Name: Vorbereitung und Durchführung eines IsoPositiv-Käfig-Experiments zur Stuhltransplantation von Menschen in keimfreie Mäuse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Erfahren Sie die Stuhltransplantation von Menschen in keimfreie Mäuse mittels IsoPositiv-Käfig-System für Mikrobiom-Forschung und Krebsbiologie. Diese Methode ermöglicht die Validierung kausaler Zusammenhänge.

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<ol><li>Park, J. C., Im, S. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+men+in+mice%3A+the+development+and+application+of+a+humanized+gnotobiotic+mouse+model+for+microbiome+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Of men in mice: the development and application of a humanized gnotobiotic mouse model for microbiome therapeutics.</a> Exp Mol Med. 52 (9), 1383-1396 (2020).</li>
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<li>Routy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiome+influences+efficacy+of+PD-1-based+immunotherapy+against+epithelial+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gut microbiome influences efficacy of PD-1-based immunotherapy against epithelial tumors.</a> Science. 359 (6371), 91-97 (2018).</li>
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<li>Berland, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+engraftment+capacity+of+frozen+ready-to-use+human+fecal+microbiota+transplants+assessed+in+germ-free+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">High engraftment capacity of frozen ready-to-use human fecal microbiota transplants assessed in germ-free mice.</a> Sci Rep. 11 (1), 4365(2021).</li>
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<li>Bokoliya, S. C., Dorsett, Y., Panier, H., Zhou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedures+for+fecal+microbiota+transplantation+in+murine+microbiome+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Procedures for fecal microbiota transplantation in murine microbiome studies.</a> Front Cell Infect Microbiol. 11, 711055(2021).</li>
<li>Li, Y., Cao, W., Gao, N. L., Zhao, X. -M., Chen, W. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consistent+alterations+of+human+fecal+microbes+after+transplantation+into+germ-free+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Genomics+Proteomics+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Consistent alterations of human fecal microbes after transplantation into germ-free mice.</a> Genomics Proteomics Bioinformatics. 20 (2), 382-393 (2022).</li>
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<li>Lebeuf, M., Turgeon, N., Faubert, C., Robillard, J., Paradis, É, Duchaine, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Managing+the+bacterial+contamination+risk+in+an+axenic+mice+animal+facility%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Managing the bacterial contamination risk in an axenic mice animal facility.</a> Can J Microbiol. 67 (9), 657-666 (2021).</li>
<li>Basic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+and+contamination+incidence+of+gnotobiotic+experiments+performed+in+microisolator+cages%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Monitoring and contamination incidence of gnotobiotic experiments performed in microisolator cages.</a> Int J Med Microbiol. 311 (3), 151482(2021).</li>
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Keimfreie Mäuse sind ein wesentliches Werkzeug im Repertoire der Mikrobiomforscher, das es ermöglicht, den Beitrag der Mikrobiota zur Gesundheit und zum Krankheitszustand des Wirts zu analysieren. Keimfreie Mäuse werden völlig steril geboren und bleiben ihr Leben lang axenisch1. Die Besiedlung keimfreier Mäuse mit spezifischen Bakterienstämmen ermöglicht ursächliche Studien zwischen diesen Taxa und Stoffwechsel-, Immun- oder anderen Wirtsfunktionen 2,3,4,5. Besonders vorteilhaft ist die Möglichkeit, keimfreie Mäuse auf der Ebene der Mikrobiota durch die Transplantation von Kot von menschlichen Spendern zu "humanisieren" und, wenn sie unter Barrierebedingungen untergebracht sind, eine Kontamination durch von Mäusen stammende Mikroorganismen zu verhindern1. Dieser Ansatz hat viele wichtige Entdeckungen auf dem Gebiet des Mikrobioms ermöglicht, z. B. die Wirkung des menschlichen Darmmikrobioms auf das Ansprechen auf die Immuntherapiebei Krebs 6,7,8.
Obwohl humanisierte keimfreie Mäuse für die Forschungsbemühungen im Bereich des Mikrobioms von unschätzbarem Wert sind, gibt es viele Einschränkungen, die eine breitere Adaption dieses Ansatzes verhindert haben. Keimfreie Mäuse werden in halbstarren oder flexiblen Isolatoren gezüchtet und gehalten, aber funktionelle Experimente erfordern die Einrichtung separater Mini-Isolatoren, wobei ein Mini-Isolator mehrere Käfige beherbergt, aber nur unter einer experimentellen Bedingung. Dieser Mini-Isolator-Ansatz erhöht den Platzbedarf und die Kosten und schränkt gleichzeitig die Anzahl der experimentellen Bedingungen, die in einem Experiment untersucht werden können, und die Anzahl der Experimente, die parallel durchgeführt werden können, stark ein. Eine vielversprechende Lösung ist die Verwendung eines individuellen, modularen Käfigsystems, das ISOcage P Bioexclusion System (hier als Isokäfigsystem bezeichnet)9,10. Das Isokäfigsystem ermöglicht die experimentelle Manipulation von keimfreien Mäusen in einzelnen, hermetisch abgedichteten Überdruck-Isolatorkäfigen, wodurch separate experimentelle Bedingungen zwischen den einzelnen Käfigen und nicht zwischen den einzelnen Mini-Isolatoren möglich sind. Mit der richtigen aseptischen Technik können Tiere bis zu 12 Wochen lang unter keimfreien Bedingungen in Isokäfigen untergebracht oder durch menschliche Stuhltransplantationen vermenschlicht werden, um sie in jedem kompatiblen experimentellen Ansatz zu verwenden (d. h. sie können unter aseptischen Bedingungen durchgeführt werden). Mehrere unabhängige Experimente können mit dem Isokäfigsystem parallel durchgeführt werden, und der Platzbedarf und die Kosten sind erheblich geringer als bei der Durchführung mehrerer Experimente über Mini-Isolatoren.
Der Zweck der Zucht keimfreier Mäuse in flexiblen Folienzüchtungsisolatoren besteht darin, den axenischen Status sorgfältig zu erhalten11. Zu den Techniken zur Überwachung des keimfreien Status gehören routinemäßige Abstriche von Körperoberflächen und Mundhöhlen von Mäusen sowie die aseptische Entnahme von Stuhlproben, die sowohl kultiviert als auch mit PCR-basierten kommerziellen Assays getestet werden. Bakterien-, Serologie- und Pilztests dieser Proben sind erforderlich, um den keimfreien Statuszu bestimmen 11. Wenn keimfreie Mäuse für den experimentellen Einsatz von Zuchtisolatoren in Isokäfige überführt werden, werden die Mäuse abgestrichen und getestet, um ihren keimfreien Status nach dem Transfer zu validieren. Isocage-Sterilitätskontrollen werden durch aseptische Entnahme von Kotproben durchgeführt, die dann zum Nachweis von bakteriellen, viralen und pilzlichen Verunreinigungen kultiviert werden. Das sorgfältige Sammeln und Aufzeichnen der Ergebnisse dieser Sterilitätskontrollen von der Geburt bis zum Ende eines Versuchsprotokolls ist notwendig, um den keimfreien Status dieser Mäuse zu validieren.
Das Isokäfigsystem besteht aus einzelnen Käfigen (Abbildung 1), Transferscheiben für den Transport aus den Zuchtisolatoren (Abbildung 1) und dem Isokäfiggestell, in dem die Käfige untergebracht sind (Abbildung 2). Jeder Isokäfig enthält einen HEPA-Filter (High Efficiency Particulate Air) auf Käfigebene, der am Zulufteinlass installiert ist, und eine Silikondichtung, die im geschlossenen Zustand luftdicht abschließt und sicherstellt, dass keine Verunreinigungen durch die Luft in den Käfig gelangen können (Abbildung 1A). Dieser Käfigdeckel kann als sterile Arbeitsfläche verwendet werden, wenn er kopfüber in einer sterilisierten Biosicherheitswerkbank platziert wird (Abbildung 1A). Ein Drahtgitter im Käfig hält die Futter- und Wasserflasche (Abbildung 1B). Die im Käfig autoklavierte Pinzette wird für alle Manipulationen verwendet, die einen Kontakt mit den inneren Käfigoberflächen erfordern. Der Käfig selbst verfügt über Kerben für einen abnehmbaren Käfigkartenhalter zur Identifizierung von Tieren an der Außenseite sowie über Lufteinlass- und -auslassdüsen, die an das Isokäfiggestell andocken (Abbildung 1C-E). Sichere Verschlussklammern und eine Laschenverriegelung am Deckel dichten den Käfig ab, wenn er bereit ist, wieder auf das Rack-System angedockt zu werden (Abbildung 1F). Die empfohlene Einstreu ist Alpha-dri, und eine autoklavierbare Anreicherungshütte wird ebenfalls empfohlen (Abbildung 1F). Transferscheiben werden verwendet, um keimfreie Mäuse aus Zuchtisolatoren in die Isokäfige zu transportieren, und enthalten einen drehbaren Fachdeckel mit einer dreieckigen Öffnung, um die Manipulation der Tiere zu ermöglichen (Abbildung 1G-H). Die Scheiben sind in den Größen klein (21,6 cm Durchmesser) und groß (28 cm Durchmesser) erhältlich, die beide eine Kapazität von acht Mäusen haben. Autoklaviertes Klebeband wird verwendet, um luftdichte Dichtungen am Umfang und an den Luftlöchern der Scheibe zu erzeugen, was vor dem Einweichen mit Sterilisationsmittel und dem Transport in einem mit Sterilisationsmittel getränkten Beutel durchgeführt wird (Abbildung 1I). Das Rack-System selbst verfügt über einen Bildschirm zur Überwachung der Luftgebläse, des HEPA-Filterstatus auf Rack-Ebene und der Notstromversorgung des Racks, die alle zu den im System enthaltenen Funktionen gehören (Abbildung 2A). Ein beiliegendes Magnehelic-Messgerät zeigt den vom Käfigsystem aufrechterhaltenen Überdruck an, und eine automatische visuelle Andockanzeige zeigt den Andockstatus der Käfige an (gelbe Lasche bedeutet, dass kein Käfig angedockt ist oder das Andocken nicht erfolgreich war) (Abbildung 2B-D). Ebenfalls notwendig für die Manipulation von Isokäfigen ist eine normzertifizierte Biosicherheitswerkbank.
Das hier vorgestellte Protokoll beschreibt die geeigneten Methoden für den erfolgreichen Transfer von keimfreien Mäusen aus Zuchtisolatoren unter aseptischen Bedingungen in die Isokäfige unter Beibehaltung des keimfreien Status, die Humanisierung von keimfreien Mäusen mit humaner Spenderkotgülle und das Sammeln von Kot von Mäusen, die in dem Isokäfig untergebracht sind, entweder zur Bestätigung des keimfreien Status oder zur Erhaltung der Lebensfähigkeit für weitere funktionelle Studien. In diesem Beispiel werden keimfreie Mäuse mit gepoolten Kotproben von menschlichen Probanden, die mit einer Immuntherapie gegen Lungenkrebs behandelt wurden, humanisiert und als Responder oder Non-Responder auf die Therapie dichotomisiert. In diesem Fall wurde der Phänotyp des Ansprechens auf die Immuntherapie durch die Humanisierung der Darmmikrobiota auf die Empfängermäuse übertragen, die dann weiter mit Tumorzellen geimpft und mit Immuntherapie behandelt werden konnten. Das Protokoll der menschlichen Stuhlaufschlämmung kann leicht an jeden menschlichen Spenderkot oder jedes präklinische Krankheitsmodell angepasst werden, das der Prüfarzt wünscht. Mit diesem Protokoll ist es möglich, jede Mikrobiota eines menschlichen Stuhlspenders in den keimfreien Wirt zu übertragen, was eine weitere Untersuchung der Rolle der Mikrobiota bei Gesundheit und Krankheit ermöglicht.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68029/68029fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Schematische Darstellung der Isokäfig- und Transferscheiben. (A) Draufsicht auf die Unterseite des Käfigdeckels, mit Beschriftungen, die die Position des internen HEPA-Filters auf Käfigebene und der Silikondichtung angeben. (B) Draufsicht auf das Innere des Käfigs mit Etiketten, die den Drahtstangendeckel, die interne Wasserflasche und den Auslauf sowie die Position im Drahtgestell zur Aufnahme des autoklavierbaren Käfigs anzeigen. (C) Vorderansicht des Käfigs mit Kerben für den Käfigkartenhalter. (D) Draufsicht auf einen vollen Käfig mit aufgesetztem Deckel, der zeigt, wie der HEPA-Filter an der Luftansaugdüse installiert ist. (E). Rückansicht des Käfigs mit Lufteinlass- und Auslassdüsen, die an das Isokäfig-Racksystem andocken. (F) Seitenansicht eines vollen Käfigs mit dem Deckel nach oben, mit Etiketten, die die sicheren Verschlussklemmen in geöffneter Position anzeigen, mit weißen Laschen an jeder Klemme, die sie verriegeln. Das Innere des Käfigs zeigt Alpha-dri-Einstreu, die am Boden geschichtet ist, und eine vorgeschlagene Anreicherungshütte, die in Einstreu platziert ist. (G) Draufsicht auf Transferdisketten mit Deckel nach oben. (H) Draufsicht auf das Innere der Transferscheibe, die den drehbaren Fachdeckel mit einer dreieckigen Öffnung zeigt, um die Manipulation von Tieren zu ermöglichen. (I) Seitenansicht der vollständig montierten Transferscheibe, die die Platzierung des autoklavierten Bandes zeigt, das während des Transfers vom Zuchtisolator in den Isokäfig einen luftdichten Verschluss erzeugt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68029/68029fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68029/68029fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Schematische Darstellung des Isokäfig-Rack-Systems. (A) Komplettes Isocage-Rack mit angedockten Käfigen und einem Etikett, das den Überwachungsbildschirm für den Status des Luftgebläses, des HEPA-Filters und der Notstrombatterie anzeigt. Auf der unteren linken Seite des Racks befindet sich der Schlitz für den HEPA-Filter auf Rack-Ebene. (B) Geschlossenes Magnehelic-Manometer, das den vom Gestell aufrechterhaltenen Überdruck anzeigt. (C) Ein angedockter Isokäfig ohne sichtbare gelbe Andockanzeige, der eine erfolgreiche Verbindung zwischen dem Gestell und den Luftdüsen zeigt. (D) Ein leerer Schlitz im Rack mit einer sichtbaren automatischen visuellen Andockanzeige, die anzeigt, dass kein Rack vorhanden ist und die Luftdüsen nicht mit einem Isokäfig verbunden sind. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68029/68029fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

<table><tbody><tr><td>1 mL BD Slip Tip Spritze steril, Einweg</td><td>Fisher Scientific</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>2,0 mL Schraubverschluss Röhrchen, ohne Rändel, mit Rand, Natur, E-Beam Steriles Röhrchen mit angebrachter Kappe</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-755-228</td><td></td></tr><tr><td>36 x 32 x 48" 3 Mil Faltened Poly Bags</td><td>Uline</td><td>S-13455</td><td></td></tr><tr><td>5 Gallonen Tank mit Exspor Chlordioxid-Sterilisationsaktivator &nbsp;</td><td>Ecolab</td><td>6301680</td><td></td></tr><tr><td>5-Gallonen-Tank mit Exspor Chlordioxid-Sterilisationsmittelbasis&nbsp;</td><td>Ecolab</td><td>6301194</td><td></td></tr><tr><td>600 mL Polypropylen-Becher</td><td>Fisher Scientific</td><td>S01914</td><td></td></tr><tr><td>ALPHA-dri Einstreu</td><td>Shepherd Spezialpapiere</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anaerobe Kammer</td><td>Coy Lab Products</td><td>Typ B</td><td></td></tr><tr><td>Biosicherheitswerkbank Klasse 2</td><td>Nuaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Certified IsoCage autoklavierbarer HEPA-Filter XT Extreme Temperature</td><td>Tecniplast</td><td>1245ISOFHXT</td><td></td></tr><tr><td>Klare Scheibe LPX IQuity Schutzbrille&nbsp;</td><td>Befestigungsmaterial</td><td>922205455</td><td></td></tr><tr><td>DuPont&nbsp; Tyvek&nbsp; Hülse - 18"</td><td>Uline</td><td>S-13893E</td><td></td></tr><tr><td>DWK Life Sciences DURAN 45 mm Aufsteckkappe aus Naturkautschuk</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-258-107</td><td>Gummikappe für 1 L autclave Flaschen</td></tr><tr><td>Dynalon Quick Mist HDPE Sprühflaschen</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-438-12B</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbran Polypropylen Messzylinder</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-007-44</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbran&nbsp; Präparierzange mit stumpfer Spitze</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-887</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterilisationsbeutel mit sofortiger Versiegelung</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-812-51</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Gerade Breite Starke Spitze Zange für allgemeine Anwendungen</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-100-107</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; bleifreies Autoklavenband</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-901-110</td><td></td></tr><tr><td>Sondennadel, wiederverwendbarer Edelstahl. Gerade. 22 Gauge Nadel, Spitzendurchmesser 1,25 mm, Länge 38 mm oder 1,5 Zoll(doz)</td><td>Braintree Scientific</td><td>N-PK 020</td><td></td></tr><tr><td>H-B Instrument Durac Timer</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-202-015</td><td></td></tr><tr><td>IsoPositive Cages und Rack (d.h. Isocages)</td><td>Tecniplast&nbsp; &nbsp;</td><td>ISO30P</td><td>30 Käfige (6 B x 5 H), einseitige</td></tr><tr><td>chemikalienbeständige Nitrilhandschuhe Größe S (7), M (8) oder L (9) 18" lang, 22 mil, Ansell</td><td>Grainger</td><td>4T426</td><td></td></tr><tr><td>Nitril-Untersuchungshandschuhe, mittelgroß, unsteril, puderfrei</td><td>MedSupply Partners</td><td>KG-1101M</td><td></td></tr><tr><td>Olive / Magenta Bajonettgas & Dampfpatronen / Partikelfilter 2Ct&nbsp;</td><td>&nbsp; 3M/Befestigungsmaterial</td><td>50051138541878</td><td></td></tr><tr><td>Polycarbonat RadDisk Mini für Mäuse 8-75 x 4</td><td>Braintree Scientific</td><td>IRD-P M</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylen Bouffant Caps - 24", Blue</td><td>Uline</td><td>S-10480BLU</td><td></td></tr><tr><td>Puritan Cary-Blair Medium, 5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-029-646</td><td></td></tr><tr><td>S, M und L Blau Silikon Dual-Mode Kopfgurt Halbmaske Atemschutzmaske&nbsp;</td><td>&nbsp; 3M/Fastenal</td><td>50051131370826</td><td></td></tr><tr><td>Sgpf Series Sterile Puderfreie Latexhandschuhe, CT International, Dicke = 6,5 mm, Länge = 30,5 cm (12), Handschuhgröße = 8,5, Handschuhfarbe = Weiß</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-999-102F</td><td></td></tr><tr><td>Rutschfester Überschuh</td><td>Uline</td><td>&nbsp; S-25639</td><td></td></tr><tr><td>OP-Kittel, Handtuch, steril, groß, 32/cs</td><td>Thomas Scientific</td><td>KIM 95111</td><td></td></tr><tr><td>Teklad Global 18% Protein extrudiertes Nagetierfutter (sterilisierbar)&nbsp;</td><td>Inotiv</td><td>2018SX</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nalgene Rechteckiger Hochleistungs-LLDPE-Tank mit Abdeckung (20 L Volumen)</td><td>Thermo Scientific</td><td>14-831-330J</td><td></td></tr><tr><td>VERIFY Dual Spezies Eigenständige biologische Indikatoren</td><td>Steris Healthcare</td><td>S3061</td><td></td></tr><tr><td>WypAll L40 1&frasl; 4-fach Scheibenwischer</td><td>Uline</td><td>S-8490</td><td></td></tr></tbody></table>

vorbereitung und durchführung eines isopositiv-käfig-experiments zur stuhltransplantation von menschen in keimfreie mäuse

Preparation and Maintenance of Bioexclusion IsoPositive Cage Experiment for Human Fecal Transplantation into Germ-Free Mice

Humane Stuhlproben, gepoolt nach ICI-Responder- und Non-Responder-Phänotyp (zuvor im Protokoll beschrieben), wurden in gemischtgeschlechtliche GF-WT-Mäuse gegeben, die in 3 Isokäfigen pro Gruppe untergebracht waren (n = 1-2 Mäuse/Käfig, n = 6 für Responder und n = 5 für Non-Responder). Die Mäuse durften sich 1 Woche nach dem Transfer akklimatisieren. Von diesen Mäusen wurden dann Kotproben entnommen (keimfreie Bedingungen). Die Mäuse wurden dann mit 1 × 107 KBE gepooltem menschlichem Kot versorgt. Der Stuhl wu...

Vorbereitung und Durchführung eines IsoPositiv-Käfig-Experiments zur Stuhltransplantation von Menschen in keimfreie Mäuse

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of ...

preparation-maintenance-bioexclusion-isopositive-cage-experiment-for

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video demonstriert die Methode zur Erzeugung einer doppelt humanisierten Knochen-BLT-Maus (Mark, Leber und Thymus) mit einem funktionierenden menschlichen Immunsystem und einem stabilen transplantierten menschenähnlichen Darmmikrobiom.

Generierung eines doppelt humanisierten BLT-Mausmodells (Knochenmark, Leber, Thymus)

Dieses Video zeigt ein Verfahren zur fäkalen Mikrobiota-Transplantation bei einer Interleukin-10-defizienten Maus mit Dickdarmentzündung. Besiedelte fäkale Mikroben im Darm setzen sekundäre Metaboliten frei, die eine entzündungshemmende Zytokinfreisetzung auslösen und Dickdarmentzündungen reduzieren.

Bewertung der Auswirkungen einer fäkalen Mikrobiota-Transplantation bei einer Interleukin-10-defizienten Maus

Es besteht ein wachsendes Interesse an der quantitativen Charakterisierung von intestinalen Lymphozyten, da zunehmend erkannt wird, dass diese Zellen eine entscheidende Rolle bei einer Vielzahl von Darm- und systemischen Erkrankungen spielen. In diesem Protokoll beschreiben wir, wie einzelne Zellpopulationen aus verschiedenen Dünndarmkompartimenten für die anschließende durchflusszytometrische Charakterisierung isoliert werden können.

Isolierung und Durchflusszytometrie Charakterisierung von murinen Dünndarms Lymphozyten

Wir beschreiben eine neuartige Methode zur Erzeugung doppelt humanisierter BLT-Mäuse, die über ein funktionelles menschliches Immunsystem und ein stabiles transplantiertes menschenähnliches Darmmikrobiom verfügen. Dieses Protokoll kann ohne keimfreie Mäuse oder gnotobiotische Einrichtungen befolgt werden.

Ein doppelt humanisiertes BLT-Mäuse-Modell mit einem stabilen humanähnlichen Gut-Mikrobiom und menschlichem Immunsystem

Das Zusammenspiel von genetischer Anfälligkeit, Schleimhautimmunität und mikroökologischem Darmmilieu ist an der Pathogenese entzündlicher Darmerkrankungen (IBD) beteiligt. In dieser Studie wandten wir die fäkale Mikrobiota-Transplantation bei IL-10-defizienten Mäusen an und untersuchten ihre Auswirkungen auf Dickdarmentzündungen und Herzfunktion.

Therapeutische Bewertung der fäkalen Mikrobiota-Transplantation in einem Interleukin-10-defizienten Mausmodell

Ziel ist es, ein Protokoll zu skizzieren, um die Mechanismen der Dysbiose bei Herz-Kreislauf-Erkrankungen zu untersuchen. In diesem Artikel wird erörtert, wie man aseptisch Stuhlproben von Mäusen sammelt und transplantiert, Darm isoliert und die "Swiss-Roll"-Methode anwendet, gefolgt von Immunfärbetechniken, um Veränderungen im Magen-Darm-Trakt zu untersuchen.

Fäkalisolierung der Maus und Mikrobiota-Transplantation

Hier beschreiben wir den Aufbau und die Betriebsabläufe, einschließlich mikrobieller Eindämmungsmaßnahmen einer Anlage zur "Wilding von Mäusen" am Beispiel von Blutproben zur Immunphänotypisierung.

Betriebs- und Biocontainment-Verfahren einer Anlage für Labormäuse mit natürlichem Mikrobiom: Immunphänotypisierungsverfahren

Dieses Protokoll beschreibt den Zusammenbau von Mini-Bioreaktor-Arrays, die für die kontinuierliche Durchflusskultur komplexer Stuhlgemeinschaften unter anaeroben Bedingungen verwendet werden sollen. Wir besprechen auch die Methoden für den Zusammenbau, die Inokulation und die Probenahme der Reaktoren für die weitere Analyse.

Bioreaktor-Assemblierung für die kontinuierliche Kultivierung komplexer Stuhlgemeinschaften

Dieses Protokoll beschreibt die notwendigen Schritte zur Besiedlung von Mäusen mit pks+ Escherichia coli unter nicht-entzündlichen Bedingungen sowie nicht-invasive Methoden zur Validierung der Kolonisierung und zur Bewertung der pks+ E. coli-Expansion im Kot.

Besiedlung mit Murine pks+ Escherichia coli unter nicht-entzündlichen Bedingungen

Lyme-Borreliose Studien erfordern oft Generation von Zecken mit dem Erreger Borrelia burgdorferi, ein Prozess, der dauert in der Regel mehrere Wochen infiziert. Hier zeigen wir eine Mikroinjektion-basierte Zecken Infektion Verfahren, das innerhalb weniger Stunden erreicht werden kann. Wir zeigen auch einer Immunfluoreszenz-Methode zur in situ-Lokalisation von B. burgdorferi in Zecken.

Methoden zur raschen Transfer und die Lokalisierung von Lyme-Borreliose Erreger innerhalb der Tick Gut

Erfahren Sie die Stuhltransplantation von Menschen in keimfreie Mäuse mittels IsoPositiv-Käfig-System für Mikrobiom-Forschung und Krebsbiologie. Diese Methode ermöglicht die Validierung kausaler Zusammenhänge.

Vorbereitung und Durchführung eines IsoPositiv-Käfig-Experiments zur Stuhltransplantation von Menschen in keimfreie Mäuse

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