Name: Entwicklung von Primärkulturen humaner tubulärer Nierenepithelzellen in Monolayern und dreidimensionalen Bedingungen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Lernen Sie die Kultivierung humaner tubulärer Nierenepithelzellen in Monolayern und 3D-Strukturen zur Untersuchung von Shiga-Toxin-Effekten. Diese Methode ermöglicht die Erforschung renaler Zytotoxizität und potenzieller Therapien.

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<ol><li>Rivas, M., Chinen, I., Miliwebsky, E., Masana, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+for+Shiga+toxin-producing+Escherichia+coli-associated+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Risk factors for Shiga toxin-producing Escherichia coli-associated human diseases.</a> Microbiol Spectr. 2 (5), (2014).</li>
<li>Gianantonio, C. A., Vitacco, M., Mendilaharzu, F., Gallo, G. E., Sojo, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hemolytic-uremic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">The hemolytic-uremic syndrome.</a> Nephron. 11 (2), 174-192 (1973).</li>
<li>Alconcher, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolytic+uremic+syndrome+associated+with+Shiga+toxin-producing+Escherichia+coli+infection+in+Argentina%3A+update+of+serotypes+and+genotypes+and+their+relationship+with+severity+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Hemolytic uremic syndrome associated with Shiga toxin-producing Escherichia coli infection in Argentina: update of serotypes and genotypes and their relationship with severity of the disease.</a> Pediatr Nephrol. 36 (9), 2811-2817 (2021).</li>
<li>Alconcher, L. F., Lucarelli, L. I., Bronfen, S., Meni Battaglia, L., Balestracci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+evolution+of+kidney+function+in+patients+with+STEC-hemolytic+uremic+syndrome+followed+for+more+than+15+years%3A+unexpected+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Dynamic evolution of kidney function in patients with STEC-hemolytic uremic syndrome followed for more than 15 years: unexpected changes.</a> Pediatr Nephrol. 40 (1), 143-150 (2025).</li>
<li>Monteverde, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decrease+in+the+incidence+of+Shiga+toxin-related+hemolytic+uremic+syndrome+as+a+cause+of+kidney+transplantation+at+an+Argentine+Referral+Center%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Transplant%22%5BJournal%5D)">A decrease in the incidence of Shiga toxin-related hemolytic uremic syndrome as a cause of kidney transplantation at an Argentine Referral Center.</a> Pediatr Transplant. 27 (4), e14489(2023).</li>
<li>Sandvig, K., van Deurs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entry+of+ricin+and+Shiga+toxin+into+cells%3A+molecular+mechanisms+and+medical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Entry of ricin and Shiga toxin into cells: molecular mechanisms and medical perspectives.</a> EMBO J. 19 (22), 5943-5950 (2000).</li>
<li>Obrig, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escherichia+coli+Shiga+toxin+mechanisms+of+action+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Escherichia coli Shiga toxin mechanisms of action in renal disease.</a> Toxins (Basel). 2 (12), 2769-2794 (2010).</li>
<li>Karpman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+renal+cortical+cells+in+the+hemolytic-uremic+syndrome%3A+in+vivo+and+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of renal cortical cells in the hemolytic-uremic syndrome: in vivo and in vitro studies.</a> Infect Immun. 66 (2), 636-644 (1998).</li>
<li>Pistone Creydt, v, Silberstein, C., Zotta, E., Ibarra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+effect+of+Shiga+toxin-2+holotoxin+and+its+B+subunit+on+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic effect of Shiga toxin-2 holotoxin and its B subunit on human renal tubular epithelial cells.</a> Microbes Infect. 8, 410-419 (2006).</li>
<li>Silberstein, C., Pistone Creydt, V., Gerhardt, E., Nuñez, P., Ibarra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+water+absorption+in+human+proximal+tubular+epithelial+cells+in+response+to+Shiga+toxin-2%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of water absorption in human proximal tubular epithelial cells in response to Shiga toxin-2.</a> Pediatr Nephrol. 23, 1981-1990 (2008).</li>
<li>Márquez, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Escherichia+coli+subtilase+cytotoxin+and+Shiga+toxin+2+on+primary+cultures+of+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effects of Escherichia coli subtilase cytotoxin and Shiga toxin 2 on primary cultures of human renal tubular epithelial cells.</a> PLoS One. 9, e87022(2014).</li>
<li>Márquez, L. B., Araoz, A., Repetto, H. A., Ibarra, F. R., Silberstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Shiga+toxin+2+on+cellular+regeneration+mechanisms+in+primary+and+three-dimensional+cultures+of+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Effects of Shiga toxin 2 on cellular regeneration mechanisms in primary and three-dimensional cultures of human renal tubular epithelial cells.</a> Microb Pathog. 99, 87-94 (2016).</li>
<li>Sánchez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eliglustat+prevents+Shiga+toxin+2+cytotoxic+effects+in+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Eliglustat prevents Shiga toxin 2 cytotoxic effects in human renal tubular epithelial cells.</a> Pediatr Res. 91 (5), 1121-1129 (2022).</li>
<li>Sánchez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estradiol+stimulates+cell+proliferation+through+classic+estrogen+receptors+and+GPER-1+in+human+renal+tubular+epithelial+cell+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Estradiol stimulates cell proliferation through classic estrogen receptors and GPER-1 in human renal tubular epithelial cell primary cultures.</a> Biochem Biophys Res Commun. 512, 170-175 (2019).</li>
<li>Fernandez Miyakawa, M., Zabal, O., Silberstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+perfringens+epsilon+toxin+is+cytotoxic+for+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Exp+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Clostridium perfringens epsilon toxin is cytotoxic for human renal tubular epithelial cells.</a> Hum Exp Toxicol. 30, 275-282 (2011).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+application+of+transcriptomics+and+ceRNA+hypothesis%3A+ln+cRNA-00742%2FmiR-116+targets+CD74+to+mediate+vanadium-induced+mitochondrial+apoptosis+in+duck+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hazard+Mater%22%5BJournal%5D)">Cooperative application of transcriptomics and ceRNA hypothesis: ln cRNA-00742/miR-116 targets CD74 to mediate vanadium-induced mitochondrial apoptosis in duck liver.</a> J Hazard Mater. 480, 135904(2024).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+toxicity+in+the+liver+of+broiler+chicken%3A+insights+from+metabolomics+and+AMPK-mTOR+mediated+autophagy+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Poult+Sci%22%5BJournal%5D)">Copper toxicity in the liver of broiler chicken: insights from metabolomics and AMPK-mTOR mediated autophagy perspective.</a> Poult Sci. 103 (9), 104011(2024).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Caveolin-1+on+the+molybdenum+and+cadmium+exposure+induces+pulmonary+ferroptosis+and+fibrosis+in+the+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Pollut%22%5BJournal%5D)">Role of Caveolin-1 on the molybdenum and cadmium exposure induces pulmonary ferroptosis and fibrosis in the sheep.</a> Environ Pollut. 334, 122207(2023).</li>
<li>Fujiki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockage+of+Akt+activation+suppresses+cadmium-induced+renal+tubular+cellular+damages+through+aggrephagy+in+HK-2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Blockage of Akt activation suppresses cadmium-induced renal tubular cellular damages through aggrephagy in HK-2 cells.</a> Sci Rep. 14, 14552(2024).</li>
<li>Joun, J. I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidative+effects+of+molybdenum+and+its+association+with+reduced+prevalence+of+hyperuricemia+in+the+adult+population%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Antioxidative effects of molybdenum and its association with reduced prevalence of hyperuricemia in the adult population.</a> PLoS One. 19 (8), e0306025(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Kollagenase Typ I</td><td>Sigma Merck, St. Louis, MO, USA</td><td>637958</td><td></td></tr><tr><td>Nahrungsergänzungsmittel für das Wachstum von Endothelzellen</td><td>Sigma Merck, St. Louis, MO, USA</td><td>Nr. E2759</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel Basalmembran-Matrix</td><td>BD Biosciences, USA; Sigma Merck, St. Louis, MO, USA</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; M Pore Mesh Filter</td><td>BD Bioscience, MA, Vereinigte Staaten von Amerika</td><td>css010070</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium mit L-Glutamin&nbsp;</td><td>Sigma Merck, St. Louis, MO, USA</td><td>R8758-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Ausgewogene Salzlösung&nbsp; Ca2+ und Mg2+ frei</td><td>Gibco Invitrogen, NY, Vereinigte Staaten Von Amerika</td><td>14175046</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA-Lösung</td><td>Sigma Merck, St. Louis, MO, USA</td><td>Nr. T4049</td><td></td></tr></tbody></table>

entwicklung von primärkulturen humaner tubulärer nierenepithelzellen in monolayern und dreidimensionalen bedingungen

Development of Human Renal Tubular Epithelial Cell Primary Cultures in Monolayers and Three-Dimensional Conditions

Konfluente HRTEC-Primärkulturen zeigten eine ähnliche Morphologie, die unter Lichtmikroskopie beobachtet wurde (Abbildung 1). Die Zellen wurden durch Immunfluoreszenz, wie in unseren früheren Publikationen beschrieben, unter Verwendung von Antikörpern gegen Aquaporin 1 (AQP1) und PECAM CD31charakterisiert 9,12,13. Immunfluoreszenzstudien zeigten, dass mehr als 90 % der HRTEC positiv für AQP1 waren, ...

Entwicklung von Primärkulturen humaner tubulärer Nierenepithelzellen in Monolayern und dreidimensionalen Bedingungen

Human renal tubular epithelial cell (HRTEC) primary cultures are isolated from kidneys removed from pediatric patients undergoing nephrectomies indicated ...

development-human-renal-tubular-epithelial-cell-primary-cultures

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Forschung

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Medizin

Rotierende Zellkultursystem, die Epithelzellen unter physiologischen Bedingungen, die sich in 3-D zellulären Aggregatbildung wachsen kann beschrieben. Die Aggregate erzeugt...

Die Züchtung und Anwendungen von Rotating Wand Schiff Bioreaktor Abgeleitet 3D Epithelzellen Models

In diesem Video demonstrieren wir die Schritte zur Isolierung und Reinigung von tubulären Nierenepithelzellen für eine breite Palette von molekularbiologischen und Zellkulturstudien.

Isolierung von Nierenzellen an der Maus: Eine Technik zur Isolierung und Erzeugung einer Primärkultur von tubulären Nierenepithelzellen

Dieses Protokoll beschreibt die Dezellularisierung von Sprague-Dawley-Rattennieren durch antegrade Perfusion von Detergenzien durch das Gefäßsystem, wodurch azelluläre extrazelluläre Nierenmatrizen entstehen, die als Vorlagen für die Wiederbestückung mit menschlichen Nierenepithelzellen dienen. Die Rezellularisierung und Verwendung des Resazurin-Perfusionsassays zur Überwachung des Wachstums wird in speziell entwickelten Perfusionsbioreaktoren durchgeführt.

Epithelialen Zellwiederbevölkerung und Herstellung von Nagetier extrazellulären Matrix Scaffolds für Nierengewebe Entwicklung

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Isolierung und Kultivierung von metanephrischen Rudimente aus Mäuseembryonen.

Dissektion und Kultur der Maus Embryonale Niere

Dieses Protokoll bietet eine kostengünstige Möglichkeit zu isolieren und zu charakterisieren Maus primäre renale tubuläre Zellen, die anschließend südlich kultiviert werden können, um renale biologischen Funktionen ex Vivo, einschließlich der mitochondrialen Bioenergetik zu beurteilen.

Isolierung, Charakterisierung und hohem Durchsatz extrazelluläre Flux-Analyse der Maus primäre renale tubuläre Epithelzellen

Diese Arbeit beschreibt zwei Methoden zur Untersuchung der Organentwicklung, eine verbesserte Xenotransplantation auf chorioallantoischer Membran (CAM) aus Aviären Embryonen, die eine Vaskularisation kultivierter embryonaler Organe und Organoide ermöglicht, und eine neuartige feste Z-Richtung. Organkulturmethode mit modifizierten experimentellen Bedingungen, die eine hochauflösende Zeitraffer-Konfokalbildgebung ermöglicht.

Optimierung der Renalorganoid- und Organotypischen Kultur für Vaskularisation, erweiterte Entwicklung und verbesserte Mikroskopie-Bildgebung

Hier wird ein chemisch definiertes Protokoll zur Ableitung menschlicher Nierenpodozyten aus induzierten pluripotenten Stammzellen mit hoher Effizienz (&gt;90%) und unabhängig von genetischen Manipulationen oder Subpopulationsselektion vorgestellt. Dieses Protokoll erzeugt den gewünschten Zelltyp innerhalb von 26 Tagen und könnte für Nephrotoxizitätstests und Krankheitsmodellierung nützlich sein.

Geführte Differenzierung reifer Nierenpodozyten aus human induzierten pluripotenten Stammzellen unter chemisch definierten Bedingungen

Menschliche Nierentupuloidkulturen stellen ein wertvolles In-vitro-Modell zur Untersuchung der Nierenphysiologie und -krankheit dar. Tubuloide können sowohl aus Nierengewebe (gesund und krank) als auch aus Urin hergestellt werden, wobei letzterer eine leicht erhältliche und weniger invasive Quelle für Forschungsmaterial darstellt.

Erzeugung von menschlichen Nierentubuliden aus Gewebe und Urin

Hier stellen wir Protokolle vor, die Anweisungen für die Implementierung von 3D-Zellkulturen unter Verwendung von Kollagen- und Kollagen-Agarose-Matrizen in einem mikrophysiologischen System enthalten. Diese Protokolle unterstützen die Co-Kultur von Sphäroiden mit Nierentubuli und Nierenzellkarzinom, simulieren In-vivo-Bedingungen und ermöglichen eine fortschrittliche Untersuchung von Wechselwirkungen mit Nierenkrebszellen.

Mikrofluidische Co-Kultur von gesunder Niere und Tumorepithel zur Modellierung des Fortschreitens von Nierenkrebs

Wir präsentieren ein optimiertes Protokoll für die Verarbeitung ganzer menschlicher Nieren zur Isolierung und Kultivierung primärer proximaler Tubulus-Epithelzellen und die Anwendung dieser Zellen in einer dreidimensionalen, mikrofluidischen, mikrophysiologischen Plattform zur Rekapitulation des proximalen Nierentubuli.

Isolierung primärer humaner proximaler Tubula-Epithelzellen und ihre Verwendung bei der Erstellung eines mikrophysiologischen Modells des proximalen Tubulus der Niere

Lernen Sie die Kultivierung humaner tubulärer Nierenepithelzellen in Monolayern und 3D-Strukturen zur Untersuchung von Shiga-Toxin-Effekten. Diese Methode ermöglicht die Erforschung renaler Zytotoxizität und potenzieller Therapien.

Entwicklung von Primärkulturen humaner tubulärer Nierenepithelzellen in Monolayern und dreidimensionalen Bedingungen

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