adeno-assoziierte Virus-basierte Genabgabe im Maus-Welpen. Diese Methode hilft bei der Untersuchung der Genexpression in den Zielzellen.

Rekombinante Adeno-assoziierte virusbasierte Genverabgabung: Eine Technik für die transgene Verabreichung und kardiospezifische Expression im Nagetiermodell

Quelle:Pourshafie, N., et al. Systemische Verabreichung von microRNA unter Verwendung des rekombinanten Adeno-assoziierten Virus Serotyp 9 zur Behandlung neuromuskulärer Erkrankungen bei Nagetieren. J. Vis. Exp. (2018).In diesem Video wird eine von spinaler und bulbärer Muskelatrophie oder SBMA betroffene Maus einer Schwanzveneninjektion von rekombinanten AAV-Vektoren (Adeno-assoziierten Vektoren) unterzogen, die ein Plasmid tragen, das für therapeutische microRNA kodiert. Der Vektor produziert...

Injektion rekombinanter adeno-assoziierter Vektoren in einem Mausmodell für spinale und bulbäre Muskelatrophie

Implantation von Krebszellen in das Ursprungsorgan als nützliches präklinischen Modell, um neue Therapien zu evaluieren zu dienen. MB49-Blasenkarzinomzellen in der Blase nach intravesikale Instillation gezüchtet werden. Dieses Protokoll zeigt, Katheterisierung der Blase der Maus für die Zwecke der Tumorimplantation und adenoviraler Lieferung.

Ein orthotopen Blasenkrebs-Modell für Gene Delivery Studies

Der beschriebene postaurikuläre chirurgische Ansatz ermöglicht eine schnelle und direkte Verabreichung in die Cochlea-Scala tympani der Maus bei gleichzeitiger Minimierung des Blutverlusts und der Tiersterblichkeit. Diese Methode kann für die Cochlea-Therapie mit molekularer, pharmakologischer und viraler Verabreichung an postnatale Mäuse durch die runde Fenstermembran verwendet werden.

Chirurgische Verfahren zum viral vermittelte Gentransfer in die Maus-Innenohr über die runde Fenstermembran

In diesem Manuskript wird eine Methode zur Herstellung rekombinanter Adeno-assoziierter Virus 9 (rAAV9) Vektoren zur Manipulation der Genexpression im Mausherz beschrieben.

Herstellung von rAAV9 überexprimiert oder Sturz Gene in Mäuseherzen

Hier beschreiben wir die Lieferung von MicroRNA verwenden ein rekombinantes Adeno-assoziierten Virus Serotyp 9 in einem Mausmodell der neuromuskulären Erkrankungen. Eine einzelne periphere Verabreichung bei Mäusen führte zu nachhaltigen MiRNA Überexpression in Muskel und motorischen Neuronen, bietet eine Möglichkeit, MiRNA Lernfunktion und therapeutische Potenzial in Vivo.

Systemische Lieferung von MicroRNA mit rekombinanten Adeno-assoziierten Virus Serotyp 9 zur Behandlung von neuromuskulärer Erkrankungen bei Nagern

Das Ziel der vorliegenden Studie war es, die Potenz und Sicherheit der spinalen Adeno-assoziierten Virus 9 (AAV9) -vermittelten Genabgabe zu entwickeln und zu validieren, indem eine neuartige subpiale Genabgabetechnik bei erwachsenen Mäusen verwendet wurde.

Subpial Adeno-assoziiertes Virus 9 (AAV9) Vektorlieferung in erwachsenen Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zum Injizieren von Plasmid DNA in der Mausniere über das Nierenbecken, Transgene Ausdruck speziell in der Niere zu produzieren.

Hydrodynamische Nierenbecken Injektion für nicht-virale Expression von Proteinen in der Niere

Wir beschreiben eine neue Methode für die Lieferung von Plasmid DNA in die important-Zellen der Maus Blase in Vivo durch Katheterisierung der Harnröhre und Elektroporation. Freuen Sie sich auf eine schnelle und bequeme Möglichkeit zur Erzeugung von autochthonen Mausmodelle der Blase Krankheiten.

Neuartige Methode der Transport der Plasmid-DNA zu Maus Blase Urothel durch Elektroporation

Im Folgenden stellen wir ein optimiertes Protokoll für die Injektion von seitlichen Schwanzvenen aus der Maus zur systemischen Verabreichung von Adeno-assoziierten Viren (AAV) bei adulten Mäusen vor. Darüber hinaus beschreiben wir Protokolle von häufig verwendeten Assays zur Beurteilung der AAV-Transduktion.

Konsistente Verabreichung des Adeno-assoziierten Virus durch laterale Schwanzveneninjektion bei erwachsenen Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt, wie die intrasplenische Injektion von AAV8-zugeführter kleiner Haarnadel-RNA in der Leber die gleiche Gen-Knockdown-Effizienz wie die Pfortader-Injektion erreicht, was ein einfacheres Verfahren mit viel geringerer perioperativer und postoperativer Mortalität und Komplikationen darstellt.

Effizienter Gen-Knockdown in der Leber durch intrasplenische Injektion von Adeno-assoziierter Virus-Serotyp 8 (AAV8)-abgegebener kleiner Haarnadel-RNA

Lernen Sie eine sichere Methode zur Gentransfer in die Mäuseniere durch langsame retrograde Injektion von AAV-Vektoren in das Nierenbecken. Diese Technik ermöglicht effiziente Transduktion proximaler Tubuli ohne Gewebeschäden.

Effektive und sichere Genabgabe an die Mausniere durch langsame retrograde Injektion von Adeno-assoziierten Virusvektoren in das Nierenbecken (Video) | JoVE Journal

Effektive und sichere Genabgabe an die Mausniere durch langsame retrograde Injektion von Adeno-assoziierten Virusvektoren in das Nierenbecken

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