Name: Eine einfache und effiziente Methode zum Testen immunmodulatorischer Wirkstoffe zur Erzeugung tolerogener dendritischer Zellen aus humanen CD14+ -Monozyten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:50:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: Erfahren Sie eine effiziente Methode zur Erzeugung tolerogener dendritischer Zellen aus humanen CD14+-Monozyten für Immuntherapie. Diese Technik ermöglicht die Identifizierung immunmodulatorischer Wirkstoffe zur Induktion regulatorischer T-Zellen.

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<ol><li>Banchereau, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunobiology+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annu Rev Immunol. 18 (1), 767-811 (2000).</li>
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<li>Møller, S. H., Wang, L., Ho, P. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+programming+in+dendritic+cells+tailors+immune+responses+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Immunoly%22%5BJournal%5D)">Metabolic programming in dendritic cells tailors immune responses and homeostasis.</a> Cell Mol Immunoly. 19 (3), 370-383 (2022).</li>
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<li>Gammon, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+the+lymph+node+environment+promotes+antigen-specific+efficacy+in+type+1+diabetes+and+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Engineering the lymph node environment promotes antigen-specific efficacy in type 1 diabetes and islet transplantation.</a> Nat Comm. 14 (1), 681(2023).</li>
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<li>Jia, S., Kim, J., Esser-Kahn, A. P., Deak, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+identification+of+novel+immunomodulatory+combinations+for+the+generation+of+tolerogenic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening identification of novel immunomodulatory combinations for the generation of tolerogenic dendritic cells.</a> Front Med. 10, 1298424(2024).</li>
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<li>Stallone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR+inhibitors+effects+on+regulatory+T+cells+and+on+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">mTOR inhibitors effects on regulatory T cells and on dendritic cells.</a> J Trans Med. 14 (1), 152(2016).</li>
<li>Dahlqvist, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulatory+effect+of+rapamycin+and+tacrolimus+on+monocyte-derived+dendritic+cells+phenotype+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">Modulatory effect of rapamycin and tacrolimus on monocyte-derived dendritic cells phenotype and function.</a> Immunobiology. 226 (1), 152031(2021).</li>
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<li>Nakayama, M., Michels, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+antigen+specificity+of+human+islet+infiltrating+T+cells+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Determining antigen specificity of human islet infiltrating T cells in type 1 diabetes.</a> Front Immunol. 10, 365(2019).</li>
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<li>Taner, T., Hackstein, H., Wang, Z., Morelli, A. E., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin-treated%2C+alloantigen-pulsed+host+dendritic+cells+induce+Ag-specific+T+cell+regulation+and+prolong+graft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transpl%22%5BJournal%5D)">Rapamycin-treated, alloantigen-pulsed host dendritic cells induce Ag-specific T cell regulation and prolong graft survival.</a> Am J Transpl. 5 (2), 228-236 (2005).</li>
<li>Baroja-Mazo, A., Revilla-Nuin, B., Ramírez, P., Pons, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppressive+potency+of+mechanistic+target+of+rapamycin+inhibitors+in+solid-organ+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Immunosuppressive potency of mechanistic target of rapamycin inhibitors in solid-organ transplantation.</a> World J Transplant. 6 (1), 183-192 (2016).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,1-10 &Mikro; L Gefilterte Pipettierspitzen</td><td>VWR</td><td>76322-158</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>1,5 mL Zentrifugenröhrchen</td><td>VWR</td><td>77508-358</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>10 mL Serologische Pipets</td><td>VWR</td><td>414004-267</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>100-1000 & Mikro; L Gefilterte Pipettenspitzen</td><td>VWR</td><td>76322-164</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>15 mL Konisches Röhrchen</td><td>VWR</td><td>77508-212</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>20-200 & Mikro; L Gefilterte Pipettenspitzen</td><td>VWR</td><td>76322-160</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>MP Biomedical</td><td>194834</td><td>T-Zellkultur</td></tr><tr><td>50 mL Konisches Röhrchen</td><td>VWR</td><td>21008-736</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>60 x 15 mm Schale, Nunclon Delta</td><td>Thermo Fischer</td><td>150326</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>96 Well Konische (V) Bodenplatte, unbehandelte Oberfläche</td><td>Thermo Fischer</td><td>277143</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>96 Well flache Bodenplatte</td><td>Thermo Fischer</td><td>161093</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>APC/Cyanin7 Anti-Human-CD272 (BTLA) Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>344518</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>Attune NxT (Roter/Blauer Laser, 7 Kanäle)</td><td>Thermo Fischer</td><td>A24863</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Thermo Fischer</td><td>15260-037</td><td>Allgemeine Zelle </td></tr><tr><td>Kultur CD14 Monoklonaler Antikörper (61D3), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-0149-42</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>CD1c Monoklonaler Antikörper (L161), PE-Cyanin7</td><td>Thermo Fischer</td><td>25-0015-42</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>CD209 (DC-SIGN) Monoklonaler Antikörper (eB-h209), PerCP-Cyanin5.5</td><td>Thermo Fischer</td><td>45-2099-42</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>CD25 Monoklonaler Antikörper (CD25-4E3), APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0257-42</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoklonaler Antikörper (MIH1), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-5983-42</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>CD4 Monoklonaler Antikörper (RPA-T4), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>53-0049-42</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>CD40 Monoklonaler Antikörper (5C3), APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0409-42</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>CD40 Monoklonaler Antikörper (5C3), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fischer</td><td>47-0409-42</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>CD69 Monoklonaler Antikörper (FN50), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>MA1-10276</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>CD86 Monoklonaler Antikörper (BU63), FITC</td><td>Thermo Fischer</td><td>MHCD8601</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>CD8a Monoklonaler Antikörper (RPA-T8), PE-Cyanin7</td><td>Thermo Fischer</td><td>25-0088-42</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>Konischer Boden (V-Well) 96-Well-Platte</td><td>Thermo Fischer</td><td>2605</td><td></td></tr><tr><td>Kryofläschchen für Durchflusszytometrie, 2 mL</td><td>Thermo Fischer</td><td>430488</td><td>T-Zellkultur</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid (DMSO), Sequenzierqualität</td><td>Thermo Fischer</td><td>20688</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Fischer</td><td>14200166</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>EasySep Humanes Monozyten-Isolationskit</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>19359</td><td>Zelltrennung</td></tr><tr><td>EasySep Humanes T-Zell-Isolationskit</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>17951</td><td>Zelltrennung</td></tr><tr><td>EasySep Magnet</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>18000</td><td>Zelltrennung</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Thermo Fischer</td><td>AIM9260G</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>Falcon Polystyrolröhrchen mit rundem Boden, 5 ml</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>38025</td><td>Zelltrennung</td></tr><tr><td>Fc-Rezeptor-Bindungsinhibitor Polyklonaler Antikörper</td><td>Thermo Fischer</td><td>14-9161-73</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Thermo Fischer</td><td>A5670701</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>Fixierbarer Viabilitätsfarbstoff eFluor 780</td><td>Thermo Fischer</td><td>65-0865-18</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>Foxp3 / Transkriptionsfaktor-Färbepuffer-Set</td><td>Thermo Fischer</td><td>00-5523-00</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>FOXP3 Monoklonaler Antikörper (PCH101), PE-Cyanin5.5</td><td>Thermo Fischer</td><td>35-4776-42</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Fischer</td><td>14170-112</td><td>Allgemeine</td></tr><tr><td>Zellkultur Hitze inaktiviertes fötales Rinderserum</td><td>Thermo Fischer</td><td>A5670801</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fischer</td><td>15630106</td><td>moDC Zelle Kultur</td></tr><tr><td>HLA-DR Monoklonaler Antikörper (L243), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>A51009</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>Humaner CD3/CD28/CD2 T-Zell-Aktivator</td><td>StemCell Technologies</td><td>10970</td><td>T-Zellkultur</td></tr><tr><td>Humanes GM-CSF Rekombinantes Protein</td><td>Thermo Fischer</td><td>300-03</td><td>moDC Zellkultur</td></tr><tr><td>Humanes IL-10 ELISA-Kit, Hochempfindlichkeit</td><td>Thermo Fischer</td><td>BMS215-2HS</td><td>Elisa</td></tr><tr><td>Humanes IL-4, tierversuchsfreies rekombinantes Protein</td><td>Thermo Fischer</td><td>AF-200-04</td><td>moDC Zellkultur</td></tr><tr><td>Humanes PBMC (frisch isoliert)</td><td>UPenn HIC</td><td>N/A</td><td>Zellen</td></tr><tr><td>Humanes TNF alpha ELISA Kit</td><td>Thermo Fischer</td><td>BMS223-4</td><td>ELISA-Lichtmikroskop</td></tr><tr><td>(DMi1)</td><td>Lucia</td><td>391240</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>Lipopolysaccharid (LPS)</td><td>Invivogen</td><td>tlrl-eblps</td><td>moDC Zellkultur</td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Fixierbares Nah-IR-Färbekit für tote Zellen</td><td>Thermo Fischer</td><td>L34975</td><td>Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>MEM Lösung für nicht-essentielle Aminosäuren (100x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>11140050</td><td>T-Zellkultur</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (100x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>15140122</td><td>Allgemeine Zellkultur-Pipettensteuerung</td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>77575-370</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr><tr><td>Rapamycin, 98+%</td><td>Thermo Fischer</td><td>J62473. MF</td><td>moDC Zellkultur</td></tr><tr><td>RPMI 1640 mit Glutamax</td><td>Thermo Fischer</td><td>61870-036</td><td>Allgemeiner</td></tr><tr><td>Zellkultur-Trennpuffer</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>20144</td><td>Zelltrennung</td></tr><tr><td>T-Zell-Stimulationscocktail (500x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>00-4970-93</td><td>T-Zellkultur</td></tr><tr><td>UltraComp eBead Plus Kompensationsperlen</td><td>Thermo Fischer</td><td>01-3333-41</td><td>Flow Zytometrie</td></tr><tr><td>Variables Pipettenset</td><td>Fischer Scientific</td><td>05-403-152</td><td>Allgemeine Zellkultur</td></tr></tbody></table>

eine einfache und effiziente methode zum testen immunmodulatorischer wirkstoffe zur erzeugung tolerogener dendritischer zellen aus humanen cd14+ -monozyten

A Simple and Efficient Method for Testing Immunomodulatory Agents for Generation of Tolerogenic Dendritic Cells from Human CD14+ Monocytes

Wir haben ein Protokoll für humane PBMCs beschrieben, isolieren sowohl CD3+ T-Zellen als auch CD14+ Monozyten mit kommerziell erhältlichen magnetischen Trennkits, differenzieren Monozyten in CD14-, HLA-DR+-, CD141+, CD1c+ moDCs mit GM-CSF und IL-4, behandeln sie für 24 h und co-kultivieren mit autologen T-Zellen mit Anti-CD3/CD28-Stimulation für 72 h. Ein experimentelles Schema ist in Abbildung 1 dargestellt.
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Eine einfache und effiziente Methode zum Testen immunmodulatorischer Wirkstoffe zur Erzeugung tolerogener dendritischer Zellen aus humanen CD14+ -Monozyten

Tolerogenic dendritic cells (tolDCs) are a subset of dendritic cells (DCs) that are known to influence na&#239;ve T cells toward a regulatory T cell ...

a-simple-efficient-method-for-testing-immunomodulatory-agents-for

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Antigen-Präsentation in sekundären lymphatischen Organen durch dendritische Zellen ist entscheidend für die Einleitung des T-Zell-vermittelten adaptive Immunantwort. Hier zeigen wir die Kultur von Knochenmark abgeleiteten dendritischen Zellen, Aktivierung und Etikettierung für die 2-Photonen-Imaging.

Generierung von Knochenmark murinen dendritischen Zellen für den Einsatz in 2-Photonen-Imaging

Dieses Video zeigt die Erzeugung von unreifen, reifen und tolerogenen dendritischen Zellen (DCs) aus menschlichen Monozyten. Die Inkubation von Monozyten mit Wachstumsfaktoren und Zytokinen führt zur Produktion von unreifen DCs. Als Reaktion auf immunregulatorische Moleküle differenzieren sich unreife DCs in tolerogene und reife DCs.

Erzeugung unreifer, reifer und tolerogener dendritischer Zellen aus Monozyten

Dieses Video zeigt eine Methode zur Umwandlung von dendritischen Zellen (DCs) in tolerogene DCs (TolDCs) mit einem immunmodulatorischen pharmakologischen Wirkstoff. Diese Umwandlung wird durch die Bewertung der TolDC-Funktion durch ihre immunsuppressive Wirkung auf CD4+ T-Zellen bestätigt.

Wirkung eines immunmodulatorischen pharmakologischen Wirkstoffs auf die Interaktion zwischen dendritischen Zellen und CD4+ T-Zellen

Unreife dendritische Zellen können selektiv in tolerogene oder reife dendritische Zellen differenziert werden, um das Gleichgewicht zwischen Immunität und Toleranz zu regulieren. Diese Arbeit stellt eine Möglichkeit vor, aus unreifen Monozyten-abgeleiteten dendritischen Zellen (moDCs) in vitro tolerogene und reife moDCs zu generieren, die sich in metabolischen Phänotypen unterscheiden.

Die Erzeugung von Unreife, Ältere und Tolerogene Dendritischen Zellen mit unterschiedlichen Metabolic Phänotypen

Diese Studie vergleicht zwei verschiedene Methoden der Isolierung humaner Monozyten zur Gewinnung von in vitro dendritischen Zellen (DCs). Monozyten werden durch Adhärenz selektiert oder durch magnetische Trennung negativ angereichert. Die Monozytenausbeute und -viabilität sowie die Viabilität, Proliferation und Expression von CD11c/CD14-Oberflächenmarkern werden zwischen beiden Methoden verglichen.

Charakterisierung von humanen Monozyten-abgeleiteten dendritischen Zellen durch Imaging Durchflusszytometrie: Ein Vergleich zwischen zwei Monozyt Isolation Protokolle

Hier zeigen wir, wie Monozyten durch magnetische Kügelchentrennung aus mononukleären Zellen des peripheren Blutes nach Dichtegradientenzentrifugation von humanem antikoaguliertem Blut isoliert werden. Nach einer 5-tägigen Inkubation werden die menschlichen Monozyten in unreife dendritische Zellen differenziert und sind bereit für experimentelle Verfahren in einer nicht-klinischen Umgebung.

Herstellung von menschlichen Monozyten abgeleiteten Dendritischen Zellen aus Vollblut

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zu entwickeln und tolerogene dendritischen Zellen (TolDCs) zu charakterisieren und deren immuntherapeutischen nutzen zu bewerten.

Entwicklung und Charakterisierung von dendritischen Zellen murinen Tolerogene

Die Tranmmunisierung (TI) Gerät oder Platte und verwandte Protokolle wurden entwickelt, um die wichtigsten Merkmale der extrakorporalen Photochemotherapie (ECP) zu replizieren, in einem experimentellen Umfeld, die die Produktion von physiologisch aktivierten, tausenfähigen dendritischen Zellen (DCs) für die Krebs-Immuntherapie.

Neuartiges Protokoll zur Generierung physiologischer immunogener Dendritischer Zellen

Hier stellen wir ein Protokoll zur In-vivo-Augmentation der Darmhoming-regulatorischen T-Zell-Induktion vor. In diesem Protokoll werden dendritische Zellen entwickelt, um lokal hohe Konzentrationen des aktiven Vitamin D (1,25-Dihydroxyvitamin D oder 1,25[OH]2D) und des aktiven VitaminS A (Retinoinsäure oder RA) de novo zu produzieren.

In Vivo Augmentation der Gut-Homing Regulatory T Cell Induction

Die Methodik beschreibt die Generierung von bovinen Monozyten-abgeleiteten dendritischen Zellen (MoDCs) und deren Anwendung für die In-vitro-Evaluierung von Antigenkandidaten während der Entwicklung potenzieller veterinärmedizinischer Impfstoffe bei Rindern.

Bestimmung der Immunogenität von Impfstoffen anhand von dendritischen Zellen aus Rindermonozyten

Ein einzigartiges, umfassendes Protokoll zur Generierung von de-sialylierten humanen monozyten-abgeleiteten dendritischen Zellen (mo-DCs) aus isolierten mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) unter Verwendung einer Sialidase-Behandlung wird vorgestellt. Des Weiteren werden Methoden zur Beurteilung der phänotypischen und funktionellen Charakterisierung von mo-DCs beschrieben und evaluiert, wie die Behandlung mit Sialidase das Reifungsniveau von mo-DCs verbessert.

Generierung von Monozyten-abgeleiteten dendritischen Zellen mit unterschiedlichen sialylierten Phänotypen

Erfahren Sie eine effiziente Methode zur Erzeugung tolerogener dendritischer Zellen aus humanen CD14+-Monozyten für Immuntherapie. Diese Technik ermöglicht die Identifizierung immunmodulatorischer Wirkstoffe zur Induktion regulatorischer T-Zellen.

Eine einfache und effiziente Methode zum Testen immunmodulatorischer Wirkstoffe zur Erzeugung tolerogener dendritischer Zellen aus humanen CD14+ -Monozyten (Video) | JoVE Journal

Eine einfache und effiziente Methode zum Testen immunmodulatorischer Wirkstoffe zur Erzeugung tolerogener dendritischer Zellen aus humanen CD14⁺ -Monozyten

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