Name: Vorhersage der Bedeutung von Antikörpern roter Blutkörperchen mit dem Monozyten-Makrophagen-Assay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:40:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: Lernen Sie den Monozyten-Makrophagen-Assay zur Vorhersage der klinischen Relevanz von Erythrozyten-Alloantikörpern in der Transfusionsmedizin kennen. Diese verbesserte Methode zeigt höhere Sensitivität als der klassische Monozyten-Monolayer-Assay.

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<ol><li>Tong, T. N., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+monocyte+monolayer+assay+to+evaluate+Fc%CE%B3+receptor-mediated+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Use of a monocyte monolayer assay to evaluate Fcγ receptor-mediated phagocytosis.</a> J Vis Exp. (119), e55039(2017).</li>
<li>Tong, T. N., Cen, S., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocyte+monolayer+assay%3A+Past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus+Med+Rev%22%5BJournal%5D)">The monocyte monolayer assay: Past, present and future.</a> Transfus Med Rev. 33 (1), 24-28 (2019).</li>
<li>Frias Boligan, K., Sandhu, G., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+evaluate+the+potential+clinical+significance+of+antibodies+to+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods to evaluate the potential clinical significance of antibodies to red blood cells.</a> Curr Protoc. 2 (8), e504(2022).</li>
<li>Lemay, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+first+case+of+severe+acute+hemolytic+transfusion+reaction+caused+by+anti-Sc2%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The first case of severe acute hemolytic transfusion reaction caused by anti-Sc2.</a> Transfusion. 58 (11), 2506-2512 (2018).</li>
<li>Tong, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+a+monocyte+monolayer+assay+in+the+assessment+of+intravenous+immunoglobulin-associated+hemolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The utility of a monocyte monolayer assay in the assessment of intravenous immunoglobulin-associated hemolysis.</a> Transfusion. 60 (12), 3010-3018 (2020).</li>
<li>Srivastava, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCAR%3A+the+high-prevalence+antigen+013.008+in+the+Scianna+blood+group+system%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">SCAR: the high-prevalence antigen 013.008 in the Scianna blood group system.</a> Transfusion. 61 (1), 246-254 (2021).</li>
<li>Branch, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentially+clinically+significant+anti-Dib+identified+by+monocyte+monolayer+assay+before+transfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Potentially clinically significant anti-Dib identified by monocyte monolayer assay before transfusion.</a> Transfusion. 61 (1), 331-332 (2021).</li>
<li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+monocytes+to+M1%2FM2+macrophages%3A+Phenotypical+vs.+functional+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">From monocytes to M1/M2 macrophages: Phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5, 514(2014).</li>
<li>Mills, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M1+and+M2+macrophages%3A+Oracles+of+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">M1 and M2 macrophages: Oracles of health and disease.</a> Crit Rev Immunol. 32 (6), 463-488 (2012).</li>
<li>Atri, C., Guerfali, F. Z., Laouini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+human+macrophage+polarization+in+inflammation+during+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Role of human macrophage polarization in inflammation during infectious diseases.</a> Int J Mol Sci. 19 (6), 1801(2018).</li>
<li>Bertani, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+M1%2FM2-polarized+human+macrophages+by+label-free+hyperspectral+reflectance+confocal+microscopy+and+multivariate+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Classification of M1/M2-polarized human macrophages by label-free hyperspectral reflectance confocal microscopy and multivariate analysis.</a> Sci Rep. 7, 8965(2017).</li>
<li>Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li>
<li>Cohn, C., Delaney, M., Johnson, S. T., Katz, L. M., Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCohn%2C+C+%22Technical+Manual%22">Technical Manual</a>. , 21st Ed, American Association for the Advancement of Blood and Biotherapeutics. Maryland, USA. (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1X PBS, pH 7,4, ohne Ca2+/Mg2+</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp;</td><td>311-425-CL</td><td>Bei 4 Grad oder Raumtemperatur lagern&nbsp;</td></tr><tr><td>AccutaseTM</td><td>STEMCELL Technologien&nbsp;</td><td>7920</td><td>Lösung zur Zellablösung</td></tr><tr><td>ACK Lysis Buffer&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologien&nbsp;</td><td>07850, 07800</td><td>Bei 4 Grad</td></tr><tr><td>Anti-Human-Globulin</td><td>NOVACLONE, Immunocor.&nbsp;</td><td>N/A</td><td>NOVACLONE Anti-igG für IAT-Tests&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-Rh(D) (WinRho. SDF CDN)</td><td>Saol Therapeutics&nbsp;</td><td>1003092</td><td>Jede kommerzielle Quelle von Rh-Immunglobin ist ausreichend&nbsp;</td></tr><tr><td>Zellschaber</td><td>UofT Medstore</td><td>83.395</td><td>Zellablösung&nbsp;</td></tr><tr><td>Cell Strainer 70uM Nylon</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>Filter für Zellen&nbsp;</td></tr><tr><td>Kammerschieber Nunc. Lab-TekTM II mit Abdeckung, RS Glasobjektträger steril&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>154534</td><td>Kammerrutschen für MMA&nbsp;</td></tr><tr><td>Deckgläser&nbsp;</td><td>VWR</td><td>48393-081</td><td>24 x 50 mm</td></tr><tr><td>Cytiva Ficoll Paque Plus, Dichte 1.077 g/L</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>17-1440-03</td><td>Abtrennung von PBMCS aus Vollblut; Dichtegradient mittel</td></tr><tr><td>Elvanol Eindeckmedium</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Dulbecco' s PBS (D-PBS) ohne Ca2+/Mg2+, 15 % (w/v) Polyvinylharz und 30 % (v/v) Glycerin.</td></tr><tr><td>Frisches Vollblut (ACD-Röhrchen) oder Buffy-Mantel</td><td>Canadian Blood Services</td><td></td><td>Kann bis zu 36 Stunden bei Raumtemperatur ruhen.</td></tr><tr><td>Humane rekombinante GM-CSF-STAMMZELLTECHNOLOGIEN</td><td>&NBSP;</td><td>78015.1</td><td>Zytokin zur Polarisation von M1-Makrophagen</td></tr><tr><td>Humane rekombinante IFN-gamma-STAMMZELLTECHNOLOGIEN</td><td>&nbsp;</td><td>78020</td><td>Zytokin zur Polarisation von M1-Makrophagen</td></tr><tr><td>Humane rekombinante IL-4-STAMMZELLTECHNOLOGIEN</td><td>&nbsp;</td><td>78045.1</td><td>Zytokin zur Polarisation von M2-Makrophagen</td></tr><tr><td>Humane rekombinante M-CSF-STAMMZELLTECHNOLOGIEN</td><td>&NBSP;</td><td>78057.1</td><td>Zytokin zur Polarisation von M2-Makrophagen</td></tr><tr><td>ID-CellStab</td><td>Bio-Rad</td><td>005650 05740</td><td>Lagerungs-/Stabilisierungslösung für Erythrozytenzellen&nbsp;</td></tr><tr><td>Isolation Medium&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>PBS Ca2+ und Mg2+ frei + FBS 2% + 1mM EDTA</td></tr><tr><td>Lipopolysaaracide (LPS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L3024-5MG</td><td>Zytokin zur Polarisation von M1-Makrophagen Methanol</td></tr><tr><td>(100%)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Fixierung von Objektträgern&nbsp;</td></tr><tr><td>Monozyten-Isolationskit STAMMZELLEN EasySep Humanes Monozyten-Anreicherungskit ohne CD16-Depletion&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologien&nbsp;</td><td>19058</td><td>Isolierung von Monozyten aus PBMCs</td></tr><tr><td>Poly-D-ysin&nbsp;</td><td>UofT Medstore&nbsp;</td><td>P6407</td><td>Lösung zur Zellanhaftung&nbsp;</td></tr><tr><td>Rh(D) positive R2R2 RBCs</td><td>Canadian Blood Services</td><td>N/A</td><td>Auch kommerziell erhältlich</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp;</td><td>350-000-CL</td>, <td>ergänzt mit 10 % hitzeinaktiviertem FBS, 1 mM GlutaMAX-Supplement, 1 mM HEPES und 1 % Penicillin/Streptomycin. Bei 4 Grad lagern.</td></tr><tr><td>Trypanblau-Lösung&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15250061</td><td>Lösung zur Zellzählung&nbsp;</td></tr></tbody></table>

vorhersage der bedeutung von antikörpern roter blutkörperchen mit dem monozyten-makrophagen-assay

Prediction of Red Blood Cell Antibody Significance Using the Monocyte-Macrophage Assay

Die Ergebnisse in Abbildung 1 stimmen mit der Literatur überein und deuten auf eine erfolgreiche Polarisation der Makrophagen von ihrem M0-Zustand in ihren nachfolgenden M1/M2-Zustand hin. M1- und M2-Makrophagen wurden 8 Tage lang kultiviert (6 Tage mit Wachstumsfaktoren und 2 Tage Polarisation), und es wurden anti-D- oder anti-k-opsonisierte Erythrozyten getestet (Abbildung 2). M2-Makrophagen weisen einen hohen phagozytären Index im Vergleich z...

Vorhersage der Bedeutung von Antikörpern roter Blutkörperchen mit dem Monozyten-Makrophagen-Assay

Derived from monocytes in the bone marrow, macrophages are large, innate immune cells that play a major role in clearing dead cells, debris, tumor cells, ...

prediction-red-blood-cell-antibody-significance-using-monocyte

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video zeigt einen Monozyten-Monolayer-Assay, der primäre Monozyten aus peripherem Blut verwendet, um die Fcγ-Rezeptor-vermittelte Phagozytose mit Poly-D-Antikörper-opsonisierten R2R2 roten Blutkörperchen zu bewerten.

Ein Assay zur Untersuchung der fcγ-Rezeptor-getriebenen Phagozytose in Monozyten-Monoschichten

Monozyten abgeleiteten Makrophagen sind wichtige Zellen des angeborenen Immunsystems. Hier beschreiben wir eine einfach zu...

Ein<em&gt; In-vitro-</em&gt; Modell zur Heterogenität des menschlichen Makrophagen Differenzierung und Polarisierung Studieren

Dieses Protokoll beschreibt die Anwendung der Ganzzell-MALDI-TOF-Massenspektrometrie an eukaryotischen Zellen. Hier veranschaulichen wir die Genauigkeit dieser Technik, indem wir die multiplen Aktivierungszustände von Makrophagen als Reaktion auf ihre Mikroumgebung analysieren.

Ganzzell MALDI-TOF-Massenspektrometrie ist eine genaue und schnelle Methode, um verschiedene Arten der Makrophagen-Aktivierung Analysieren

Hier beschreiben wir zwei Assays zur Messung von Komplement-Aktivierung durch Antikörper gegen rote Blutzellen induziert. Der große Vorteil gegenüber den aktuellen Untersuchungen ist die quantitative und einfach zu interpretieren Natur.

Methoden für die quantitative Bestimmung von Antikörper-induzierte Komplementaktivierung auf Red Blood Cells

Wir stellen ein einfaches und effizientes Protokoll für die Herstellung von menschlichen Makrophagen. Buffy Coats werden durch Doppel Dichtegradientenzentrifugation isoliert verarbeitet und Monozyten werden dann an Makrophagen in Teflon-beschichtete Zellkulturbeutel differenziert. Dies maximiert Makrophagen-Renditen und erleichtert die Zellernte für nachfolgende Experimente.

Isolierung humaner Monozyten durch Doppel-Zentrifugation und ihre Differenzierung zu Makrophagen in Teflon-beschichteten Zellkultur-Taschen

Der Monozyten-Monolayer-Assay (MMA) ist ein In-vitro-Assay, der isolierte primäre Monozyten aus dem peripheren Vollblut von Säugetieren verwendet, um die Fcγ-Rezeptor (FcγR)-vermittelte Phagozytose zu bewerten.

Die Verwendung eines Monozyten einschichtiges Assay Fcy rezeptorvermittelte Phagozytose zur Bewertung

Dieses Protokoll liefert eine Analyse der Makrophagen-Subpopulationen in das erwachsene Maus-Zentralnervensystem durch Durchflusszytometrie und ist hilfreich für die Untersuchung von mehreren Markern, die von diesen Zellen exprimiert werden.

Analyse von Mikroglia und Monozyten-abgeleiteten Makrophagen aus dem Zentralnervensystem durch Durchflusszytometrie

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Charakterisierung von Monocyte Teilmengen von Vollblut Durchflusszytometrie. Dazu gehören wie Tor die Teilmengen und bewerten ihren Ausdruck der oberflächenmarker skizziert und geben ein Beispiel für die Beurteilung des Ausdrucks (entzündlich) M1 und M2-Marker (entzündungshemmend).

Charakterisierung der menschliche Monocyte Teilmengen von Vollblut Flow Cytometry Analysis

Hier stellen wir ein Protokoll zur Quantifizierung der chemotaktischen Aktivität von Blutmonozyten in Mausmodellen vor, um die Auswirkungen ernährungsphysiologischer, pharmakologischer und genetischer Interventionen auf die Blutmonozyten zu bewerten und die von Denmonzyten abgeleiteten Makrophagen in Mausmodelle mit monocyt-chemoattractant protein-1 (MCP-1)-geladenen Kellermembran-gelüfteten Gelsteckern.

Quantifizierung der monozytenchemotaktischen Aktivität in Vivo und Charakterisierung von Blutmonozyten abgeleiteten Makrophagen

Die Verwendung von Referenzreagenzien für Zytokinfreisetzungsassays ermöglicht reproduzierbarere und standardisierte In-vitro-Sicherheitsprofile von immuntherapeutischen monoklonalen Antikörpern. Im Folgenden wird beschrieben, wie Zytokin-Freisetzungsassays zusammen mit einem Referenzreagenzienpanel verwendet werden können, um die Sicherheit einiger therapeutischer monoklonaler Antikörper vorherzusagen.

Verwendung von Referenzreagenzien zur Bestätigung der Robustheit von Zytokin-Freisetzungsassays für die Vorhersage der Sicherheit monoklonaler Antikörper

Monozyten und Makrophagen sind sehr plastische und reprogrammierbare Immunzellen, die für Gesundheit und Krankheit entscheidend sind. Sie spüren und reagieren auf ein breites Spektrum von Reizen, indem sie spezifische Differenzierungsprogramme und Phänotypen übernehmen. Wir haben ein In-vitro-Modell standardisiert, um die Polarisation und Reprogrammierung von Makrophagen zu untersuchen, was ein wertvolles Werkzeug für die Forschung darstellt.

Reprogrammierungsmodell von humanen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen für In-vitro-Assays

Lernen Sie den Monozyten-Makrophagen-Assay zur Vorhersage der klinischen Relevanz von Erythrozyten-Alloantikörpern in der Transfusionsmedizin kennen. Diese verbesserte Methode zeigt höhere Sensitivität als der klassische Monozyten-Monolayer-Assay.

Vorhersage der Bedeutung von Antikörpern roter Blutkörperchen mit dem Monozyten-Makrophagen-Assay

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