Name: Ein stromlinienförmiger, etikettenfreier, Echtzeit-50%-Gewebekultur-Infektionsdosen-Assay (TCID50) unter Verwendung von Impedanz zur automatisierten Quantifizierung viraler Titer-Quantifizierung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Lernen Sie einen etikettenfreien TCID50-Assay mit Impedanzmessung zur Echtzeit-Quantifizierung viraler Titer. Diese Methode reduziert die Hands-on-Zeit und ermöglicht Hochdurchsatz-Analysen zytopathischer Effekte.

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<ol><li>Smither, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+plaque+assay+and+50%25+tissue+culture+infectious+dose+assay+as+methods+for+measuring+filovirus+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of the plaque assay and 50% tissue culture infectious dose assay as methods for measuring filovirus infectivity.</a> J Virol Methods. 193 (2), 565-571 (2013).</li>
<li>Pourianfar, H. R., Javadi, A., Grollo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+colorimetric-based+accurate+method+for+the+determination+of+enterovirus+71+titer%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Virol%22%5BJournal%5D)">A colorimetric-based accurate method for the determination of enterovirus 71 titer.</a> Indian J Virol. 23 (3), 303-310 (2012).</li>
<li>Hochdorfer, D., Businger, R., Hotter, D., Seifried, C., Solzin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated%2C+label-free+TCID50+assay+to+determine+the+infectious+titer+of+virus-based+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated, label-free TCID50 assay to determine the infectious titer of virus-based therapeutics.</a> J Virol Methods. 299, 114318(2022).</li>
<li>Lei, C., Yang, J., Hu, J., Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+Calculation+of+TCID50+for+quantitation+of+virus+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+Sin%22%5BJournal%5D)">On the Calculation of TCID50 for quantitation of virus infectivity.</a> Virol Sin. 36 (1), 141-144 (2021).</li>
<li>Giaever, I., Keese, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micromotion+of+mammalian+cells+measured+electrically%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Micromotion of mammalian cells measured electrically.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (17), 7896-7900 (1991).</li>
<li>Atienza, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+and+label-free+cell-based+assays+using+the+real-time+cell+electronic+sensing+system%5BTitle%5D)+AND+%22Assay+Drug+Dev+Technol%22%5BJournal%5D)">Dynamic and label-free cell-based assays using the real-time cell electronic sensing system.</a> Assay Drug Dev Technol. 4 (5), 597-607 (2006).</li>
<li>Cheung, C. Y., Leung, C. K., Peiris, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+of+the+real-time+and+label-free+cell+sensor+impedance+technology+to+transform+cell-based+infectivity+assays+for+influenza+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Influenza+Other+Respir+Viruses%22%5BJournal%5D)">Potential of the real-time and label-free cell sensor impedance technology to transform cell-based infectivity assays for influenza viruses.</a> Influenza Other Respir Viruses. 5 (Suppl 1), 151-154 (2011).</li>
<li>Ebersohn, K., Coetzee, P., Venter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+determining+virucidal+efficacy+of+a+chemical+disinfectant+using+an+electrical+impedance+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">An improved method for determining virucidal efficacy of a chemical disinfectant using an electrical impedance assay.</a> J Virol Methods. 199, 25-28 (2014).</li>
<li>Goh, V. S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+three+alternative+methods+to+the+plaque+reduction+neutralizing+assay+for+measuring+neutralizing+antibodies+to+dengue+virus+serotype+2%5BTitle%5D)+AND+%22Virology+J%22%5BJournal%5D)">Evaluation of three alternative methods to the plaque reduction neutralizing assay for measuring neutralizing antibodies to dengue virus serotype 2.</a> Virology J. 21 (1), (2024).</li>
<li>Crisostomo, L., Soriano, A. M., Mendez, M., Graves, D., Pelka, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+dynamics+of+adenovirus+5+gene+expression+in+normal+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Temporal dynamics of adenovirus 5 gene expression in normal human cells.</a> PLOS One. 14 (1), e0211192(2019).</li>
<li>Wang, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+cytopathic+effects+%28CPE%29+induced+by+influenza+virus+infection+using+deep+convolutional+neural+networks+%28CNN%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Differentiation of cytopathic effects (CPE) induced by influenza virus infection using deep convolutional neural networks (CNN).</a> PLoS Comput Biol. 16 (5), e1007883(2020).</li>
<li>Witkowski, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+impedance+measurement+as+a+new+tool+for+poxvirus+titration%2C+antibody+neutralization+testing+and+evaluation+of+antiviral+substances%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Cellular impedance measurement as a new tool for poxvirus titration, antibody neutralization testing and evaluation of antiviral substances.</a> Biochem Biophys Res Commun. 401 (1), 37-41 (2010).</li>
<li>Fang, Y., Ye, P., Wang, X., Xu, X., Reisen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+monitoring+of+flavivirus+induced+cytopathogenesis+using+cell+electric+impedance+technology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Real-time monitoring of flavivirus induced cytopathogenesis using cell electric impedance technology.</a> J Virol Methods. 173 (2), 251-258 (2011).</li>
<li>Marlina, S., Shu, M. -H., Abubakar, S., Zandi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+real-time+cell+analysing+%28RTCA%29+method+as+a+fast+and+accurate+screen+for+the+selection+of+chikungunya+virus+replication+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+%26+Vectors%22%5BJournal%5D)">Development of a real-time cell analysing (RTCA) method as a fast and accurate screen for the selection of chikungunya virus replication inhibitors.</a> Parasites & Vectors. 8 (1), (2015).</li>
<li>Charretier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+real-time+cell+analysis+method+for+determining+viral+infectious+titers+during+development+of+a+viral+vaccine+production+process%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Robust real-time cell analysis method for determining viral infectious titers during development of a viral vaccine production process.</a> J Virol Methods. 252, 57-64 (2018).</li>
<li>Lebourgeois, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+real-time+cell+analysis+%28RTCA%29+method+as+a+fast+and+accurate+method+for+detecting+infectious+particles+of+the+adapted+strain+of+Hepatitis+A+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development of a real-time cell analysis (RTCA) method as a fast and accurate method for detecting infectious particles of the adapted strain of Hepatitis A virus.</a> Front Cell Infect Microbiol. 8, (2018).</li>
<li>Suryadevara, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+cell+analysis%3A+A+high-throughput+approach+for+testing+SARS-CoV-2+antibody+neutralization+and+escape%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Real-time cell analysis: A high-throughput approach for testing SARS-CoV-2 antibody neutralization and escape.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101387(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,05 % Trypsin 0,53 mM EDTA&nbsp; (1x)</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>12 Kanalreagenzien-Reservoirs</td><td>VistaLab-Technologien</td><td>3054-1011</td><td></td></tr><tr><td>Adenovirus-GFP</td><td>Vector Biolabs&nbsp;</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-Medium</td><td>ATCC</td><td>30-2002</td><td></td></tr><tr><td>E-Plate VIEW 96</td><td>Agilent</td><td>300601020</td><td></td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum</td><td>Avantor</td><td>97068-085</td><td></td></tr><tr><td>Hek293A-Zelle</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>&nbsp; R70507</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin-Lösung</td><td>HyClone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatpuffer-Kochsalzlösung (1x)</td><td>HyClone</td><td>SH30256.01</td><td></td></tr><tr><td>Seaplaque agarose</td><td>Lonza</td><td>50101</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence RTCA eSight-System</td><td>Agilent</td><td>S2833AA</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence RTCA MP-System</td><td>Agilent</td><td>380601040</td><td></td></tr></tbody></table>

ein stromlinienförmiger, etikettenfreier, echtzeit-50%-gewebekultur-infektionsdosen-assay (tcid50) unter verwendung von impedanz zur automatisierten quantifizierung viraler titer-quantifizierung

A Streamlined, Label-Free Real-Time 50% Tissue Culture Infectious Dose (TCID50) Assay using Impedance for Automated Viral Titer Quantification

Ein stromlinienförmiger, etikettenfreier, Echtzeit-50%-Gewebekultur-Infektionsdosen-Assay (TCID50) unter Verwendung von Impedanz zur automatisierten Quantifizierung viraler Titer-Quantifizierung

Measuring the viral titer, the concentration of a virus in a sample, is a fundamental procedure in virology research. While essential, traditional methods ...

a-streamlined-label-free-real-time-50-tissue-culture-infectious-dose

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

In diesem Video zeigen wir eine alternative Methode für den Nachweis und Titrierung von Viren mit Hilfe einer enzymatischen Antigennachweis Technik als Immunperoxidase Test bekannt. Hier zeigen wir Ihnen, wie Sie Ihre virale Proben zu sammeln, bereiten die Zellen für die Prüfung und schließlich die Immunperoxidase Assay unter Verwendung von Verdünnungsreihen der virale Titer zu bestimmen.

Titration von Human Coronaviren Mit einem Immunoperoxidase Assay

Um Lentiviren, sind DNA-Vektoren in humanen 293-Zellen transfiziert. Nach der Ernte und die Konzentration der Überstand wird Virustiter mittels Fluoreszenz-Ausdruck mit einem Durchflußzytometer bestimmt.

Lentivirus Produktion

Diese Methode beschreibt die Verwendung von Infrarot-Farbstoff basierende Imaging-System für den Nachweis von H1N1 in bronchioalveolar Lavage (BAL) Flüssigkeit von infizierten Mäuse mit einer hohen Empfindlichkeit. Diese Methodik in einem 96 durchgeführt werden kann - oder 384-Well-Platte, erfordert &lt;10 ul Volumen von Testmaterial und hat das Potenzial für die gleichzeitige Screening von mehreren Erregern.

High-Throughput Nachweisverfahren für Influenza-Virus

Source: Fout, G. S., Cashdollar, J. L. EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. II. Total Culturable Virus Assay. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the use of a total culturable virus assay to quantify infectious viruses in water samples. It outlines host cell inoculation, observation of cytopathic effect, and statistical quantification of infectious virus concentration.

Quantifying Infectious Viruses in Water Samples Using an In Vitro Total Culturable Virus Assay

In diesem Video diskutieren wir die Korrelation zwischen dem CIT50 und der Vielzahl von Virusinfektionen. Die virusinfizierten Zellen zeigen zytopathische Wirkungen, die zu ihrem Tod und ihrer Ablösung von der Goldmikroelektrode führen, was wiederum die Impedanz verringert.

Impedanzbasierter zellulärer Assay zur Messung der Vielzahl von Infektionen mit Influenzaviren

Dieser Artikel stellt eine auf Hochdurchsatz-Luziferase-Expression basierende Methode zur Titration verschiedener RNA- und DNA-Viren mit automatisierten und manuellen Liquid Handlern vor.

Hochdurchsatz-Titration von Luciferase-exprimierenden rekombinanten Viren

Diese Studie beschreibt ein   Imaging-basierte Mikroneutralisationstest auf die antigenen Beziehungen zwischen Viren zu analysieren. Das Protokoll verwendet einen Flachbettscanner und hat vier Schritte, einschließlich der Titration Titration Quantifizierung, Neutralisierung und Neutralisierung Quantifizierung. Der Test funktioniert gut mit aktuellen zirkulierenden Influenza A (H1N1) pdm09, A (H3N2) und B-Viren.

Optimierung eines Assay Quantitative Mikroneutralisations

Hier wird ein Protokoll zur Quantifizierung infektiöser Viruspartikel unter Verwendung der Echtzeitüberwachung der elektrischen Impedanz infizierter Zellen beschrieben. Eine praktische Anwendung dieser Methode wird durch die Quantifizierung des Influenza-A-Virus-Zerfalls unter verschiedenen physikalisch-chemischen Parametern, die Umweltbedingungen nachahmen, vorgestellt.

Überwachung des Überlebens von Influenzaviren außerhalb des Wirts mithilfe der Echtzeit-Zellanalyse

Dieses Protokoll zeigt einen genauen und objektiven Ansatz zur Visualisierung viraler Titrationen unter Verwendung von Kristallviolett, indem es mit optischer Mikroskopie und immunzytochemischer Färbung verglichen wird.

Verwendung von Crystal Violet zur Verbesserung des visuellen zytopathischen Effekt-basierten Lesens für die virale Titration mit TCID50-Assays

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Vermehrung des Zika-Virus (ZIKV) in Nierenzellen von Vero-Afrikanischen Grünen Meerkatzen und die Quantifizierung von ZIKV unter Verwendung zellbasierter kolorimetrischer Immundetektionsmethoden in 24-Well- und 96-Well-Formaten (Hochdurchsatz).

Virusvermehrung und zellbasierte kolorimetrische Quantifizierung

Hier demonstrieren wir die Verwendung der zellbasierten elektrischen Impedanz (CEI) als eine sehr einfache und unkomplizierte Methode, um die Infektion und Replikation des Zika-Virus in menschlichen Zellen in Echtzeit zu untersuchen. Darüber hinaus ist der CEI-Assay nützlich für die Bewertung antiviraler Verbindungen.

Zellbasierte elektrische Impedanzplattform zur Evaluierung von Zika-Virus-Inhibitoren in Echtzeit

Lernen Sie einen etikettenfreien TCID50-Assay mit Impedanzmessung zur Echtzeit-Quantifizierung viraler Titer. Diese Methode reduziert die Hands-on-Zeit und ermöglicht Hochdurchsatz-Analysen zytopathischer Effekte.

Ein stromlinienförmiger, etikettenfreier, Echtzeit-50%-Gewebekultur-Infektionsdosen-Assay (TCID50) unter Verwendung von Impedanz zur automatisierten Quantifizierung viraler Titer-Quantifizierung (Video) | JoVE Journal

Ein stromlinienförmiger, etikettenfreier, Echtzeit-50%-Gewebekultur-Infektionsdosen-Assay (TCID50) unter Verwendung von Impedanz zur automatisierten Quantifizierung viraler Titer-Quantifizierung

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