Name: Genome Editing bei der Gelbfiebermücke Aedes aegypti mittels CRISPR-Cas9 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Erfahren Sie CRISPR-Cas9-Genomeditierung bei Aedes aegypti zur Herstellung genetisch modifizierter Mückenlinien. Diese Methode ermöglicht Knockout- und Knockin-Linien für Vektorbekämpfung und genetische Forschung.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Anzalone, A. V., Koblan, L. W., Liu, D. R. Genome editing with CRISPR-Cas nucleases, base editors, transposases and prime editors. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAnzalone%2C+AV+%22Nat+Biotechnol%22">Nat Biotechnol</a>. 38 (7), 824-844 (2020).</li>
<li>Garneau, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CRISPR%2FCas+bacterial+immune+system+cleaves+bacteriophage+and+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA.</a> Nature. 468 (7320), 67-71 (2010).</li>
<li>Jinek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+programmable+dual-RNA-guided+DNA+endonuclease+in+adaptive+bacterial+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.</a> Science. 337 (6096), 816-821 (2012).</li>
<li>Shen, H., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+double-strand+break+repairs+and+their+application+in+plant+DNA+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">DNA double-strand break repairs and their application in plant DNA integration.</a> Genes (Basel). 13 (2), 322(2022).</li>
<li>Vinauger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+host+learning+in+Aedes+aegypti+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of host learning in Aedes aegypti mosquitoes.</a> Curr Biol. 28 (3), 333-344.e8 (2018).</li>
<li>Li, M., Bui, M., Yang, T., Bowman, C. S., White, B. J., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+Cas9+expression+yields+highly+efficient+genome+engineering+in+a+major+worldwide+disease+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Germline Cas9 expression yields highly efficient genome engineering in a major worldwide disease vector.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (49), E10540-E10549 (2017).</li>
<li>Chaverra-Rodriguez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+CRISPR-Cas9+ribonucleoprotein+into+arthropod+ovaries+for+heritable+germline+gene+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of CRISPR-Cas9 ribonucleoprotein into arthropod ovaries for heritable germline gene editing.</a> Nat Commun. 9 (1), 3008(2018).</li>
<li>Rouyar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+line+for+characterizing+GABA-receptor+expression+to+study+the+neural+basis+of+olfaction+in+the+yellow-fever+mosquito%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transgenic line for characterizing GABA-receptor expression to study the neural basis of olfaction in the yellow-fever mosquito.</a> Front Physiol. 15, 1381164(2024).</li>
<li>Ang, J. X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+homology-based+DNA+repair+in+mosquitoes%3A+Impact+of+sequence+heterology+and+donor+template+source%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Considerations for homology-based DNA repair in mosquitoes: Impact of sequence heterology and donor template source.</a> PLoS Genet. 18 (2), e1010060(2022).</li>
<li>Zhang, J. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+precise+knockin+with+a+double+cut+HDR+donor+after+CRISPR%2FCas9-mediated+double-stranded+DNA+cleavage%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient precise knockin with a double cut HDR donor after CRISPR/Cas9-mediated double-stranded DNA cleavage.</a> Genome Biol. 18 (1), 35(2017).</li>
<li>Coutinho-Abreu, I. V., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technological+advances+in+mosquito+olfaction+neurogenetics%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Technological advances in mosquito olfaction neurogenetics.</a> Trends Genet. 39 (2), 154-166 (2023).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+sex+determination+to+suppress+mosquito+populations%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Targeting sex determination to suppress mosquito populations.</a> eLife. 12, RP90199(2024).</li>
<li>Zhan, Y., Alonso San Alberto, D., Rusch, C., Riffell, J. A., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elimination+of+vision-guided+target+attraction+in+Aedes+aegypti+using+CRISPR%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biol%22%5BJournal%5D)">Elimination of vision-guided target attraction in Aedes aegypti using CRISPR.</a> Current Biol. 31 (18), 4180-4187.e6 (2021).</li>
<li>Greppi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+heat+seeking+is+driven+by+an+ancestral+cooling+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mosquito heat seeking is driven by an ancestral cooling receptor.</a> Science. 367 (6478), 681-684 (2020).</li>
<li>Potter, C. J., Tasic, B., Russler, E. V., Liang, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Q+system%3A+a+repressible+binary+system+for+transgene+expression%2C+lineage+tracing%2C+and+mosaic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Q system: a repressible binary system for transgene expression, lineage tracing, and mosaic analysis.</a> Cell. 141 (3), 536-548 (2010).</li>
<li>Riabinina, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+and+expanded+Q-system+reagents+for+genetic+manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Improved and expanded Q-system reagents for genetic manipulations.</a> Nat Methods. 12 (3), 5 p following 222 219-222 (2015).</li>
<li>Labun, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHOPCHOP+v3%3A+expanding+the+CRISPR+web+toolbox+beyond+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">CHOPCHOP v3: expanding the CRISPR web toolbox beyond genome editing.</a> Nucleic Acids Res. 47 (W1), W171-W174 (2019).</li>
<li>Concordet, J. -P., Haeussler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPOR%3A+intuitive+guide+selection+for+CRISPR%2FCas9+genome+editing+experiments+and+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">CRISPOR: intuitive guide selection for CRISPR/Cas9 genome editing experiments and screens.</a> Nucleic Acids Res. 46 (W1), W242-W245 (2018).</li>
<li>Williams, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+fitness+costs+in+transgenic+Aedes+aegypti+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantifying fitness costs in transgenic Aedes aegypti mosquitoes.</a> J Vis Exp. , e65136(2023).</li>
<li>Bassett, A. R., Tibbit, C., Ponting, C. P., Liu, J. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+targeted+mutagenesis+of+Drosophila+with+the+CRISPR%2FCas9+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Highly efficient targeted mutagenesis of Drosophila with the CRISPR/Cas9 system.</a> Cell Rep. 4 (1), 220-228 (2013).</li>
<li>Coutinho-Abreu, I. V., Zhu, K. Y., Ramalho-Ortigao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenesis+and+paratransgenesis+to+control+insect-borne+diseases%3A+current+status+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol+Int%22%5BJournal%5D)">Transgenesis and paratransgenesis to control insect-borne diseases: current status and future challenges.</a> Parasitol Int. 59 (1), 1-8 (2010).</li>
<li>Christian, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+DNA+double-strand+breaks+with+TAL+effector+nucleases%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases.</a> Genetics. 186 (2), 757-761 (2010).</li>
<li>Kim, Y. G., Cha, J., Chandrasegaran, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+restriction+enzymes%3A+zinc+finger+fusions+to+Fok+I+cleavage+domain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hybrid restriction enzymes: zinc finger fusions to Fok I cleavage domain.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93 (3), 1156-1160 (1996).</li>
<li>DeGennaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((orco+mutant+mosquitoes+lose+strong+preference+for+humans+and+are+not+repelled+by+volatile+DEET%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">orco mutant mosquitoes lose strong preference for humans and are not repelled by volatile DEET.</a> Nature. 498 (7455), 487-491 (2013).</li>
<li>McMeniman, C. J., Corfas, R. A., Matthews, B. J., Ritchie, S. A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+integration+of+carbon+dioxide+and+other+sensory+cues+drives+mosquito+attraction+to+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multimodal integration of carbon dioxide and other sensory cues drives mosquito attraction to humans.</a> Cell. 156 (5), 1060-1071 (2014).</li>
<li>Lobo, N. F., Clayton, J. R., Fraser, M. J., Kafatos, F. C., Collins, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+efficiency+germ-line+transformation+of+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High efficiency germ-line transformation of mosquitoes.</a> Nat Protoc. 1 (3), 1312-1317 (2006).</li>
<li>Kistler, K. E., Vosshall, L. B., Matthews, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+engineering+with+CRISPR-Cas9+in+the+mosquito+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Genome engineering with CRISPR-Cas9 in the mosquito Aedes aegypti.</a> Cell Rep. 11 (1), 51-60 (2015).</li>
<li>Handler, A. M., Harrell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2nd+Transformation+of+the+Caribbean+fruit+fly%2C+Anastrephasuspensa%2C+with+a+piggyBac+vector+marked+with+polyubiquitin-regulated+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">2nd Transformation of the Caribbean fruit fly, Anastrephasuspensa, with a piggyBac vector marked with polyubiquitin-regulated GFP.</a> Insect Biochem Mol Biol. 31 (2), 199-205 (2001).</li>
<li>Harrell, R. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarrell%2C+RA+%222nd+Mosquito+embryo+microinjection+under+halocarbon+oil+or+in+aqueous+solution%22">2nd Mosquito embryo microinjection under halocarbon oil or in aqueous solution</a>. 2024 (7), Cold Spring Harb Protoc. (2024).</li>
<li>Sun, R., Raban, R., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+mutant+strains+with+transgenic+Cas9%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generating mutant strains with transgenic Cas9.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2023 (9), 671-678 (2023).</li>
<li>Giraldo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+expanded+neurogenetic+toolkit+to+decode+olfaction+in+the+African+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">An expanded neurogenetic toolkit to decode olfaction in the African malaria mosquito Anopheles gambiae.</a> Cell Rep Methods. 4 (2), 100714(2024).</li>
<li>Liu, G., Lin, Q., Jin, S., Gao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CRISPR-Cas+toolbox+and+gene+editing+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">The CRISPR-Cas toolbox and gene editing technologies.</a> Mol Cell. 82 (2), 333-347 (2022).</li>
<li>Chu, V. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+the+efficiency+of+homology-directed+repair+for+CRISPR-Cas9-induced+precise+gene+editing+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Increasing the efficiency of homology-directed repair for CRISPR-Cas9-induced precise gene editing in mammalian cells.</a> Nat Biotechnol. 33 (5), 543-548 (2015).</li>
<li>Laursen, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humidity+sensors+that+alert+mosquitoes+to+nearby+hosts+and+egg-laying+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Humidity sensors that alert mosquitoes to nearby hosts and egg-laying sites.</a> Neuron. 111 (6), 874-887.e8 (2023).</li>
<li>Weng, S. -C., Antoshechkin, I., Marois, E., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+sex+separation+by+exploiting+differential+alternative+splicing+of+a+dominant+marker+in+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Efficient sex separation by exploiting differential alternative splicing of a dominant marker in Aedes aegypti.</a> PLoS Genet. 19 (11), e1011065(2023).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+confinable+gene+drive+system+in+the+human+disease+vector%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Development of a confinable gene drive system in the human disease vector.</a> eLife. 9, e51701(2020).</li>
<li>Dalla Benetta, E., et al. Engineered Antiviral Sensor Targets Infected Mosquitoes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDalla+Benetta%2C+E+%22The+CRISPR+journal%22">The CRISPR journal</a>. 6 (6), 543-556 (2023).</li>
<li>Li, H. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-Type+lectins+link+immunological+and+reproductive+processes+in+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">C-Type lectins link immunological and reproductive processes in Aedes aegypti.</a> iScience. 23 (9), 101486(2020).</li>
<li>van Oers, M. M., Vlak, J. M., Voorma, H. O., Thomas, A. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+3%27+untranslated+region+of+baculovirus+p10+mRNA+in+high-level+expression+of+foreign+genes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Role of the 3' untranslated region of baculovirus p10 mRNA in high-level expression of foreign genes.</a> J Gen Virol. 80 (Pt 8), 2253-2262 (1999).</li>
<li>Salem, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+SV40+polyA+on+gene+expression+of+baculovirus+expression+vector+systems%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">The influence of SV40 polyA on gene expression of baculovirus expression vector systems.</a> PloS One. 10 (12), e0145019(2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x Cas9 Reaktionspuffer</td><td>PNA Bio&nbsp;</td><td>CB01</td><td></td></tr><tr><td>Benchling Software</td><td>Benchling</td><td>N/A</td><td>www.benchling.com</td></tr><tr><td>Cas9 Verdünnungspuffer</td><td>PNA Bio&nbsp;</td><td>CB03</td><td></td></tr><tr><td>Cas9-Protein</td><td>PNA Bio&nbsp;</td><td>CP01-50</td><td></td></tr><tr><td>DH5&alpha; E. coli Competent Cells</td><td>New England Biolabs</td><td>C2987</td><td></td></tr><tr><td>Doppelseitiges Klebeband</td><td>Scotch Permanent</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila Fläschchen</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>32-109</td><td></td></tr><tr><td>Papiere filtern&nbsp;</td><td>GE Healthcare Life Science&nbsp;</td><td>1450-042</td><td></td></tr><tr><td>Fischfutter&nbsp;</td><td>Tetra</td><td>B00025Z6YI</td><td>Goldfischflocken&nbsp;</td></tr><tr><td>Flüge</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>AS273</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszenzmikroskop</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>&nbsp; M165 FC</td><td></td></tr><tr><td>Genfragment</td><td>Integrierte DNA-Technologien</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>gRNA</td><td>Synthego</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Halogenkohlenwasserstofföl 700&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8898</td><td></td></tr><tr><td>Injektionsmikroskop</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>DM2000</td><td></td></tr><tr><td>JM109 &nbsp;E. coli Kompetente Zellen&nbsp;</td><td>Zymo Research</td><td>T3005</td><td></td></tr><tr><td>Mikroinjektor</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>FemtoJet 4x&nbsp;</td></tr><tr><td>Microloader-Spitzen zum Befüllen von Femtotips&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>E5242956003</td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipulator&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>TransferMan 4r&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikropipetten-Abzieher&nbsp;</td><td>Sutter Instrument&nbsp;</td><td>P-2000</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Deckglas&nbsp;</td><td>Fisherbrand&nbsp;</td><td>12-542-B</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger</td><td>Eisco</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>Mausblut (lebende Mäuse zur Fütterung</td>)<td>University of California</td><td>IACUC, Animal Use Protocol #S17187</td><td>Wird für die Fütterung von Mückenblut verwendet; Details entsprechen den Tierethikprotokollen</td></tr><tr><td>NEB Q5 High-Fidelity DNA-Polymerase&nbsp;</td><td>New England Biolabs</td><td>M0491S</td><td></td></tr><tr><td>PCR-Aufreinigungskit</td><td>Qiagen</td><td>28004</td><td></td></tr><tr><td>Plasmid Miniprep Kit&nbsp;</td><td>Zymo Research</td><td>D4036</td><td></td></tr><tr><td>Quarz-Filament&nbsp;</td><td>Sutter Instruments</td><td>QF100-70-10</td><td></td></tr><tr><td>Transkriptions-Reinigungskit</td><td>Fisher Scientific</td><td>AM1908</td><td></td></tr><tr><td>Reinstwasser&nbsp;</td><td>Lebenstechnologien</td><td>10977-023</td><td></td></tr></tbody></table>

genome editing bei der gelbfiebermücke aedes aegypti mittels crispr-cas9

Genome Editing in the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti using CRISPR-Cas9

Design und Validierung von gRNA-vermitteltem Gen-Targeting für die HDR-Homologie-Rekombination Um sicherzustellen, dass das gewünschte Gen genau anvisiert wird, empfehlen wir, einige gRNAs auszuwählen und die 5'- und 3'-Homologiearme in der Nähe der Schnittstelle für die HDR-vermittelte homologe Rekombination zu positionieren (Abbildung 1A). Zum Beispiel haben wir zwei gRNAs so konzipiert, dass sie auf beide Seiten des Startcodons des inte...

Genome Editing bei der Gelbfiebermücke Aedes aegypti mittels CRISPR-Cas9

The emergence of the clustered, regularly interspersed, short palindromic repeats (CRISPR)-Cas9 technology has revolutionized the genetic engineering ...

genome-editing-yellow-fever-mosquito-aedes-aegypti-using-crispr

Research

Forschung

JoVE Journal

Genetics

Genetik

In diesem Video demonstrieren wir die Verabreichung des Gene-Drive-Konstrukts in den Embryo der Anopheles gambiae Mücke durch die Mikroinjektionstechnik des Embryos. Dieses Verfahren ermöglicht die Integration des gelieferten DNA-Konstrukts durch homologe Rekombination in die Keimbahnzellen, um eine transformierte Mückenpopulation zu erzeugen.

Mikroinjektion von Mückenembryonen: Eine Technik zur Verabreichung exogener DNA in das Eigelb des Embryos von Anopheles gambiae, um Keimbahnmutationen zu erzeugen

Wir beschreiben eine Methode zur Erzeugung von quantifizierten-basierten bedingte Knockdown Mutanten in Plasmodium Falciparum CRISPR/Cas9 Genom-Bearbeitung verwenden.

CRISPR/Cas9 gen Bearbeitung zu machen bedingte Mutanten der menschlichen Malaria-Parasiten p. falciparum

Dieses Protokoll beschreibt Mikroinjektionsverfahren für Culex quinquefasciatus-Embryonen, die für die Arbeit mit CRISPR/Cas9-Genbearbeitungswerkzeugen optimiert sind. Diese Technik kann effizient ortsspezifische, vererbbare Keimbahnmutationen erzeugen, die für den Aufbau genetischer Technologien in diesem wenig untersuchten Krankheitsvektor verwendet werden können.

Embryo-Mikroinjektionstechniken für eine effiziente ortsspezifische Mutagenese bei Culex quinquefasciatus

CRISPR/Cas9 wird zunehmend zur Charakterisierung der Genfunktion in Nicht-Modellorganismen eingesetzt. Dieses Protokoll beschreibt, wie Man Knock-out-Linien von Culex pipienserzeugt, von der Vorbereitung von Injektionsmischungen über die Gewinnung und Injektion von Moskitoembryonen bis hin zur Aufzucht, Kreuzung und dem Screening injizierter Moskitos und ihrer Nachkommen auf gewünschte Mutationen.

Vorbereitung und Injektion von Embryonen von Culex-Moskitos zur Erzeugung von Nullmutationen mit CRISPR/Cas9

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte der gezielten Mutagenese von CRISPR/Cas9 bei Sandfliegen: Embryoentnahme, Injektion, Insektenzucht und -identifikation sowie Auswahl von Mutationen von Interesse.

Sandfliege (Phlebotomus papatasi) Embryo Mikroinjektion für CRISPR/Cas9 Mutagenese

Hier wird ein Protokoll der Helicoverpa armigera (Hübner) Embryo-Mikroinjektion und Knockout-Mutantenidentifizierung vorgestellt, das durch CRISPR/Cas9-Genom-Editing erstellt wurde. Mutierte Insekten ermöglichen die weitere Erforschung der Genfunktion und Interaktion zwischen verschiedenen Genen in vivo.

Embryo-Mikroinjektion und Knockout-Mutanten-Identifizierung von CRISPR/Cas9 Genome-Edited Helicoverpa Armigera (Hübner)

Das Protokoll beschreibt, wie mit dem φC31-System ortsgerichtete Modifikationen im Genom von Anopheles-Malariamücken erreicht werden können. Zu den beschriebenen Modifikationen gehören sowohl die Integration als auch der Austausch transgener Kassetten im Genom von attP-tragenden Andockleitungen.

Ortsgerichtete φC31-vermittelte Integration und Kassettenaustausch in Anopheles-Vektoren der Malaria

Dieser Artikel beschreibt ein Protokoll zur schnellen Identifizierung von Indeln, die durch CRISPR/Cas9 induziert werden, und zur Auswahl von Mutantenlinien in der Mücke Aedes aegypti unter Verwendung einer hochauflösenden Schmelzanalyse.

Indel-Nachweis nach CRISPR/Cas9-Mutagenese mittels hochauflösender Schmelzeanalyse in der Mücke Aedes aegypti

Dieser Artikel stellt die Schritt-für-Schritt-Protokolle für die CRISPR/Cas9-Mutagenese der orientalischen Fruchtfliege Bactrocera dorsalis vor. Detaillierte Schritte, die von diesem standardisierten Protokoll bereitgestellt werden, werden als nützlicher Leitfaden für die Erzeugung mutierter Fliegen für funktionelle Genstudien in B. dorsalis dienen.

Protokolle für CRISPR/Cas9-Mutagenese der Orientalischen Fruchtfliege Bactrocera dorsalis

Das vorliegende Protokoll beschreibt, wie gängige Lebensparameterdaten bei Aedes aegypti-Mücken gemessen werden, einschließlich Fruchtbarkeit, Flügelgröße, Fertilität, Geschlechterverhältnis, Lebensfähigkeit, Entwicklungszeiten, männlicher Beitrag und Langlebigkeit adulter Mücken. Diese Messungen können verwendet werden, um die Fitness transgener Stechmücken zu beurteilen.

Quantifizierung der Fitnesskosten bei transgenen Aedes aegypti-Mücken

Erfahren Sie CRISPR-Cas9-Genomeditierung bei Aedes aegypti zur Herstellung genetisch modifizierter Mückenlinien. Diese Methode ermöglicht Knockout- und Knockin-Linien für Vektorbekämpfung und genetische Forschung.

Genome Editing bei der Gelbfiebermücke Aedes aegypti mittels CRISPR-Cas9

Weitere Videos entdecken