Name: Die Isolierung und Charakterisierung von Neutrophilen niedriger und normaler Dichte aus Vollblut (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung von Neutrophilen niedriger und normaler Dichte aus menschlichem Vollblut mittels Dichtegradientenzentrifugation. Diese Methode ermöglicht hochreine Fraktionen für funktionelle Studien zur Neutrophilenheterogenität.

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<ol><li>Tracchi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+neutrophil+lifespan+in+patients+with+congestive+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Increased neutrophil lifespan in patients with congestive heart failure.</a> Eur J Heart Fail. 11 (4), 378-385 (2009).</li>
<li>Ballesteros, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-option+of+neutrophil+fates+by+tissue+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Co-option of neutrophil fates by tissue environments.</a> Cell. 183 (5), 1282-1297.e18 (2020).</li>
<li>Mckenna, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils%3A+Need+for+standardized+nomenclature%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophils: Need for standardized nomenclature.</a> Front Immunol. 12, 602963(2021).</li>
<li>Hacbarth, E., Kajdacsy-Balla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+density+neutrophils+in+patients+with+systemic+lupus+erythematosus%2C+rheumatoid+arthritis%2C+and+acute+rheumatic+fever%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Low density neutrophils in patients with systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, and acute rheumatic fever.</a> Arthritis Rheumatol. 29 (11), 1334-1342 (1986).</li>
<li>Hardisty, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+purity+isolation+of+low+density+neutrophils+casts+doubt+on+their+exceptionality+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">High purity isolation of low density neutrophils casts doubt on their exceptionality in health and disease.</a> Front Immunol. 12, 625922(2021).</li>
<li>Scapini, P., Marini, O., Tecchio, C., Cassatella, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neutrophils+in+the+saga+of+cellular+heterogeneity%3A+Insights+and+open+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Human neutrophils in the saga of cellular heterogeneity: Insights and open questions.</a> Immunol Rev. 273 (1), 48-60 (2016).</li>
<li>Ssemaganda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neutrophil+subsets+in+healthy+human+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of neutrophil subsets in healthy human pregnancies.</a> PLoS One. 9 (2), e85696(2014).</li>
<li>Tay, S. H., Celhar, T., Fairhurst, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+neutrophils+in+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Low-density neutrophils in systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheumatol. 72 (10), 1587-1595 (2020).</li>
<li>Hassani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+low-density+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">On the origin of low-density neutrophils.</a> J Leukoc Biol. 107 (5), 809-818 (2020).</li>
<li>Cowland, J. B., Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+neutrophil+precursors+from+bone+marrow+for+biochemical+and+transcriptional+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation of neutrophil precursors from bone marrow for biochemical and transcriptional analysis.</a> J Immunol Methods. 232 (1-2), 191-200 (1999).</li>
<li>Blanco-Camarillo, C., Aleman, O. R., Rosales, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+neutrophils+in+healthy+individuals+display+a+mature+primed+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low-density neutrophils in healthy individuals display a mature primed phenotype.</a> Front Immunol. 12, 672520(2021).</li>
<li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+granulocytes+display+immature+cells+with+enhanced+NET+formation+in+people+living+with+HIV%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Low-density granulocytes display immature cells with enhanced NET formation in people living with HIV.</a> Sci Rep. 13 (1), 13282(2023).</li>
<li>Denny, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+distinct+subset+of+proinflammatory+neutrophils+isolated+from+patients+with+systemic+lupus+erythematosus+induces+vascular+damage+and+synthesizes+type+I+IFNs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A distinct subset of proinflammatory neutrophils isolated from patients with systemic lupus erythematosus induces vascular damage and synthesizes type I IFNs.</a> J Immunol. 184 (6), 3284-3297 (2010).</li>
<li>Ui Mhaonaigh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+density+granulocytes+in+anca+vasculitis+are+heterogenous+and+hypo-responsive+to+anti-myeloperoxidase+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low density granulocytes in anca vasculitis are heterogenous and hypo-responsive to anti-myeloperoxidase antibodies.</a> Front Immunol. 10, 2603(2019).</li>
<li>Mosca, T., Forte, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficiency+and+impact+on+the+activity+of+blood+neutrophils+isolated+by+Percoll%2C+Ficoll+and+spontaneous+sedimentation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Invest%22%5BJournal%5D)">Comparative efficiency and impact on the activity of blood neutrophils isolated by Percoll, Ficoll and spontaneous sedimentation methods.</a> Immunol Invest. 45 (1), 29-37 (2016).</li>
<li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+apoptotic+neutrophils+and+macrophages+and+impaired+macrophage+phagocytic+clearance+of+apoptotic+neutrophils+in+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Increased apoptotic neutrophils and macrophages and impaired macrophage phagocytic clearance of apoptotic neutrophils in systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheum. 48 (10), 2888-2897 (2003).</li>
<li>Connelly, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+methods+for+the+accurate+characterization+of+whole+blood+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of methods for the accurate characterization of whole blood neutrophils.</a> Sci Rep. 12 (1), 3667(2022).</li>
<li>Carmona-Rivera, C., Kaplan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+granulocytes+in+systemic+autoimmunity+and+autoinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Low-density granulocytes in systemic autoimmunity and autoinflammation.</a> Immunol Rev. 314 (1), 313-325 (2023).</li>
<li>Yennemadi, A. S., Keane, J., Leisching, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+bioenergetic+changes+in+systemic+lupus+erythematosus+immune+cell+subsets%3A+Contributions+to+pathogenesis+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial bioenergetic changes in systemic lupus erythematosus immune cell subsets: Contributions to pathogenesis and clinical applications.</a> Lupus. 32 (5), 603-611 (2023).</li>
<li>Futoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+low-density+granulocytes+after+colorectal+cancer+surgery+in+predicting+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22BJS+Open%22%5BJournal%5D)">Peripheral low-density granulocytes after colorectal cancer surgery in predicting recurrence.</a> BJS Open. 7 (1), zrac154(2023).</li>
<li>Dwivedi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+dysfunctional+neutrophils+with+a+defect+in+arginase-1+release+in+severe+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Emergence of dysfunctional neutrophils with a defect in arginase-1 release in severe COVID-19.</a> JCI Insight. 9 (17), e171659(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>14 mL Polypropylen-Röhrchen mit rundem Boden (17 x 100 mm)</td><td>Corning Science</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>APC Anti-Human-CD14 (63D3)</td><td>BioLegend</td><td>367118</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 Anti-Human-CD10 (25 Tests)</td><td>BioLegend</td><td>312217</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>Sigma</td><td>D8537-1L</td><td></td></tr><tr><td>EasyEights EasySep Magnet</td><td>StemCell Technologies</td><td>#18103</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Buffer (Zelltrennungspuffer)</td><td>StemCell Technologies</td><td>#20144</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Direct Human Neutrophil Isolation Kit</td><td>StemCell Technologies</td><td>#19666</td><td></td></tr><tr><td>FcR Blocking Reagenz, human</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-059-901</td><td></td></tr><tr><td>FITC Anti-Human CD16 (3G8)</td><td>BioLegend</td><td>302005</td><td></td></tr><tr><td>OneComp eBeads Vergütungsbeads</td><td>eBioscience Inc.</td><td>01-1111-42</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 Anti-Human-CD86 (BU63)</td><td>BioLegend</td><td>374209</td><td></td></tr><tr><td>PE/Dazzle 594 Anti-Human-CD15 (SSEA-1)</td><td>BioLegend</td><td>323037</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalztabletten</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td></td></tr><tr><td>Zombie NIR Fixierbares Viabilitätskit</td><td>BioLegend</td><td>423105</td><td></td></tr></tbody></table>

die isolierung und charakterisierung von neutrophilen niedriger und normaler dichte aus vollblut

The Isolation and Characterization of Low- and Normal- Density Neutrophils from Whole Blood

Die erfolgreiche Schichtung der Gesamtneutrophilen über das Dichtegradientenmedium ist in Abbildung 1B zu sehen. Es sollten zwei unterschiedliche Banden erhalten werden. Wenn es zu einer Vermischung der Gradienten kommt oder die Anzahl der insgesamt geschichteten Neutrophilen pro Röhrchen hoch ist (größer als etwa 5-6 × 106), sehen die Banden diffus aus (Abbildung 1C), und das Risiko, dass sich die beiden neutrophilen Subtypen vermischen, steigt signi...

Die Isolierung und Charakterisierung von Neutrophilen niedriger und normaler Dichte aus Vollblut

Emerging research shows that the circulating neutrophil population in humans consists of diverse subtypes and should not be studied as a single ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Neutrophile Granulozyten gehören zu den ersten Zellen, die auf dem Gelände der entzündlichen Immunantwort kommen, und ihre Funktionen und Mechanismen wurden ausführlich in vitro untersucht. Wir zeigen eine Standard-Dichtegradienten Trennverfahren für die menschliche Neutrophile aus dem Vollblut unter Verwendung kommerziell erhältlicher Trennmedien isolieren.

Neutrophile Isolation Protocol

In diesem Video beschreiben wir das Verfahren zur Isolierung von Neutrophilen niedriger Dichte (LDNs) aus der Peritonealspülflüssigkeit eines postoperativen menschlichen Patienten. Die so erhaltenen LDNs können in weiteren nachgelagerten Experimenten verwendet werden, um ihre Rolle beim Tumorwachstum und bei der Tumorprogression zu verstehen.

Peritoneale Isolierung von Neutrophilen niedriger Dichte: Eine Technik zur Gewinnung von Neutrophilen niedriger Dichte aus Peritonealspülflüssigkeit unter Verwendung von magnetisch aktivierter Zellsortierung

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von zytotoxischen Neutrophilen hoher Dichte und Neutrophilen niedriger Dichte aus dem Blut einer tumortragenden Maus durch diskontinuierliche Saccharosegradientenzentrifugation.

Isolierung von zytotoxischen Neutrophilen aus tumortragendem Mausblut

Dieses Video zeigt einen in vitro Assay zur Untersuchung der Interaktion zwischen Neutrophilen und Biofilmen. Die im Biofilm eingebetteten pathogenen Bakterien und isolierten Neutrophilen wurden mit Fluoreszenzmarkierungen markiert und die Immunantwort der Neutrophilen und die Umgehung der Immunantwort durch die Bakterien mit einem Fluoreszenzmikroskop bewertet.

Ein In-vitro-Assay zur Untersuchung der Interaktion zwischen Neutrophilen und Biofilm

Neutrophile spielen nicht nur eine wichtige Rolle bei der Abwehr des Wirts gegen eindringende Mikroorganismen, sondern sind auch an der Immunüberwachung von Tumorzellen beteiligt. Hier beschreiben wir Techniken im Zusammenhang mit der Isolierung von Neutrophilen mit Anti-Tumor-Eigenschaften und Methoden zur Überwachung der Funktion von Anti-Tumor-Neutrophilen in vitro und in vivo.

Isolierung und Charakterisierung von Neutrophilen mit Anti-Tumor-Eigenschaften

Neutrophile sind die am häufigsten vorkommende Art von weißen Blutkörperchen. Die Isolierung von Neutrophilen aus menschlichem Blut durch die Dichtegradiententrennungsmethode und die Differenzierung von humanen promyelozytären (HL60) Zellen entlang des granulozytären Weges werden hier beschrieben; ihre Rolle bei der Empfindlichkeit von Lymphomzellen gegenüber Anti-Lymphom-Wirkstoffen zu testen.

Neutrophilen-Isolierung und Analyse zur Bestimmung ihrer Rolle in der Lymphom-Zellempfindlichkeit therapeutische Mittel

Neue Protokolle werden hier beschrieben, zu isolieren und zu charakterisieren Mikropartikel abgeleitet von Mensch und Maus Neutrophile. Diese Protokolle nutzen Ultrazentrifugation, Durchflusszytometrie und Immunoblotting Techniken Mikropartikel Inhalte zu analysieren, und sie können zur Untersuchung der Rolle von Mikropartikeln aus verschiedenen Zelltypen in zelluläre Funktion abgeleitet.

Isolierung und Charakterisierung von Neutrophilen abgeleitet Mikropartikel für funktionelle Studien

Dieses Protokoll beschreibt einen hochempfindliche und hohen Durchsatz Neutrophilenzahl extrazelluläre Falle (NET) Assay für die halbautomatische Quantifizierung von ex-Vivo NET Bildung durch Immunfluoreszenz dreidimensionale konfokalen Mikroskopie. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um NET Bildung und Abbau nach verschiedenen Reize zu bewerten und kann verwendet werden, um mögliche NET gezielte Therapien zu studieren.

Ein High-Throughput-Assay zu beurteilen und zu quantifizieren Neutrophilenzahl extrazelluläre Trap Bildung

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Isolierung von Neutrophilen aus Vollblut, Buffy Coats oder Leukapheresemembranen, um eine gute Ausbeute, hohe Reinheit und minimale Zellaktivierung zu erreichen. Wir verwenden Gradientenreinigung, Sedimentation der roten Blutkörperchen (RBC) und RBC-Lyse, um ein hochwertiges / reines Neutrophilenpräparat zu erhalten.

Isolierung von menschlichen Neutrophilen aus Vollblut- und Buffycoats

Diese Forschung skizziert zwei Techniken zur Isolierung reichlich neutrophiler extrazellulärer Fallen (NETs) aus dem Knochenmark von Ratten. Eine Methode kombiniert ein kommerzielles Neutrophilen-Isolationskit mit einer Dichtegradientenzentrifugation, während die andere nur eine Dichtegradientenzentrifugation verwendet. Beide Ansätze liefern funktionelle NETs, die die von peripheren Blutneutrophilen übertreffen.

Einzigartiger Ansatz zur Isolierung von Neutrophilen im Knochenmark von Ratten mit vergleichbarer Kapazität

Neutrophile niedriger Dichte (LDN) nehmen bei mehreren Krankheiten signifikant zu. LDN werden in der Regel durch Zellsortierung isoliert. Wir stellen eine praktische Methode vor, um reines und lebensfähiges LDN zu erhalten. Nach der Dichtegradientenzentrifugation von peripherem Blut werden die Zellen mit magnetischen Mikrokügelchen inkubiert und dann LDN durch magnetische Säulen getrennt.

Schnelle magnetische Mikrobead-Methode zur effizienten Aufreinigung von Neutrophilen niedriger Dichte

Erfahren Sie die Isolierung von Neutrophilen niedriger und normaler Dichte aus menschlichem Vollblut mittels Dichtegradientenzentrifugation. Diese Methode ermöglicht hochreine Fraktionen für funktionelle Studien zur Neutrophilenheterogenität.

Die Isolierung und Charakterisierung von Neutrophilen niedriger und normaler Dichte aus Vollblut

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