Name: Anwendung eines neuartigen Hyaluron-Hydrogels für die dreidimensionale Follikelkultur und Methodik für die Kryokonservierung von Ovarialfollikeln in der Maus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: Erfahren Sie die Kultivierung präantraler Follikel in einem 3D-Hyaluron-Hydrogel mit Mausovarien. Diese Methode ermöglicht die Erhaltung der nativen Architektur und unterstützt die Oozytenreifung für reproduktionsbiologische Forschung.

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<ol><li>Telfer, E. E., Andersen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+growth+and+maturation+of+primordial+follicles+and+immature+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">In vitro growth and maturation of primordial follicles and immature oocytes.</a> Fertil Steril. 115 (5), 1116-1125 (2021).</li>
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<li>Wu, J., Nayudu, P. L., Kiesel, P. S., Michelmann, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luteinizing+hormone+has+a+stage-limited+effect+on+preantral+follicle+development+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Luteinizing hormone has a stage-limited effect on preantral follicle development in vitro.</a> Biol Reprod. 63 (1), 320-327 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anti-Alpha-Tubulin-FITC-markiert</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. F2168</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Beta-Tubulin-FITC-markiert</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. F2043</td><td></td></tr><tr><td>BZ-X700</td><td>Keyence</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Schale gut zentrieren</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-12</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase Typ I</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LS004196</td><td></td></tr><tr><td>Crycap Fläschchen belüftet</td><td>Hampton Forschung</td><td>Nr. HR4-904</td><td></td></tr><tr><td>Kryoschleife</td><td>Hampton Forschung</td><td>Nr. HR4-974</td><td></td></tr><tr><td>Kappe aus Kristall</td><td>Hampton Forschung</td><td>Nr. HR4-733</td><td></td></tr><tr><td>Kulturschale 60mm</td><td>Fisher Wissenschaftlich&nbsp;</td><td>08-772B</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. D2650</td><td></td></tr><tr><td>Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF)</td><td>Forschung & Technik D-Systeme</td><td>Nr. 236-EG</td><td></td></tr><tr><td>Ethylenglykol (EG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>293237</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum-Läufigkeit inaktiviert</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10082-147</td><td></td></tr><tr><td>Follikelstimulierendes Hormon (FSH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. F4021</td><td></td></tr><tr><td>Global-Hepes&nbsp; Mittel</td><td>CooperChirurgisch</td><td>LGGH-100</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. B2261</td><td></td></tr><tr><td>Humanes Choriongonadotropin (hCG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CG10</td><td></td></tr><tr><td>Humanes Serumalbumin</td><td>CooperChirurgisch</td><td>GHSA-125</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>CooperChirurgisch</td><td>ART-4007-A</td><td></td></tr><tr><td>Wasserstoffperoxid</td><td>CVS Apotheke Inc.</td><td>372441</td><td></td></tr><tr><td>Insulin-Transferrin-Selen (ITS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>41400-045</td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz Medium (L-15)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11415-064</td><td></td></tr><tr><td>Luteinisierendes Hormon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. L9773</td><td></td></tr><tr><td>Magnetischer Zauberstab</td><td>Hampton Forschung</td><td>Nr. HR4-729</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipetten (1000 & Mikro; m)</td><td>Miniröhre</td><td>19025/0050</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipetten (175 , 200 und 275&micro; m)</td><td>CooperChirurgisch</td><td>MXL3-175, MXL3-200, MXL3-275</td><td></td></tr><tr><td>Millex GV Filter 0,22 &Mikro; m</td><td>Millipore</td><td>SLGU033RS</td><td></td></tr><tr><td>Mineralöl</td><td>CooperChirurgisch</td><td>LGOL-500</td><td></td></tr><tr><td>Mindestes essentielles Medium alpha (MEM)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>32561-037</td><td></td></tr><tr><td>Bildgebungssystem für Eizellen-Spindelansicht</td><td>Hamilton Thorne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Propidiumiodid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. P4170</td><td></td></tr><tr><td>Schnell i</td><td>VitroLeben</td><td>14406</td><td></td></tr><tr><td>SmartBox</td><td>VitroLeben</td><td>14423</td><td></td></tr><tr><td>Synthetischer Proteinersatz (SPS)</td><td>CooperChirurgisch</td><td>ART-3011</td><td></td></tr><tr><td>Tyramin-verknüpftes Hyaluron-Biohydrogel-Kit&nbsp;</td><td>LebensKern</td><td>ENG-00151</td><td></td></tr><tr><td>Ultraschall-Schweißgerät</td><td>VitroLeben</td><td>14415</td><td></td></tr><tr><td>Universelle GPS-Kulturschale 8x 100 &micro; L Brunnen</td><td>CooperChirurgisch</td><td>UGPS-010</td><td></td></tr></tbody></table>

anwendung eines neuartigen hyaluron-hydrogels für die dreidimensionale follikelkultur und methodik für die kryokonservierung von ovarialfollikeln in der maus

Application of a Novel Hyaluronan Hydrogel for Three-Dimensional Follicle Culture and Methodology for Mouse Ovarian Follicle Cryopreservation

In diesem Artikel wird die Methodik für die Verwendung eines neuartigen tyramingebundenen Hyaluronan-Gels für die In-vitro-Kultur von präantralen Mausfollikelnbeschrieben 36,37. Abbildung 6 veranschaulicht die Unterschiede zwischen dem Wachstum präantraler Follikel, wenn es in einem konventionellen 2-D-Kultursystem platziert wird, und einem einzelnen Follikel, der in HA-Gel für die 3-D-Kultur eingekapselt ist. Die native Follikelarchitektur wird während der 12 Tage der Kultur beibehalten, wobei am letzten Tag des Wachstums ein Antrum deutlich sichtbar ist.
Das HA-Gel ist sehr vielseitig und ermöglicht das Wachstum isolierter Follikel einzeln oder in Gruppen und auch das Eierstockgewebe wird mechanisch in kleine Follikelcluster aufgebrochen. Das Gel ist transparent, so dass Follikel auch in unterschiedlichen Tiefen sichtbar gemacht werden können. Verkapselte Follikel und FL-C zeigen eine radiale Expansion durch fortgesetzte Granulosazellproliferation (Abbildung 7). Die anfänglichen Follikeldurchmesser betragen durchschnittlich 139,8 ± 28 μm, wobei der GV-Eizellendurchmesser 63,5 ± 4,6 μm beträgt. Bei einfach kultivierten Follikeln beträgt der Enddurchmesser etwa 385,6 ± 36,7 μm, was einer etwa 3-fachen Vergrößerung entspricht. Ovulierte Metaphase-II-Eizellen messen etwa 84,8 ± 3,8 μm. Innerhalb kultivierter FL-Cluster ist die Follikelgröße ziemlich unterschiedlich (Abbildung 5, Abbildung 7). Ovulierte Eizellen nach hCG-Trigger befinden sich in der Nähe des Follikels (Abbildung 8). Der Großteil der Metaphase-II-Eizellen wird aus den ovulierten KOK entnommen. Follikel, die nach dem Trigger noch eingebettet sind, enthalten in der Regel GV- und Metaphase-I-Eizellen.
Tabelle 1 stellt die Reifungsraten zwischen isolierten Follikeln und FL-Clustern aus frischen oder gefrorenen Eierstöcken gegenüber. FL-C aus kryokonservierten Eierstöcken hatte signifikant niedrigere Reifungsraten. Mikroskopische Beobachtungen zeigten, dass sie häufig gebrochene Basallamina hatten, was sie sehr anfällig für eine vorzeitige Eizellextrusion machte. Der fragilen Natur von Follikelclustern wurde durch die Verkapselung etwas entgegengewirkt. Eine Kollagenase-Behandlung von kryokonservierten Eierstöcken wurde vermieden, da sie bei geringem Überleben und geringer Ausbeute an intakten Follikeln besonders schädlich war.
Die Kryokonservierung von isolierten Follikeln ist viel effektiver als die Konservierung ganzer Eierstöcke. Mit beiden untersuchten Vitrifikationsmethoden können hohe Reiferaten erzielt werden (Tabelle 2). Trotz großer Unterschiede in den Kühlraten unterschied sich die Eizellreifung nach IVC nicht. Der offene CL-Träger ermöglicht eine höhere Effizienz, da bis zu zehn Follikel auf einen einzigen offenen CL-Träger geladen werden können. Dies verkürzt auch die Gesamtzeit für die Rückgewinnung mehrerer kryokonservierter Follikel. Für eine eventuelle klinische Anwendung der Vitrifikation für menschliche Follikel kann jedoch das geschlossene, versiegelte System vorzuziehen sein.
Die Chromatinanordnung um den Nukleolus der GV-Eizelle kann verwendet werden, um Eizellen zu identifizieren, die am wahrscheinlichsten nach dem Eisprung befruchten und sich zu Blastozysten entwickeln38. Abbildung 9 zeigt die Lebendfärbung von Eizellen zur Visualisierung des Chromatinverteilungsmusters.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig01.jpg"> Abbildung 1: Schematische Darstellung des Follikelwachstums. Dieses Diagramm veranschaulicht die verschiedenen Stadien der Follikelentwicklung, von einem Primärfollikel über das sekundäre präantrale Stadium bis hin zu einem voll ausgereiften Tertiärfollikel, der bereit für den Eisprung ist. Gezeigt wird auch eine mikroskopische Aufnahme eines typischen präantralen Follikels mit seinen unterschiedlichen morphologischen Merkmalen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig02.jpg"> Abbildung 2: Schematische Darstellung der HA-Verkapselungsmethode. Die Struktur des Hyaluronsäure-Gels und die verschiedenen Schritte zur Follikeleinbettung sind in diesem Diagramm dargestellt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig03.jpg"> Abbildung 3: Follikelisolierung und -verkapselung. (A, B) Präantraler Follikel, der für die Einbettung bei 40- und 200-facher Vergrößerung ausgewählt wurde. (C) Apoptotischer Follikel ist mit gesundem präantralen Follikel mit nicht ganz zentraler Eizelle dargestellt. (D) Bild einer HA-Gelperle, die mit Follikeln besiedelt ist, und (E) mit zwei FL-C. Bilder, die mit einem Stereomikroskop aufgenommen wurden, um die gesamte Gelkügelchen zu zeigen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig04.jpg"> Abbildung 4: Vitrifikationsgeräte zur Kryokonservierung isolierter Follikel. Bei der offenen Trägervorrichtung CL wird der Vitrifikationsschritt durch direktes Eintauchen der Follikel in flüssigen Stickstoff durchgeführt. Die Abkühlgeschwindigkeit ist daher mit über -20.000 °C/min extrem hoch. Im Gegensatz dazu werden beim geschlossenen RI-Träger die Follikel auf den inneren Kunststoffstab geladen und in einen äußeren Strohhalm gelegt, der in flüssigen Stickstoff getaucht ist. Dieses geschlossene Vitrifikationsverfahren vermeidet den direkten Kontakt mit flüssigem Stickstoff. Allerdings ist die Abkühlrate mit -1220 °C/min deutlich geringer. Das Laden und die Rückgewinnung von Follikeln aus beiden Trägern ist einfach. Der offene CL-Träger konnte bis zu zehn Follikel pro Gerät laden, verglichen mit nur zwei beim geschlossenen RI-Träger. Diese Zahl wurde von35 geändert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig05.jpg"> Abbildung 5: Repräsentative Bilder der aufgetretenen Probleme. (A) Follikelcluster mit Eizelle, die extrudiert wird. (B) Isolierte Follikel mit gebrochener Basallaminamembran und einer mit einer extrudierten Eizelle. (C) Eingebetteter Follikel unter einer Blase im Gel. (D) Follikelcluster, der im Gel verblieben ist (links), verglichen mit einem zu tief eingebetteten Cluster, der sich schließlich an die Schale anheftet. Die große Bandbreite an Follikelgrößen in FL-C ist deutlich sichtbar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig06.jpg"> Abbildung 6: Vergleich des Follikelwachstums in der 2-D- und 3-D-Kultur bei HA. Mit dem 2-D-Wachstum wurde bis zum 4. Tag eine Abflachung des Follikels und eine Bindung der Granulosazellen an die Gewebekulturschale beobachtet, wodurch die Eizelle anfällig für die Migration von Granulosazellen, eine Störung der Gap Junctions und eine vorzeitige Eizellextrusion wurde. Der HA-verkapselte Follikel blieb während des gesamten Kulturintervalls ungebunden. Die Expansion der Granulosazellen erfolgte in alle Richtungen, wobei die Eizelle umhüllt und die 3D-Architektur beibehalten wird. Diese Zahl wurde von36 geändert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig06large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig07.jpg"> Abbildung 7: Repräsentative Bilder von Follikeln, die in Tyramin-gebundenem Hyaluronsäuregel eingekapselt sind. (A) Präantralfollikel, der nach dem Kollagenaseverdau eines frischen Eierstocks an Tag 1 entnommen wurde. (B) Gel-Tropfen, besiedelt mit vier präantralen Follikeln, aufgenommen an Tag 1 und (C) Tag 4 der Kultur, (D) Follikelcluster aus frischem Eierstock an Tag 2, (E) an Tag 6 und (F) an Tag 9 der Kultur. (G) Follikelcluster, mechanisch präpariert aus vitrifiziertem ganzen Eierstock, gezeigt an Tag 2 und (H) an Tag 6 der Kultur. (I) Der Follikel mit Antrumbildung ist am 9. Tag der Kultur deutlich sichtbar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig07large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig08.jpg"> Abbildung 8: Eisprung der Eizelle. (A, B) Ovulierter Kumulus-Oozyten-Komplex (COC) neben der HA-Gel-Kugel. (C) Die Eizellen wurden nach enzymatischer Behandlung von KOK mit Hyaluronidase abgebildet, um die umgebenden Kumuluszellen zu entfernen. Zahlreiche Metaphase-II-Eizellen. (D) Metaphase-II-Eizelle mit markantem Polkörper. Vergrößerung 400x. (E) Live-Bildgebung der Metaphase-II-Eizelle unter Verwendung von polarisiertem Licht und einem Bildgebungssystem zur Visualisierung der meiotischen Spindel und zur Beurteilung der Organisation, durchgeführt wie in37 beschrieben. Vergrößerung 400x. Normale, doppelbrechende Spindel sichtbar. (F) Metaphase-II-Eizelle, fixiert und gefärbt mit Anti-alpha/beta-Tubulin und Propidiumiodid, um die Organisation der meiotischen Spindel sichtbar zu machen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig08large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig09.jpg"> Abbildung 9: Chromatin-Reorganisation in GV-Oozyten. Die Chromatinanordnung in GV-Oozyten nach der Antrumbildung wurde durch Färbung der DNA mit Hoechst 33342 (50 ng/ml) untersucht. Repräsentative Follikel wurden durch schonendes Pipettieren aus HA-Kügelchen gewonnen. Granulosazellen wurden mittels Hyaluronidase entfernt. Die GV-Eizellen wurden dann 15 Minuten lang gefärbt (siehe Protokoll von Monti et al.38). Die Bilder wurden mit 40-facher Vergrößerung aufgenommen. (A) GV-Eizelle, die an Tag 1 bei Kulturbeginn gezeigt wurde und das Färbemuster für das nicht umgebende Chromatin (NSN) aufweist. (B) GV-Eizelle aus wachsendem Follikel mit Antrum, gezeigt am Tag des hCG-Triggers. Das Chromatin kondensierte und bildete einen perinukleären Ring um den Nukleolus. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig09large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Parameter</td>
			<td colspan="2">Frischer Eierstock</td>
			<td>Gefrorener Eierstock</td>
		</tr><tr><td></td>
			<td>FL-isoliert</td>
			<td>FL-Cluster</td>
			<td>FL-Cluster</td>
		</tr><tr><td>Follikel, die während der IVC beobachtet wurden</td>
			<td>130</td>
			<td>154</td>
			<td>69</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">Eisprung nach HCG (%)</td>
			<td>71%</td>
			<td>66%</td>
			<td>93%</td>
		</tr><tr><td>(92/130)</td>
			<td>(101/154)</td>
			<td>(64/69)</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">Gesamtblutzucker (%)</td>
			<td>30%</td>
			<td>28%</td>
			<td>52%</td>
		</tr><tr><td>(28/92)</td>
			<td>(28/101)</td>
			<td>(33/64)</td>
		</tr><tr><td>MII-Eizellbildung (%)</td>
			<td>59%</td>
			<td>55%</td>
			<td>*34%</td>
		</tr><tr><td></td>
			<td>(54//92)</td>
			<td>(56/101)</td>
			<td>(22/64)</td>
		</tr></tbody></table>Tabelle 1: Ergebnisse mit HA-eingebetteten Follikeln aus frischen und vitrifizierten Eierstöcken. Follikel und FL-C aus frischen Eierstöcken wurden nach der Verkapselung in HA-Gel in vitro gereift. HA-Gel wurde auch an Follikeln aus Eierstöcken getestet, die mit einem EG/DMSO-Protokoll vitrifiziert wurden39. Bei frischen Eierstöcken wurden nach dem Kollagenaseverdau sowohl einzelne Follikel (FL) als auch Follikelcluster (FL-C) gesammelt. Bei vitrifizierten Eierstöcken war die Exposition gegenüber Kollagenase in der Tat schädlich für die Follikel. Der beste Ansatz bei kryokonservierten Eierstöcken bestand darin, FL-Cluster anstelle einzelner Follikel zu isolieren und nur eine mechanische Dissektion mit Nadeln zu verwenden. In der Tabelle werden die Ergebnisse zwischen HA-Kügelchen, die mit Follikeln besiedelt wurden, in Gruppen von 4-6 Follikeln und Kügelchen mit einem einzelnen FL-C mit 6-10 Follikeln verglichen. *Die Reifungsrate mit FL-C aus kryokonservierten Eierstöcken war signifikant niedriger (p = 0,008; Chi-Quadrat-Analyse zum Testen der Signifikanz).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2">Träger</td>
			<td>RI</td>
			<td>CL</td>
		</tr><tr><td>(Geschlossen)</td>
			<td>(Geöffnet)</td>
		</tr><tr><td>Überleben (%)</td>
			<td>100% (24/24)</td>
			<td>100% (41/41)</td>
		</tr><tr><td>Antrumbildung* (%)</td>
			<td>25.0% (6/24)</td>
			<td>75.6% (31/41)*</td>
		</tr><tr><td>Ovulationsrate (%)</td>
			<td>66.7% (16/24)</td>
			<td>87.8% (36/41)</td>
		</tr><tr><td>Reiferate (% MIIs)</td>
			<td>81.3% (13/16)</td>
			<td>69.4% (25/36)</td>
		</tr></tbody></table>Tabelle 2: Ergebnisse nach Kryokonservierung von isolierten Follikeln auf zwei verschiedenen Vitrifikationsgeräten. Sowohl mit dem offenen CL-Baustein als auch mit dem geschlossenen RI-Träger mit seiner geringeren Kühlrate wurden hohe Reiferaten erreicht. Die Antrumbildung war das einzige Endpunktmaß, das sich als signifikant erwies, aber keinen Einfluss auf die Gesamtreifungsrate hatte (p &lt; 0,05; Chi-Quadrat-Analyse zum Testen der Signifikanz).

Anwendung eines neuartigen Hyaluron-Hydrogels für die dreidimensionale Follikelkultur und Methodik für die Kryokonservierung von Ovarialfollikeln in der Maus

The 3-D architecture of the ovarian follicle and the complex interactions between somatic cell components and the oocyte that are necessary for ...

application-novel-hyaluronan-hydrogel-for-three-dimensional-follicle

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Eine neue Methode zur Ovarialfollikel Kapselung in einer 3D-Fibrin-Alginat durchdringendes Netzwerk beschrieben. Dieses System kombiniert strukturelle Unterstützung mit proteolytischen Abbau der Entwicklung von unreifen Follikeln Unterstützung, um zu reifen Eizellen zu produzieren. Diese Methode kann zur Kultur Zellaggregate angewendet werden, um Zell-Zell-Kontakte ohne Beschränkungen für die Ausweitung aufrecht zu erhalten.

Eine Methode zur Ovarialfollikel Encapsulation und Kultur in einem Proteolytisch Degradable 3 Dimensional-System

Kultur von normalen Zellen in ihrer dreidimensionalen Kontext stellt eine alternative Methode zur frühen Ereignisse für die zelluläre Transformation und Tumorentstehung erforderlich studieren. Diese Methode wird verwendet, um normale Eierstock-und Eileiter Zellen wachsen zu frühen Ereignisse bei Eierstockkrebs Bildung zu studieren.

Alginat Hydrogele für Three-Dimensional Organ Culture der Eierstöcke und Eileitern

Dieses Protokoll beschreibt die Primärkultur / Co-Kultur von Maus-Eierstockgewebe, mit Eierstöcke von neugeborenen Mäusen und individuelle Eibläschen von präpubertären Mäusen. Die Kulturtechniken unterstützt Entwicklung in einer hoch physiologischer Weise ermöglicht Untersuchung der Wirkung von äußeren Mitteln an den Eierstöcken und der Wechselwirkungen zwischen Follikeln.

Kultur und Co-Kultur von Maus Eierstöcke und Eibläschen

Eine vielversprechende Technik, um Gewebe zu generieren baut ohne Verwendung von Matrix an Zellkulturen in simulierter Schwerelosigkeit Zustand ist. Mit einem rotierenden Kultursystem, untersuchten wir Wachstum der Follikel und Eizellreifung Follikel überleben, Morphologie, Wachstums-und Eizelle Funktion unter der Bedingung der simulierten Schwerelosigkeit.

In-vitro- Wachstum der Maus Preantral Follikel in simulierter Schwerelosigkeit

Eierstöcke Gewebekulturen als Modelle der Follikel Entwicklung, Eisprung und Follikel Atresie einsetzbar und regulatorische Mechanismen der Eierstöcke Dynamiken zeigen.

Ovarian Tissue Culture Phänomene in der Maus Eierstock zu visualisieren

Hier werden zwei Protokolle für die Verkapselung von Schweineeioozyten unter 3D-Kulturbedingungen vorgestellt. In der ersten werden Cumulus-Oozyten-Komplexe (COCs) in Fibrin-Alginat-Perlen eingekapselt. In der zweiten werden sie mit fluorierten Ethylenpropylenpulverpartikeln (Mikrobioreaktoren) umschlossen. Beide Systeme sorgen für optimale Bedingungen, um ihre 3D-Organisation aufrechtzuerhalten.

Proteolytisch abgebaute Alginat-Hydrogele und hydrophobe Mikrobioreaktoren zur Poren-Oozyten-Verkapselung

Hier beschreiben wir ein Protokoll, das beschreibt, wie menschliche Ovarialfollikel aus gefrorenem und aufgetautem kortikalem Gewebe isoliert werden können, um Genexpressionsanalysen durchzuführen.

Genexpressionsanalysen in humanen Follikeln

Wir beschreiben Methoden zur Kultivierung von Ovarialfollikeln in einer neuartigen gerüstfreien Agaroseform, die die in vitro Gametogenese ergänzen.

Herstellung und Verwendung von anpassbaren Agaroseformen für die gerüstfreie Ovarialfollikelkultur von Mäusen

Wir beschreiben eine Chip-basierte Plattform für die dreidimensionale Kultivierung von Zellen in Mikro-Bioreaktoren. Ein Chip kann bis zu 10 Mio. Zellen, die unter genau definierten Bedingungen im Hinblick auf die Strömung, Sauerstoffspannung etc. in einem sterilen, geschlossenen Kreislauf kultiviert werden können.

Chip-basierte dreidimensionale Zellkultur in perfundierten Micro-Bioreaktoren

Wir präsentieren zwei Prozesse für die Mikrofabrikation von porösen Polymer-Chips für dreidimensionale Zellkultivierung. Die erste ist Heißprägen mit einem Lösemitteldampf Schweißverfahren kombiniert. Die zweite nutzt ein neu entwickeltes microthermoforming Prozess mit Ionen-Track-Technologie führt zu einer wesentlichen Vereinfachung der Herstellung kombiniert.

Microfabrication der Chip-Größe Gerüste für die dreidimensionale Kultivierung der Zellen

Erfahren Sie die Kultivierung präantraler Follikel in einem 3D-Hyaluron-Hydrogel mit Mausovarien. Diese Methode ermöglicht die Erhaltung der nativen Architektur und unterstützt die Oozytenreifung für reproduktionsbiologische Forschung.

Anwendung eines neuartigen Hyaluron-Hydrogels für die dreidimensionale Follikelkultur und Methodik für die Kryokonservierung von Ovarialfollikeln in der Maus (Video) | JoVE Journal

Anwendung eines neuartigen Hyaluron-Hydrogels für die dreidimensionale Follikelkultur und Methodik für die Kryokonservierung von Ovarialfollikeln in der Maus

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