Name: Messung der Aufnahme des Glukoseanalogons 6-(n-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-desoxyglucose in intakter neuraler Netzhaut der Maus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Erfahren Sie eine kostengünstige ex-vivo-Methode zur Messung der Glukoseaufnahme in der intakten Maus-Netzhaut mit dem fluoreszierenden Analogon 6-NBDG. Dieses Protokoll ermöglicht parallele Analysen mehrerer Proben.

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<ol><li>Casson, R. J., Chidlow, G., Crowston, J. G., Williams, P. A., Wood, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+energy+metabolism+in+health+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal energy metabolism in health and glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 81, 100881(2021).</li>
<li>Daniele, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+uptake+by+GLUT1+in+photoreceptors+is+essential+for+outer+segment+renewal+and+rod+photoreceptor+survival%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Glucose uptake by GLUT1 in photoreceptors is essential for outer segment renewal and rod photoreceptor survival.</a> FASEB J. 36 (8), e22428(2022).</li>
<li>Fernandes, R., Hosoya, K. -I., Pereira, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+downregulate+glucose+transport+system+in+retinal+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species downregulate glucose transport system in retinal endothelial cells.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 300 (4), C927-C936 (2011).</li>
<li>Badr, G. A., Tang, J., Ismail-Beigi, F., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+downregulates+GLUT1+expression+in+the+retina+and+its+microvessels+but+not+in+the+cerebral+cortex+or+its+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes downregulates GLUT1 expression in the retina and its microvessels but not in the cerebral cortex or its microvessels.</a> Diabetes. 49 (6), 1016-1021 (2000).</li>
<li>Kumagai, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transport+in+brain+and+retina%3A+implications+in+the+management+and+complications+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Metab+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Glucose transport in brain and retina: implications in the management and complications of diabetes.</a> Diabetes Metab Res Rev. 15 (4), 261-273 (1999).</li>
<li>Winkler, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GLUT1+reductions+exacerbate+Alzheimer%27s+disease+vasculo-neuronal+dysfunction+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GLUT1 reductions exacerbate Alzheimer's disease vasculo-neuronal dysfunction and degeneration.</a> Nat Neurosci. 18 (4), 521-530 (2015).</li>
<li>Mosconi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypometabolism+exceeds+atrophy+in+presymptomatic+early-onset+familial+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Hypometabolism exceeds atrophy in presymptomatic early-onset familial Alzheimer's disease.</a> J Nucl Med. 47 (11), 1778-1786 (2006).</li>
<li>Moreno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+morphometric+changes+in+rat+optic+nerve+microvessels+in+a+glaucoma+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Soc+Esp+Oftalmol%22%5BJournal%5D)">Morphological and morphometric changes in rat optic nerve microvessels in a glaucoma experimental model.</a> Arch Soc Esp Oftalmol. 89 (12), 471-476 (2014).</li>
<li>Barros, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+validation+of+6-NBDG+as+a+probe+for+the+glucose+transporter+GLUT1+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Kinetic validation of 6-NBDG as a probe for the glucose transporter GLUT1 in astrocytes.</a> J Neurochem. 109 (s1), 94-100 (2009).</li>
<li>Hamilton, K. E., Bouwer, M. F., Louters, L. L., Looyenga, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+binding+and+uptake+of+fluorescent+glucose+analogs+2-NBDG+and+6-NBDG+occurs+independent+of+membrane+glucose+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Cellular binding and uptake of fluorescent glucose analogs 2-NBDG and 6-NBDG occurs independent of membrane glucose transporters.</a> Biochimie. 190, 1-11 (2021).</li>
<li>Feigenspan, A., Babai, N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+horizontal+slices+of+adult+mouse+retina+for+electrophysiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of horizontal slices of adult mouse retina for electrophysiological studies.</a> J Vis Exp. 119, e55173(2017).</li>
<li>Lundgaard, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+glucose+uptake+heralds+activity-dependent+increases+in+cerebral+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal glucose uptake heralds activity-dependent increases in cerebral metabolism.</a> Nat Commun. 6 (1), 6807(2015).</li>
<li>Zou, C., Wang, Y., Shen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2-NBDG+as+a+fluorescent+indicator+for+direct+glucose+uptake+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem+Biophys+Methods%22%5BJournal%5D)">2-NBDG as a fluorescent indicator for direct glucose uptake measurement.</a> J Biochem Biophys Methods. 64 (3), 207-215 (2005).</li>
<li>Wareham, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solving+neurodegeneration%3A+common+mechanisms+and+strategies+for+new+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Solving neurodegeneration: common mechanisms and strategies for new treatments.</a> Mol Neurodegener. 17 (1), 23(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td># 5 Pinzetten</td><td>Katena</td><td>K5-6550</td><td>Wird für die Retina-Dissektion</td></tr><tr><td>verwendet 1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>26 G x 5/8" Nadel</td><td>sol-M</td><td>112658</td><td>Wird verwendet, um die Hornhaut während der Dissektion zu punktieren</td></tr><tr><td>5 mL Röhrchen</td><td>MTC bio</td><td>c2540</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Röhrchen</td><td>Avantor by VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>6-NBDG</td><td>Invitrogen</td><td>N23106</td><td>Fluoreszierendes Gucose-Analogon</td></tr><tr><td>96-Well-Platten schwarz mit klarem Boden</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>265301</td><td></td></tr><tr><td>Anästhesie-Aktivkohlefilter Kanister</td><td>ReFresh</td><td>EZ-258</td><td>Wird in der Anästhesie eingerichtet</td></tr><tr><td>BAY-876</td><td>Millipore Sigma</td><td>SML1774</td><td>Zur Hemmung von GLUT1.</td></tr><tr><td>Zentrifuge bei 4 Grad; C</td><td>Eppendorf</td><td>EPP-5424</td><td></td></tr><tr><td>Druckgas (5 % Kohlendioxid, 95 % Sauerstoff)</td><td>Luftgas</td><td>UN3156</td><td>Wird in der Anästhesie verwendet, um</td></tr><tr><td>eine gebogene Pinzette</td><td>aufzubauen Roboz chirurgisches Instrument</td><td>RS-5137</td><td>Wird für die Netzhautdissektion</td></tr><tr><td>verwendet DDH2O</td><td>Elga LabWater</td><td>Elga PureLab Ultra</td><td>Wird nach Ethanol zur Reinigung des Ultraschallgeräts zwischen den Proben</td></tr> <tr><td>verwendetPräpariermikroskop</td><td>Olympus</td><td>szX12</td><td>Wird für die Sektion der Netzhaut</td></tr><tr><td>verwendet Ethanol 200 proof</td><td>Decon Laboratorien</td><td>2701</td><td>Zur Reinigung des Ultraschallgeräts zwischen den Proben</td></tr><tr><td>Schwimmendes Röhrchengestell aus Schaumstoff</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>36-099-2328</td><td>Für Röhrchen während der Inkubation in Wasserbadstufen</td></tr><tr><td>Allgemeine Schere</td><td>Roboz chirurgisches Instrument</td><td>RS-680</td><td>Wird für die Netzhaut verwendet Dissektion</td></tr><tr><td>Isofluran 250 mL Flasche</td><td>Piramal Intensivpflege</td><td>NDC &nbsp; 6679401725</td><td>Anästhesie</td></tr><tr><td>Isofluran-Gerät</td><td>Vetequip verkauft von VWR</td><td>89012-492</td><td>Wird zur Anästhesie vor der Euthanasie</td></tr><tr><td>verwendet Kim-Tücher</td><td>VWR</td><td>82003-820</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplatten-Reader</td><td>Molekulare Geräte</td><td>SpectraMax M2 Mikroplatten-Reader</td><td>Wird verwendet, um Proben zu lesen</td></tr><tr><td>Neurobasal- A-Medium</td><td>Gibco</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>Nasenkonus (niedrig) Profil Anästhesiemaske)</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0801</td><td>Wird verwendet, um Anästhesie zu liefern</td></tr><tr><td>Objektiv auf dem Präpariermikroskop</td><td>Olympus</td><td>DF plapo 1x pf</td><td>Wird für die Netzhautdissektion</td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>verwendet VWR</td><td>25384-088</td><td>Wird während der Netzhautdissektion verwendet</td></tr><tr><td>Pierce Assay Reagenz</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1861426</td><td></td></tr><tr><td>Pipettenspitzen P20</td><td>Olympus Kunststoffe</td><td>26-404</td><td></td></tr><tr><td>Pipettenspitzen P200, P1000, P10 XL</td><td>VWR</td><td>76322-150, 76322-154, 76322-132</td><td></td></tr><tr><td>Pipettenpipetten P200, P1000, P20, P10</td><td>VWR</td><td>F144055M, F144056M, F144058M F144059M</td><td></td></tr><tr><td>SoftMax Pro Software auf dem Computer</td><td>Molekulare Geräte</td><td>SoftMax Pro 7 Software</td><td>zum Auslesen der Probe</td></tr><tr><td>Sonic Dismembrator</td><td>Thermo Fisher Wissenschaftliche</td><td>FB50110</td><td>Ultraschallprobe (Netzhaut)</td></tr><tr><td>Transferpipetten</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-9AM</td><td>Zum Übertragen von Netzhaut von einem Röhrchen in ein anderes</td></tr><tr><td>Vannas Federschere</td><td>Katena</td><td>K4-5000</td><td>Wird für die Netzhautdissektion</td></tr><tr><td>verwendet Wasserbad eingestellt auf 37 Grad; C</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wird für die Inkubation verwendet</td></tr></tbody></table>

messung der aufnahme des glukoseanalogons 6-(n-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-desoxyglucose in intakter neuraler netzhaut der maus

Measuring Uptake of the Glucose Analog, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-6-Deoxyglucose, in Intact Murine Neural Retina

Abbildung 4 zeigt repräsentative Glukosefluoreszenzmessungen aus der Netzhaut von WT-Mäusen, die über verschiedene Zeiträume mit 6-NBDG inkubiert wurden. Nach 30 Minuten Inkubation betrugen die 6-NBDG-Spiegel durchschnittlich 336 ± 27,91 AE, während nach 60 Minuten die 6-NBDG-Spiegel auf durchschnittlich 616,3 ± 8,38 AE anstiegen. Eine weitere Inkubation von 30 Minuten führte zu einem reduzierten Gehalt an 6-NBDG (506,4 ± 5,3 AE). Bei 60 min war die Variabilität der Ergebnisse minimal und wu...

Messung der Aufnahme des Glukoseanalogons 6-(n-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-desoxyglucose in intakter neuraler Netzhaut der Maus

The retina is a highly metabolic tissue with multiple cell types requiring glucose and its derivatives to produce energy in the form of ATP. Retinal ...

measuring-uptake-glucose-analog-6-n-7-nitrobenz-2-oxa-13-diazol-4-yl

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Forschung

JoVE Journal

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Neurowissenschaften

Eine einfache und bequeme Methode, um das Ausmaß der Gap Junction-Tracer Kopplung zwischen Netzhautneuronen zu bestimmen, ist beschrieben. Diese Technik ermöglicht es, die Funktion der elektrischen Synapsen zwischen Nervenzellen im intakten Netzhaut unter verschiedenen Lichtverhältnissen und zu verschiedenen Zeiten des Tages und der Nacht zu untersuchen.

Cut-loading: ein nützliches Werkzeug für die Prüfung des Umfangs der Gap Junction Tracer Kopplung zwischen Netzhautneuronen

In diesem Video demonstrieren wir eine ex vivo-Technik zur Messung der extrazellulären Glukoseanaloga-Depletion in entnommenen Mausorganen. Dabei wird das Mausgewebe in einer Lösung inkubiert, die fluoreszenzmarkierte Desoxyglukose enthält, die von den Zellen aufgenommen wird. Die Glukoseanalogonaufnahme kann indirekt durch Messung der Fluoreszenz des inkubierten Mediums bestimmt werden.

Messung der extrazellulären fluoreszierenden Glukoseanaloga-Depletion: Eine Surrogat-Messtechnik zur Beurteilung der Glukoseaufnahme in Mausorganen ex vivo

Die Aktivität der einzelnen Neuronen aus erwachsenen Alters Mäusen kann durch distanziert Neuronen aus bestimmten Hirnregionen und unter Verwendung von fluoreszierenden Farbstoff Membranpotential Bildgebung untersucht werden. Durch Prüfung Antworten auf Veränderungen in Glucose, kann diese Technik verwendet, um die Glucoseempfindlichkeit von Erwachsenen ventromedialen Hypothalamus-Neuronen zu untersuchen.

Membrane Potential Dye Imaging von Ventromedial Hypothalamus Neuronen aus erwachsenen Mäusen zu Glucose Sensing Studieren

Dieses Verfahren beschreibt Echtzeit Aufnahme von Sauerstoff-Verbrauch und extrazelluläre Übersäuerung Preise in explantierten Maus retinalen Gewebe mit einer extrazellulären Flux-Analyzer.

Messung des Energiestoffwechsels in explantierten Netzhautgewebe extrazelluläre Flux-Analyse

In-vivo-Bildgebung ist ein leistungsfähiges Werkzeug für das Studium der Biologie in Gesundheit und Krankheit. Dieses Protokoll beschreibt die transpupille Bildgebung der Netzhaut der Maus mit einem Standard-Zwei-Photonen-Mikroskop. Es zeigt auch verschiedene In-vivoimaging-Methoden, um mehrere zelluläre Kohorten der Netzhaut fluoreszierend zu markieren.

Transpupille Zwei-Photonen-In-vivo-Bildgebung der Netzhaut der Maus

Dieses Protokoll beschreibt eine detaillierte Methode zur Herstellung und Immunfluoreszenzfärbung von Netzhaut-Flachhalterungen und Analysen von Mäusen. Auch die Verwendung der Fluoresceinfundusangiographie (FFA) bei Mäusewelpen und die Bildverarbeitung werden ausführlich beschrieben.

Überwachung des dynamischen Wachstums von Netzhautgefäßen im sauerstoffinduzierten Retinopathie-Mausmodell

Die Glukoseaufnahme ist in Drosophila-Motoneuronen erhöht, die von der TAR-DNA-bindenden Protein (TDP-43) -Proteinopathie betroffen sind, wie durch einen FRET-basierten, genetisch kodierten Glukosesensor angezeigt.

Messung der Glukoseaufnahme in Drosophila-Modellen der TDP-43-Proteinopathie

Das retinale Gefäßsystem der Maus ist besonders interessant, um die Mechanismen der Gefäßmusterbildung zu verstehen. Dieses Protokoll misst automatisch den Durchmesser von Netzhautgefäßen der Maus aus fluoreszierenden Angiographie-Fundusbildern in einem festen Abstand zur Sehscheibe.

Messung des retinalen Gefäßdurchmessers aus Fluoreszenzangiographie-Bildern der Maus

Wir beschreiben ein Verfahren zur Visualisierung wiederholt murine Mikroglia und zirkulierenden...

Ein Thin-Schädel Fenster-Technik für chronische Zwei-Photonen- In-vivo- Imaging von Murine Mikrogliazellen in Modelle der Neuroinflammation

Dieser Artikel zeigt die Aufzeichnung der einzelnen Zellen aus fluoreszenzmarkierten neuronaler Populationen im intakten Maus Netzhaut. Durch die Verwendung von Zwei-Photonen-Anregung Infrarot transgenetically markierten Zellen wurden für Patch-Clamp-Aufzeichnung gezielt ihr Licht Antworten rezeptiven Feld Eigenschaften und Morphologie zu studieren.

Elektrophysiologische Charakterisierung von GFP-exprimierenden Zellpopulationen in der intakte Retina

Erfahren Sie eine kostengünstige ex-vivo-Methode zur Messung der Glukoseaufnahme in der intakten Maus-Netzhaut mit dem fluoreszierenden Analogon 6-NBDG. Dieses Protokoll ermöglicht parallele Analysen mehrerer Proben.

Messung der Aufnahme des Glukoseanalogons 6-(n-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-desoxyglucose in intakter neuraler Netzhaut der Maus (Video) | JoVE Journal

Messung der Aufnahme des Glukoseanalogons 6-(n-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-desoxyglucose in intakter neuraler Netzhaut der Maus

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