Name: Isolierung primärer humaner proximaler Tubula-Epithelzellen und ihre Verwendung bei der Erstellung eines mikrophysiologischen Modells des proximalen Tubulus der Niere (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung primärer proximaler Tubulus-Epithelzellen aus menschlichen Nieren und deren Kultivierung in einem mikrophysiologischen System. Diese Methode ermöglicht präzisere Untersuchungen von Arzneimitteltransport und Nephrotoxizität.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>1 ml Luer-Lok-Tip-Spritzen</td><td>Becton, Dickinson</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>1,5-mL Mikrozentrifugenröhren</td><td>CELLTREAT Wissenschaftliche Produkte</td><td>229442</td><td></td></tr><tr><td>15 mL steriles konisches Polypropylenrohr</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-53A</td><td></td></tr><tr><td>3D-Mikrophysiologisches Gerät</td><td>Nortis</td><td>TCC-001</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Luer-Lok-Tip-Spritzen</td><td>Becton, Dickinson</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>50 mL steriles konisches Polypropylenrohr</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-271</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotikum-Antimykotikum (100x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase, Typ IV, Pulver</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17104019</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glukose</td><td>MilliporeSigma</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Definierter Trypsininhibitor</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>R007100</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid, Bioreagenz, Thermowissenschaftliche Chemikalien</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>J66650-AK</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II, Pulver</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s MEM (DMEM)/F-12 ohne Glukose</td><td>US-amerikanische Bio-Lebenswissenschaften</td><td>D9807-02</td><td></td></tr><tr><td>Dulbeccos Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (DPBS), Kalzium, Magnesium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14040117</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS), Premium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A5670701</td><td></td></tr><tr><td>Finnpipette F2 Good Laboratory Pipetting (GLP) Kits</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>05-719-511</td><td>Mikropipetten</td></tr><tr><td>Fisherbrand SureOne Micropoint-Pipettenspitzen, universell passend, ungefiltert</td><td>Fisher Scientific</td><td>02707407, 02707410, 02707438</td><td></td></tr><tr><td>Frische, ganze menschliche Niere</td><td>Novabiose</td><td>https://www.novabiosis.com/research-organ-allocation-services/</td><td>Menschliche Nieren wurden durch Novabiosis, ein von der UNOS zugelassenes OPO, gewonnen</td></tr><tr><td>Befeuchteter Brutkasten (37 & °C; C und 5% CO2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>51033556</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>MilliporeSigma</td><td>H0888</td><td></td></tr><tr><td>Inkubierender Orbitalshaker</td><td>Avantor</td><td>12620-946</td><td></td></tr><tr><td>Insulin-Transferrin-Selen (100X) (ITS -G)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>Interne Thread-Kryogene Fläschchen</td><td>Corning</td><td>430487</td><td></td></tr><tr><td>Kimtech Science Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Profi</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Luer-Stummel (stumpfe Nadel), 22 G x 0,5 Zoll</td><td>Instech Laboratories, Inc.</td><td>LS22</td><td></td></tr><tr><td>Medium 199, Earle's Salts (10x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21180021</td><td></td></tr><tr><td>Megafuge 8 Kleine Werkbankzentrifuge</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>75007210</td><td></td></tr><tr><td>Metallkupplung (stumpf)</td><td>Instech Laboratories, Inc.</td><td>SC 20/15</td><td></td></tr><tr><td>Mr. Frostiger Gefrierbehälter</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>5100-0036</td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ti-S Mikroskop</td><td>Nikon Instruments</td><td>https://www.thelabworldgroup.com/product/nikon-eclipse-ti-fluorescent-microscope/</td><td>Ursprüngliches Modell eingestellt&nbsp;</td></tr><tr><td>Unbehandelte Nunc-Flaschen, T-25</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>169900</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Unbehandelte Flaschen, T-75</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>156800</td><td></td></tr><tr><td>Pipette, 10 ml, abgegradet, 1/10 ml, steril</td><td>Greiner Bio-One</td><td>607180</td><td></td></tr><tr><td>Siliziumrohr, C-Flex-Rohr (ID: 0,020", OD: 0,083")</td><td>Cole-Parmer</td><td>06422-00</td><td></td></tr><tr><td>Einschneidige Rasierklinge (steril)</td><td>Bioseal</td><td>KI-205/50</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>MilliporeSigma</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhydroxid</td><td>MilliporeSigma</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Einwegfiltereinheiten mit PES-Membranen</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>567-0020</td><td></td></tr><tr><td>Gewebekultur-behandelte Schalen, 150 mm&nlffel; x 20 mm Belüftet</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,05 %), Phenolrot</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Typ-I-Kollagen, Rattenschwanz</td><td>Corning</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>Typ-IV-Kollagen, Maus</td><td>Corning</td><td>354233</td><td></td></tr></tbody></table>

isolierung primärer humaner proximaler tubula-epithelzellen und ihre verwendung bei der erstellung eines mikrophysiologischen modells des proximalen tubulus der niere

Isolation of Primary Human Proximal Tubule Epithelial Cells and Their Use in Creating a Microphysiological Model of the Renal Proximal Tubule

Isolierung primärer humaner proximaler Tubula-Epithelzellen und ihre Verwendung bei der Erstellung eines mikrophysiologischen Modells des proximalen Tubulus der Niere

Kidney disease affects over 850 million people globally, including 37 million Americans. Risk factors for&#160;chronic kidney disease include ...

isolation-primary-human-proximal-tubule-epithelial-cells-their-use

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Forschung

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Medizin

In diesem Video demonstrieren wir die Schritte zur Isolierung und Reinigung von tubulären Nierenepithelzellen für eine breite Palette von molekularbiologischen und Zellkulturstudien.

Isolierung von Nierenzellen an der Maus: Eine Technik zur Isolierung und Erzeugung einer Primärkultur von tubulären Nierenepithelzellen

Ionenkanäle in renale tubuläre Epithel ausgedrückt spielen eine bedeutende Rolle in der Pathologie der polyzystischen Nierenerkrankung. Hier beschreiben wir experimentelle Protokolle verwendet, um Patch-Clamp-Analyse und intrazellulären Calcium-Pegelmessungen in Zystenepithel frisch aus Nagetier Nieren getrennt durchzuführen.

Implementieren der Patch-Clamp und Live-Fluoreszenzmikroskopie, um funktionelle Eigenschaften von frisch isolierten PKD Epithel-Monitor

Dieses Protokoll beschreibt die Dezellularisierung von Sprague-Dawley-Rattennieren durch antegrade Perfusion von Detergenzien durch das Gefäßsystem, wodurch azelluläre extrazelluläre Nierenmatrizen entstehen, die als Vorlagen für die Wiederbestückung mit menschlichen Nierenepithelzellen dienen. Die Rezellularisierung und Verwendung des Resazurin-Perfusionsassays zur Überwachung des Wachstums wird in speziell entwickelten Perfusionsbioreaktoren durchgeführt.

Epithelialen Zellwiederbevölkerung und Herstellung von Nagetier extrazellulären Matrix Scaffolds für Nierengewebe Entwicklung

Hier präsentieren wir eine neue klinische Grade Isolation und Kultur Methode zur Niere perivaskuläre Stromazellen Zellen (kPSCs) anhand der gesamten Organ Perfusion mit Verdauungsenzymen und NG2-Zelle Bereicherung. Mit dieser Methode ist es möglich, ausreichende Zellzahlen für Zelltherapie erwerben.

Eine neue klinische Grade Isolationsmethode für menschliche Niere perivaskuläre Stromazellen Zellen

Tissue-Engineering Nierenfunktion Konstrukte bieten eine Lösung für den Organmangel und die schädlichen Wirkungen der Dialyse. Hier beschreiben wir ein Protokoll zum Mikro murine Nieren zur Isolation von Cortico-medullären Segmente zu sezieren. Diese Segmente werden in zellulären Gerüst-freie Konstrukte bilden renale Organellen implantiert.

Mikrodissektion primäre renale Gewebe Segmente und Einbindung mit neuartigen Gerüst-freie Konstrukt-Technologie

Dieses Protokoll bietet eine kostengünstige Möglichkeit zu isolieren und zu charakterisieren Maus primäre renale tubuläre Zellen, die anschließend südlich kultiviert werden können, um renale biologischen Funktionen ex Vivo, einschließlich der mitochondrialen Bioenergetik zu beurteilen.

Isolierung, Charakterisierung und hohem Durchsatz extrazelluläre Flux-Analyse der Maus primäre renale tubuläre Epithelzellen

Menschliche Nierentupuloidkulturen stellen ein wertvolles In-vitro-Modell zur Untersuchung der Nierenphysiologie und -krankheit dar. Tubuloide können sowohl aus Nierengewebe (gesund und krank) als auch aus Urin hergestellt werden, wobei letzterer eine leicht erhältliche und weniger invasive Quelle für Forschungsmaterial darstellt.

Erzeugung von menschlichen Nierentubuliden aus Gewebe und Urin

Hier stellen wir Protokolle vor, die Anweisungen für die Implementierung von 3D-Zellkulturen unter Verwendung von Kollagen- und Kollagen-Agarose-Matrizen in einem mikrophysiologischen System enthalten. Diese Protokolle unterstützen die Co-Kultur von Sphäroiden mit Nierentubuli und Nierenzellkarzinom, simulieren In-vivo-Bedingungen und ermöglichen eine fortschrittliche Untersuchung von Wechselwirkungen mit Nierenkrebszellen.

Mikrofluidische Co-Kultur von gesunder Niere und Tumorepithel zur Modellierung des Fortschreitens von Nierenkrebs

Im Folgenden beschreiben wir die Protokolle zur Gewinnung von Primärkulturen humaner tubulärer Epithelzellen (HRTEC) aus der Nierenrinde, um Monoschichten und dreidimensionale Kulturen auf einer extrazellulären Matrix (3D-HRTEC) zu entwickeln.

Entwicklung von Primärkulturen humaner tubulärer Nierenepithelzellen in Monolayern und dreidimensionalen Bedingungen

Hier beschreiben wir ein in-vitro-Protokoll zur Modellierung von Hypoxie/Reoxygenierungsschäden in den hochmetabolischen proximalen tubulären Epithelzellen. Dieses Modell ist darauf ausgelegt, durch metabolischen Stress verursachten Schaden zu induzieren, was durch die Expression proximaler Tubulusschadenmarker und die Beurteilung der mitochondrialen Atemfunktion gemessen werden kann.

Modellierung von Hypoxie/Reoxygenationsschäden in proximalen tubulären Epithelzellen

Erfahren Sie die Isolierung primärer proximaler Tubulus-Epithelzellen aus menschlichen Nieren und deren Kultivierung in einem mikrophysiologischen System. Diese Methode ermöglicht präzisere Untersuchungen von Arzneimitteltransport und Nephrotoxizität.

Isolierung primärer humaner proximaler Tubula-Epithelzellen und ihre Verwendung bei der Erstellung eines mikrophysiologischen Modells des proximalen Tubulus der Niere (Video) | JoVE Journal

Isolierung primärer humaner proximaler Tubula-Epithelzellen und ihre Verwendung bei der Erstellung eines mikrophysiologischen Modells des proximalen Tubulus der Niere

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