Name: Eine effiziente Methode zur Extraktion von Epithelien aus menschlichen Eileitern für Einzelzellanalysen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Lernen Sie eine effiziente Methode zur Isolierung von Epithelzellen aus menschlichen Eileitern für Einzelzellanalysen. Diese Technik ermöglicht Forschern, Ovarialkarzinome besser zu verstehen.

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<ol><li>Crow, J., Amso, N. N., Lewin, J., Shaw, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+and+ultrastructure+of+fallopian+tube+epithelium+at+different+stages+of+the+menstrual+cycle+and+menopause%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Morphology and ultrastructure of fallopian tube epithelium at different stages of the menstrual cycle and menopause.</a> Hum Reprod. 9 (12), 2224-2233 (1994).</li>
<li>Patek, E., Nilsson, L., Johannisson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+electron+microscopic+study+of+the+human+fallopian+tube.+Report+II.+Fetal+life%2C+reproductive+life%2C+and+postmenopause%5BTitle%5D)+AND+%22Fert+Steril%22%5BJournal%5D)">Scanning electron microscopic study of the human fallopian tube. Report II. Fetal life, reproductive life, and postmenopause.</a> Fert Steril. 23 (10), 719-733 (1972).</li>
<li>Coan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+role+of+fallopian+ciliated+cells+in+the+pathogenesis+of+high-grade+serous+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Exploring the role of fallopian ciliated cells in the pathogenesis of high-grade serous ovarian cancer.</a> Int J Mol Sci. 19 (9), 2512(2018).</li>
<li>Leese, H., Tay, J., Reischl, J., Downing, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+fallopian+tubal+fluid%3A+role+of+a+neglected+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Formation of fallopian tubal fluid: role of a neglected epithelium.</a> Reproduction. 121 (3), 339-346 (2001).</li>
<li>Donnez, J., Casanas-Roux, F., Ferin, J., Thomas, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+ciliation+and+cell+height+in+human+tubal+epithelium+in+the+fertile+and+post-fertile+years%5BTitle%5D)+AND+%22Maturitas%22%5BJournal%5D)">Changes in ciliation and cell height in human tubal epithelium in the fertile and post-fertile years.</a> Maturitas. 5 (1), 39-45 (1983).</li>
<li>Lengyel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+atlas+of+the+human+postmenopausal+fallopian+tube+and+ovary+from+single-cell+RNA+and+ATAC+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A molecular atlas of the human postmenopausal fallopian tube and ovary from single-cell RNA and ATAC sequencing.</a> Cell Rep. 41 (12), 111838-111838 (2022).</li>
<li>Tao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+tubal+ciliated+cells+as+a+risk+for+%26%2334%3Bovarian%26%2334%3B+or+pelvic+serous+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Loss of tubal ciliated cells as a risk for &#34;ovarian&#34; or pelvic serous carcinoma.</a> Am J Cancer Res. 10 (11), 3815(2020).</li>
<li>Li, J., Fadare, O., Xiang, L., Kong, B., Zheng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+serous+carcinoma%3A+recent+concepts+on+its+origin+and+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Ovarian serous carcinoma: recent concepts on its origin and carcinogenesis.</a> J Hematol Oncol. 5 (1), 8(2012).</li>
<li>Hu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+repertoire+of+serous+ovarian+cancer+non-genetic+heterogeneity+revealed+by+single-cell+sequencing+of+normal+fallopian+tube+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The repertoire of serous ovarian cancer non-genetic heterogeneity revealed by single-cell sequencing of normal fallopian tube epithelial cells.</a> Cancer Cell. 37 (2), 226-242.e7 (2020).</li>
<li>Dinh, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptomics+identifies+gene+expression+networks+driving+differentiation+and+tumorigenesis+in+the+human+fallopian+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptomics identifies gene expression networks driving differentiation and tumorigenesis in the human fallopian tube.</a> Cell Rep. 35 (2), 108978(2021).</li>
<li>Ulrich, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+heterogeneity+of+human+fallopian+tubes+in+normal+and+hydrosalpinx+disease+states+identified+using+scRNA-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular heterogeneity of human fallopian tubes in normal and hydrosalpinx disease states identified using scRNA-seq.</a> Dev Cell. 57 (7), 914-929.e7 (2022).</li>
<li>Brand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fallopian+tube+single+cell+analysis+reveals+myeloid+cell+alterations+in+high-grade+serous+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Fallopian tube single cell analysis reveals myeloid cell alterations in high-grade serous ovarian cancer.</a> iScience. 27 (3), 108990-108990 (2024).</li>
<li>Memarzadeh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-autonomous+activation+of+the+PI3-kinase+pathway+initiates+endometrial+cancer+from+adult+uterine+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Cell-autonomous activation of the PI3-kinase pathway initiates endometrial cancer from adult uterine epithelium.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107 (40), 17298-17303 (2010).</li>
<li>Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+induction+and+specification+of+morphogenesis+and+cytodifferentiation+of+the+epithelia+of+the+mullerian+ducts+and+urogenital+sinus+during+development+of+the+uterus+and+vagina+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">Stromal induction and specification of morphogenesis and cytodifferentiation of the epithelia of the mullerian ducts and urogenital sinus during development of the uterus and vagina in mice.</a> J Exp Zool. 196 (3), 361-369 (1976).</li>
<li>Xie, Y., Park, E. -S., Xiang, D., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+organoid+culture+reveals+enrichment+of+organoid-forming+epithelial+cells+in+the+fimbrial+portion+of+mouse+fallopian+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Long-term organoid culture reveals enrichment of organoid-forming epithelial cells in the fimbrial portion of mouse fallopian tube.</a> Stem Cell Res. 32 (1873-5061), 51-60 (2018).</li>
<li>Karst, A. M., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+and+immortalization+of+human+fallopian+tube+secretory+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Primary culture and immortalization of human fallopian tube secretory epithelial cells.</a> Nat Protoc. 7 (9), 1755-1764 (2012).</li>
<li>Ford, M. J., Harwalkar, K., Yamanaka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+generate+mouse+oviduct+epithelial+organoids+for+viral+transduction+and+whole-mount+3D+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protocol to generate mouse oviduct epithelial organoids for viral transduction and whole-mount 3D imaging.</a> STAR Protocols. 3 (1), 101164(2022).</li>
<li>Radecki, K. C., Lorenson, M. Y., Carter, D. G., Walker, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdissection+and+dissociation+of+the+murine+oviduct%3A+Individual+segment+identification+and+single+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microdissection and dissociation of the murine oviduct: Individual segment identification and single cell isolation.</a> J Vis Exp. (177), e63168(2021).</li>
<li>Feng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+the+detection+of+organoid-initiating+cell+activity+in+patient-derived+single+fallopian+tube+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Bio%22%5BJournal%5D)">Protocol for the detection of organoid-initiating cell activity in patient-derived single fallopian tube epithelial cells.</a> Methods Mol Bio. 2429, 445-454 (2022).</li>
<li>Kessler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Notch+and+Wnt+pathways+regulate+stemness+and+differentiation+in+human+fallopian+tube+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The Notch and Wnt pathways regulate stemness and differentiation in human fallopian tube organoids.</a> Nat Commun. 6 (1), 8989(2015).</li>
<li>Fotheringham, S., Levanon, K., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+culture+of+primary+human+fallopian+tube+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ex vivo culture of primary human fallopian tube epithelial cells.</a> J Vis Exp. (51), e2728(2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1% Trypsin&nbsp;</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>J63993.09</td><td></td></tr><tr><td>100 & Mikro; m Zellsieb</td><td>Corning</td><td>431752</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyd</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>15710-S</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Röhrchen mit rundem Boden</td><td>Corning</td><td>352008</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Zellkulturplatte</td><td>Corning&nbsp;</td><td>CLS430589-500EA</td><td></td></tr><tr><td>6-Well-Zellkulturplatte</td><td>Corning</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD10</td><td>BioLegend</td><td>312212</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD326 (Ep-CAM)</td><td>BioLegend</td><td>324218</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD45&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>304026</td><td></td></tr><tr><td>Anti-EpCAM</td><td>Abcam</td><td>ab223582</td><td></td></tr><tr><td>Anti-IgG2a PerCP&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>400250</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PAX8</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>363M-15</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Vimentin</td><td>Agilent Technologies</td><td>M072501-2-Kammer-Gleitsystem</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Thermo Scientific</td><td>154917PK</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase&nbsp;</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>17100017</tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>10569-010</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma</td><td>3690</td><td></td></tr><tr><td>eFluor 506</td><td>Invitrogen</td><td>65-0866-14</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>Zange mit feiner Spitze&nbsp;</td><td>VWR</td><td>102091-526</td><td>Jede feine Pinzette Ihrer Wahl funktioniert</td></tr><tr><td>Fixierbarer Viabilitätsfarbstoff eFluor 506</td><td>Invitrogen</td><td>65-0866-14</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo Softwareversion 9&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Datenanalyse-Software</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>14175-095</td><td></td></tr><tr><td>MACSQuant Analyzer 10 Durchflusszytometer&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MACSQuant Kalibrierperlen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-607</td><td></td></tr><tr><td>Mammocult&nbsp;</td><td>Stemcell Technologies</td><td>5620</td><td></td></tr><tr><td>Normales Ziegenserum</td><td>Fisher Scientific</td><td>PI31873</td><td></td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomyocin&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PerCP konjugierter CD45</td><td>BioLegend</td><td>304026</td><td></td></tr><tr><td>Lysepuffer für rote Blutkörperchen&nbsp;</td><td>Tonbo Biosciences</td><td>TNB-4300-L100&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>BP151-100</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-Tübingen Federschere&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD mit DAPI</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9524612</td><td></td></tr></tbody></table>

eine effiziente methode zur extraktion von epithelien aus menschlichen eileitern für einzelzellanalysen

An Efficient Method for Extracting Human Fallopian Tube Epithelia for Single-cell Analyses

Wir haben sieben Eileitersammlungen eingeschlossen, in denen wir eine angereicherte Epithelzellpopulation isoliert haben (Abbildung 2A und ergänzende Abbildung S1A). Um die Lebensfähigkeit und Epithelzellanreicherung dieser Einzelzellsuspensionsmethode zu beurteilen, wurde eine Durchflusszytometrie durchgeführt. Um die Lebensfähigkeit der Zellen zu messen, wurden die Zellen mit dem Viabilitätsmarker e506 gefärbt. Dies ermöglichte es auch, bei der Analyse alle Ablagerungen und abgestorbenen Zellen auszublenden.
Um die Zusammensetzung der mit dieser Methode isolierten Zellen zu bestimmen, wurden die Proben mit einem Epithelzellmarker (EpCAM), einem Stromazellmarker (CD10) und einem Immunzellmarker (CD45) gefärbt. Wie in Abbildung 2B zu sehen ist, isolierten wir eine lebensfähige und angereicherte Epithelzellpopulation aus Eileitergewebe. Die Durchführbarkeit der Proben lag bei durchschnittlich 82 %. Bei allen Proben beobachteten wir nach dem Ausscheiden von CD45-positiven Zellen eine angereicherte Epithelzellpopulation mit EpCAM-positiven Zellen, die durchschnittlich 80% der Probe ausmachten. Es gab eine gewisse Kontamination der Stromazellen, aber im Durchschnitt nur 7,8 %. Abbildung 2C zeigt isolierte Zellen in 2D 4-6 Tage nach der Beschichtung. Es ist offensichtlich, dass Epithelzellen isoliert wurden, da sie konsistent haftende, kopfsteinpflasterartige Cluster bildeten. In der ergänzenden Abbildung S1B wurden die Zellen nach der Isolierung plattiert und 2-6 Tage lang kultiviert. Die Immunzytochemie wurde verwendet, um die in Kultur wachsenden Zellen zu charakterisieren. Die meisten Zellen in der Kultur waren positiv für EpCAM und den sekretorischen Zellmarker PAX8 gefärbt. Nur wenige Zellen wurden als Vimentin-positiv identifiziert. Flimmerzellen wurden in Kultur gesehen, wie auf Video festgehalten wurde, wie im ergänzenden Video S1 gezeigt.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67753/67753fig1.jpg"> 
Abbildung 1: Experimentelles Schema. (A) Eileiter werden erworben. (B) Überschüssiges Fett und Bindegewebe werden entfernt. (C) Die Rohre werden in ~3-5 mm große Stücke geschnitten. (D) Die Stücke werden in PBS gewaschen, dann 2x für 5 min in EDTA inkubiert und 40 min bei 4 °C in 1% Trypsin inkubiert. (E) Mit zwei Pinzettenpaaren, eine zum Halten und eine zum Schieben, stoßen Sie Epithelzellen aus den Eileiterstücken aus. (F) Übertragen Sie die Zellen in ein 15-ml-Röhrchen, drehen Sie sie und zählen Sie. (G) Resuspendieren Sie in DMEM, Kollagenase und DNase. 30-45 Min. (H) Mit einem 100 μm Sieb abseihen. (I) Ernte durch Zentrifugation und Zählung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67753/67753fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67753/67753fig2.jpg"> 
Abbildung 2: Charakterisierung isolierter Epithelzellen. (A) Tabelle mit den klinischen Informationen des Patienten und den Ergebnissen der Durchflusszytometrie. (B) Nach der Isolierung wurde eine Durchflusszytometrie durchgeführt, um zu zeigen, dass eine angereicherte Population von Epithelzellen (EpCAM-positiv) isoliert worden war. Die Isotyp-Negativkontrolle ist schwarz und das Versuchsergebnis rosa dargestellt. (C) Die Zellen wurden nach der Isolierung plattiert. Die Fotos wurden 4-6 Tage nach dem Plattieren aufgenommen. Maßstabsleisten = 100 μm. Abkürzungen: AUB = Abnorme Gebärmutterblutungen; EIN = Endometriale intraepitheliale Neoplasie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67753/67753fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Ergänzende Abbildung S1: Zusätzliche Charakterisierung isolierter Epithelzellen in Kultur. (A) Tabelle mit den klinischen Informationen des Patienten. (B) Isolierte Zellen wurden kultiviert und 2-6 Tage nach der Beschichtung auf EpCAM, einen sekretorischen Zellmarker (PAX8) und einen Stromazellmarker (Vimentin) gefärbt, um den Zelltyp in Kultur zu charakterisieren. Maßstabsleisten = 50 μm. Abkürzungen: EIN: Endometriale intraepitheliale Neoplasie; DAPI = 4',6-diamidino-2-phenylindol. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67753/67753_Supplemental%20Figure%201%20(2).pdf" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Abbildung herunterzuladen.</a>
Ergänzendes Video S1: Videos von schlagenden Flimmerzellen wurden mit 30-facher Vergrößerung aufgenommen, um Flimmerzellen in Kultur zu demonstrieren. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67753/Supplemental%20Video%201%20FT4.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.</a>

Eine effiziente Methode zur Extraktion von Epithelien aus menschlichen Eileitern für Einzelzellanalysen

Human fallopian tubes are intrinsic to reproduction. The purpose of the fallopian tubes is to allow for the transit of sperm, the ovum, and if ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Die Eileiter (FT) wird als Alternative vor Ort Ursprungsbezeichnungen für seröse Ovarialkarzinom (SOC) entstehen. Dieses Protokoll beschreibt eine neuartige Methode zur Isolierung...

Ex vivo-Kultur von primären humanen Eileiter Epithelzellen

In diesem Video demonstrieren wir ein modifiziertes Protokoll der Papanicolaou-Färbung, um die Tubenzytologie zu untersuchen. Diese Technik kann verwendet werden, um die zytologischen Merkmale von malignen und nicht-malignen Eileiterepithelzellen sichtbar zu machen.

Papanicolaou-Färbung: Eine Technik zur Visualisierung der zytologischen Merkmale von Eileiterzellen

Wir erforschten eine Tubal-Zytologie-Methode durch die Probenahme der Eileiter direkt post-chirurgischen Exzision als ein Werkzeug der Eierstockkrebs Früherkennung. Hier stellen wir ein Protokoll vor, um Eileiterzellen aus frisch erhaltenen chirurgischen Proben zu sammeln.

Tubal-Zytologie der Eileiter als vielversprechendes Werkzeug für Eierstockkrebs Früherkennung

Dieser Artikel bietet eine detaillierte Methodik für Gewebedissoziation und zelluläre Fraktionierungsansätze, die die Anreicherung lebensfähiger Epithelzellen aus proximalen und distalen Regionen der menschlichen Lunge ermöglichen. Hierin werden diese Ansätze für die funktionelle Analyse von Lungenepithel-Vorläuferzellen durch den Einsatz von 3D-Organoid-Kulturmodellen angewendet.

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Mikrodissektion und Dissoziation des Murinen Eileiters: Identifizierung einzelner Segmente und Einzelzellisolierung

Hier stellen wir Protokolle für die Identifizierung und Reinigung von Ovarialzellen aus Antralfollikeln vor. Wir erarbeiten Methoden zur Verarbeitung ganzer Eierstöcke für die Kryokonservierung von kortikalen Streifen bei gleichzeitiger Entnahme intakter Antralfollikel, die enzymatisch behandelt werden, um mehrere follikelresidente Zelltypen freizusetzen, darunter Granulosa-, Theka-, Endothel-, hämatopoetische und Stromazellen.

Extraktion, Markierung und Reinigung von linienspezifischen Zellen aus humanen Antralfollikeln

Dieses Protokoll beschreibt die Entwicklung von hochgradigen serösen Ovarialkarzinom-Mausmodellen (HGSOC) in vitro und in vivo. Von der Gewinnung von murinen Eileiter-Organoiden über ihre genetische Modifikation zur Rekapitulation der menschlichen HGSOC-Genetik bis hin zu ihrer Einführung in den Eierstockschleimbeutel syngener Mäuse für die in vivo-Entwicklung von Tumoren.

Entwicklung von mausabgeleiteten Organoidlinien aus Epithelzellen des Eileiters für die Modellierung des hochgradigen serösen Ovarialkarzinoms

Dieses Protokoll beschreibt standardisierte Methoden zur Isolierung und Verarbeitung von Follikelflüssigkeit, somatischen Zellen und unreifen Eizellen aus IVF-Verfahren und ermöglicht so qualitativ hochwertige molekulare und zelluläre Analysen. Diese Ansätze unterstützen die translationale Forschung zu Fertilität, reproduktivem Altern und Funktionsstörungen der Eierstöcke unter Verwendung von Materialien, die in der klinischen Versorgung normalerweise entsorgt werden.

Entnahme von menschlicher Follikelflüssigkeit, somatischen Follikelzellen und unreifen Eizellen von Personen, die sich einer In-vitro-Fertilisation unterziehen

Dieses Protokoll bietet eine optimierte Methode zur Isolierung der epithelialen Schleimhaut der adulten weiblichen Maus-Harnröhre für nachgelagerte Analysen, einschließlich Durchflusszytometrie, Immunfärbung und Organoidkultur. Methoden führten zu angereicherten, lebensfähigen Harnröhrenepithelzellen, wie die Flowzytometrieanalyse, Whole-Mount-Bildgebung und effiziente Organoidbildung belegen.

Eine optimierte Methode zur Isolierung des weiblichen Harnröhrenepithels für Einzelzell- und Immunfluoreszenzanalyse

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Intra-Beckenarterie Injection für effiziente und selektive Modellierung von Mikroskopische Knochenmetastasen

Lernen Sie eine effiziente Methode zur Isolierung von Epithelzellen aus menschlichen Eileitern für Einzelzellanalysen. Diese Technik ermöglicht Forschern, Ovarialkarzinome besser zu verstehen.

Eine effiziente Methode zur Extraktion von Epithelien aus menschlichen Eileitern für Einzelzellanalysen

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