Name: Hochauflösende Bildgebung von C. elegans in allen Larvenstadien (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Lernen Sie eine mikrofluidische Methode zur hochauflösenden Zeitrafferbildgebung von C. elegans über alle Larvenstadien. Dieses Protokoll ermöglicht die Beobachtung dynamischer Entwicklungsprozesse in vivo bei erhaltener Lebensfähigkeit.

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<li>Spiri, S., Berger, S., Mereu, L., DeMello, A., Hajnal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+EGFR+signaling+in+the+anchor+cell+ensures+precise+inter-organ+connection+during+Caenorhabditis+elegans+vulval+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Reciprocal EGFR signaling in the anchor cell ensures precise inter-organ connection during Caenorhabditis elegans vulval morphogenesis.</a> Development. 149 (1), dev199900(2022).</li>
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<li>Keil, W., Kutscher, L. M., Shaham, S., Siggia, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+high-resolution+imaging+of+developing+C.+elegans+larvae+with+microfluidics%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Long-term high-resolution imaging of developing C. elegans larvae with microfluidics.</a> Dev Cell. 40 (2), 202-214 (2017).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>3/2 Magnetventil&nbsp;</td><td>Distrelec</td><td>154-22-898 und 154-22-899</td><td>Alternativ zu oben. Magnetventil, das den Druckregler mit dem On-Chip-Ventil verbindet.</td></tr><tr><td>Arduino</td><td>Distrelec</td><td>301-01-956</td><td>Optionaler Mikrocontroller je nach gewähltem Controller und Schnittstelle.</td></tr><tr><td>Bacto-Trypton</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>211705</td><td>für die Herstellung von L-Brühe.</td></tr><tr><td>Bacto-Hefe</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>212750</td><td>Für die Herstellung von L-Brühe.</td></tr><tr><td>Stumpfe Nadel 23G</td><td>Gonano Dosiertechnik</td><td>GGA723050&nbsp;</td><td>Stumpfe Nadel, die den 1/16"-Schlauch mit einer Spritze verbindet.</td></tr><tr><td>Stumpfe Nadel 30G</td><td>Gonano Dosiertechnik</td><td>IG-TE730050</td><td>Stumpfe Nadel, die den 1/32" Schlauch mit einer Spritze verbindet.</td></tr><tr><td>C. elegans Construct 1</td><td>NA</td><td>NA</td><td>AH5786 LGI: hmr-1(cp21[hmr-1::gfp + LoxP]) Marston, D.J. et al. MRCK-1 treibt die apikale Verengung in C. elegans voran, indem es Entwicklungsmuster mit der Krafterzeugung verbindet. Curr. Biol. 26 (16), 2079-2089. 2016.</td></tr><tr><td>C. elegans Construct 2</td><td>NA</td><td>NA</td><td>AH1187 LGII: arIs92[egl-17::cfp] Yoo, A.S., Bais, C., Greenwald, I. Crosstalk zwischen den EGFR- und LIN-12/Notch-Signalwegen in der Vulvaentwicklung von C. elegans. Wissenschaft. 303 (5658), 663-666. 2004.</td></tr><tr><td>C. elegans Construct 3</td><td>NA</td><td>NA</td><td>AH5786 LGV: qyIs50[Pcdh-3>mCherry::moeABD, unc-119(+)] Ziel, J.W., Hagedorn, E.J., Audhya, A., Sherwood, D.R. UNC-6 (netrin) orientiert die invasive Membran der Ankerzelle in C. elegans. Nat. Cell Biol., 11 (2), 183-189. 2009.</td></tr><tr><td>C. elegans Konstrukt 4</td><td>NA</td><td>NA</td><td>ML2615 LGX: dlg-1(mc103[dlg-1::gfp]) Vuong-Brender, T.T.K., Suman, S.K., Labouesse, M. Die apikale EZM bewahrt die embryonale Integrität und verteilt die mechanische Belastung während der Morphogenese. Entwicklung. 144 (23), 4336-4349. 2017.Cable</td></tr> <tr><td></td><td>Distrelec</td><td>143-46-644</td><td>Wird benötigt, wenn der Magnet von distrelec ausgewählt wird. Kabel, das den Magneten mit dem MOSFET verbindet.</td></tr><tr><td>Chlortrimethylsilan&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>386529-25ML</td><td>Silan für die Wafer-Passivierung.</td></tr><tr><td>Cholesterin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8667</td><td>für&nbsp; S-Basale Produktion.</td></tr><tr><td>Flyback-Diode</td><td>Distrelec</td><td>110-52-628</td><td>Flyback-Diode zum Schutz des Mikrocontrollers.</td></tr><tr><td>Stahlhohlbolzen</td><td>Gonano Dosiertechnik</td><td>GGA7R23050&nbsp;</td><td>23G hohler Stahlstift, der den 1/16"-Schlauch mit dem Gerät verbindet.</td></tr><tr><td>L Bouillon</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Im Haus nach Standardrezeptur zubereitet. 10 g Bacto-Trypton, 5 g Bacto-Hefe, 5 g NaCl, H2O auf 1 Liter, pH bis 7,0 mit 1 M NaOH</td></tr><tr><td>Langzeit-Bildgebungsgerät L1</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Langzeit-Bildgebungsgerät für L1 bis frühe/mittlere L2-Larven. Im eigenen Haus gefertigt, auf Anfrage erhältlich. Auch als Medienaustauschvariante erhältlich.</td></tr><tr><td>Langzeitbildgebungsgerät L1-4</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Langzeitbildgebungsgerät für Larven der mittleren L1 bis mittleren L4. Im eigenen Haus gefertigt, auf Anfrage erhältlich. Auch als Medienaustauschvariante erhältlich.</td></tr><tr><td>Langzeit-Bildgebungsgerät L2-A</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Langzeit-Bildgebungsgerät für das mittlere L2- bis zum Erwachsenenalter (Eversion). Im eigenen Haus gefertigt, auf Anfrage erhältlich. Auch als Medienaustauschvariante erhältlich.</td></tr><tr><td>Langzeit-Bildgebungsgerät L3-A</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Langzeit-Bildgebungsgerät für das mittlere L3- bis zum Erwachsenenalter (Eversion). Im eigenen Haus gefertigt, auf Anfrage erhältlich. Auch als Medienaustauschvariante erhältlich.</td></tr><tr><td>Langzeit-Bildgebungsgerät L4-A</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Langzeit-Bildgebungsgerät für das mittlere L4- bis zum Erwachsenenalter (Eversion). Im eigenen Haus gefertigt, auf Anfrage erhältlich. Auch als Medienaustauschvariante erhältlich.</td></tr><tr><td>M9 Buffer</td><td>NA</td><td></td><td>NA Im Haus nach Standardrezeptur zubereitet.</td></tr><tr><td>MOSFET</td><td>Distrelec</td><td>303-41-391</td><td>Metall-Oxid-Halbleiter-Feldeffekttransistor, der zum Schalten der für den Magneten erforderlichen 24VDC verwendet wird.</td></tr><tr><td>NGM-Platten</td><td>NA</td><td></td><td>NA Im Haus nach Standardrezept zubereitet.</td></tr><tr><td>Nylon Luer-Fitting</td><td>Fisher Scientific</td><td>11776048</td><td>Adapter von OD 6mm Schlauch auf 23G stumpfe Nadel.</td></tr><tr><td>Optiprep</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D1556</td><td>Flüssigkeit mit passender Dichte.</td></tr><tr><td>PDMS</td><td>Ameba</td><td>Elastosil RT601A/B</td><td>PDMS Elastomer Bausatz.</td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2443</td><td>Nichtionisches Tensid.</td></tr><tr><td>Kaliumdihydrogenphosphat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1.37039</td><td>Für&nbsp; S-Basale Produktion.</td></tr><tr><td>Kaliumhydrogenphosphat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1.05099</td><td>Für&nbsp; S-Basale Produktion.</td></tr><tr><td>Stromversorgung 24VDC</td><td>Distrelec</td><td>301-63-304</td><td>24VDC Netzteil. Wählen Sie ein Netzteil aus, das für den ausgewählten Magneten geeignet ist.</td></tr><tr><td>Präzisions-Druckregler</td><td>Distrelec</td><td>154-23-578</td><td>Alternativ zu oben. Druckregler.</td></tr><tr><td>Manometer G1/8</td><td>Distrelec</td><td>154-23-643</td><td>Manometer wird an den Druckregler angeschlossen.</td></tr><tr><td>PU-Schlauch AD 6mm</td><td>Distrelec</td><td>154-23-866</td><td>Schlauch zur Verbindung von Druckquelle und Regler sowie Regler und Magnetventil.</td></tr><tr><td>Steckverschraubung G1/8 auf 6mm</td><td>Distrelec</td><td>301-69-330</td><td>Alternativ zu oben. 2x Steckverschraubung wird am Druckregler befestigt und an den 6mm Schlauch angeschlossen.</td></tr><tr><td>Steckverschraubung M5 auf 6 mm</td><td>Distrelec</td><td>301-69-459</td><td>2x Steckverschraubung wird an den Magneten und den 6mm Schlauch befestigt.</td></tr><tr><td>S-Basalpuffer</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Im Haus nach Standardrezeptur hergestellt: 5,85 g NaCl, 1 g K2HPO4, 6 g KH2PO4, 1 ml Cholesterin (5 mg/ml in Ethanol), H2O bis 1 Liter. Durch Autoklavieren sterilisieren.</td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9625</td><td>Für die Herstellung von L-Bouillon und S-Basal.</td></tr><tr><td>Natriumhydroxid (5M)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>567530</td><td>Natriumhydroxid zum Bleichen von C. elegans (Lösung in einer Konzentration von 5M herstellen)</td></tr><tr><td>Natriumhypochlorit (5%)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1.05614</td><td>Natriumhypochlorit beim Bleichen von C. elegans (Lösung in einer Konzentration von 5% herstellen)</td></tr><tr><td>Sieb 10 & micro; m</td><td>pluriSelect</td><td>43-10010-40</td><td>Alternative für die Zubereitung von Lebensmitteln durch Bakterien, insbesondere wenn kleinere Geräte verwendet werden.</td></tr><tr><td>Sieb 5 & Mikro; m</td><td>pluriSelect</td><td>43-10005-40</td><td>Sieb zum Filtern von L1-Larven nach nächtlichem Hunger und von Bakterien nach abgeschlossener Lebensmittelzubereitung.</td></tr><tr><td>SU-8</td><td>Gersteltec</td><td>GM1050</td><td>SU-8 für Höhen von 1-10 &μm.</td></tr><tr><td>SU-8</td><td>Gersteltec</td><td>GM1060</td><td>SU-8 für Höhen von 5-30 μm.</td></tr><tr><td>SU-9</td><td>Gersteltec</td><td>GM1070</td><td>SU-8 für Höhen von 15-200 &μm.</td></tr><tr><td>Spritze 1</td><td>mL Fisher Scientific</td><td>11338763</td><td>1 mL Spritze. Wenn Sie einen anderen Typ verwenden, stellen Sie sicher, dass der Spritzenkörper und der Kolben steif sind, damit sie von der Spritzenpumpe nicht verformt werden.</td></tr><tr><td>Spritzenpumpe</td><td>WPI</td><td>Al1000-220</td><td>Spritzenpumpe (https://www.wpiinc.com/var-2300-aladdin-single-syringe-pump.html).</td></tr><tr><td>Röhrchen 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-809-220</td><td>Röhrchen für die Wurmbleiche und Bakterienvorbereitung.</td></tr><tr><td>Röhrchen 2 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1186931</td><td>Röhrchen zur Vorbereitung von Würmern und Bakterien.</td></tr><tr><td>Röhrchen 50 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-465-232</td><td>Röhrchen für die Vorbereitung und das Wachstum von Bakterien.</td></tr><tr><td>Pinzette SMD</td><td>Br&uuml; tsch R&uuml; egg Werkzeuge</td><td>448980</td><td>Pinzette, mit der der 1/32"-Schlauch in das Gerät gesteckt wird.</td></tr><tr><td>Tygon-Schlauch 1/16"</td> <td>Fisher Scientific</td><td>642002</td><td>Flexibler Schlauch mit 1/16" Außendurchmesser, der die meisten Komponenten mit dem Gerät verbindet.</td></tr><tr><td>Tygon-Schlauch 1/32"</td> <td>Fisher Scientific</td><td>641900</td><td>Flexibler Schlauch mit 1/32" Außendurchmesser, der die Bakterienversorgung mit dem Gerät verbindet.</td></tr><tr><td>UV KUB-3</td><td>Kloe NA</td><td></td><td>Mask Aligner und UV-Belichtungssystem.</td></tr><tr><td>Wafer</td><td>Siegert Wafer</td><td>4P0/>1/525&plusmn; 25/SSP/TTV< 10</td><td>Silizium-Wafer.</td></tr><tr><td>Abfallbehälter</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Hergestellt im Haus mit einem 2-ml-Röhrchen oder einem Kryo-Fläschchen und hohlen Stahlstiften.</td></tr></tbody></table>

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Zeitraffer-Mikroskopie der frühen Embryogenese in Caenorhabditis elegans

Eine einfache Mikrofluidikvorrichtung wurde entwickelt, um Anästhetikum frei...

Einfache mikrofluidischen Systemen für<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging der<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; Und Zebrafisch

Dieses Protokoll beschreibt, wie Bild teilenden Zellen innerhalb eines Gewebes in Caenorhabditis elegans Embryonen. Während mehrere Protokolle beschreiben, wie Bild der Zellteilung im frühen Embryo, beschreibt dieses Protokoll, wie man Bild der Zellteilung in einem Entwicklungs Gewebe während der Embryogenese Mitte spät.

Visualisierung Neuroblast Cytokinesis Während<em&gt; C. elegans</em&gt; Embryogenese

Die Abbildung von Verhalten und neuronaler Aktivität über lange Zeitskalen ohne Immobilisierung des Tieres ist eine Voraussetzung, um Verhalten zu verstehen. Die mikrofluidische Kammerbildgebung (AMI) von Agarose kann verwendet werden, um die neuronale Aktivität und das Verhalten für alle Lebensstadien von Caenorhabditis elegans abzubilden.

Agarose Mikrokammern für Langzeit Calcium Imaging von<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Die transparente C. Elegans Darm kann als eine"in-Vivo Gewebe Kammer" für das Studium Apicobasal Membran und Lumen Biogenese einzellige und subzellulärer Ebene bei mehrzelligen Tubulogenesis dienen. Dieses Protokoll beschreibt die Standardbeschriftung kombinieren, Verlust der Funktion genetische/RNAi und mikroskopische Ansätze, diese Prozesse auf molekularer Ebene zu zergliedern.

C. Elegans Darm als ein Modell für die interzelluläre Lumen Morphogenese und In Vivo polarisiert Membrane Biogenesis Ebene der einzelligen: Kennzeichnung durch Antikörper Färbung, RNAi Verlustfunktion Analyse und Bildgebung

Hier stellen wir einen kombinatorischen Ansatz vor, bei dem hochauflösende Mikroskopie, Rechenwerkzeuge und Einzellen-Beschriftungen in lebenden C. eleganischen Embryonen verwendet werden, um die Einzelzellendynamik während der Neuroentwicklung zu verstehen.

Isotrope Licht-Sheet-Mikroskopie und automatisierte Zelllineage-Analysen zu Katalog-Caenorhabditis elegans Embryogenese mit subzellulärer Auflösung

Diese Arbeit beschreibt ein semi-high-throughput-Protokoll, das eine gleichzeitige 3D-Zeitraffer-Bildgebung der Embryogenese in 80–100 C. elegans Embryonen in einem einzigen Nachtlauf ermöglicht. Darüber hinaus sind Bildverarbeitungs- und Visualisierungstools enthalten, um die Datenanalyse zu optimieren. Die Kombination dieser Methoden mit kundenspezifischen Reporterstämmen ermöglicht eine detaillierte Überwachung der Embryogenese.

Ein Instrument zur Analyse der C. elegans Embryonal development

Das Protokoll beschreibt ein einfaches mikrofluidisches Chipdesign und eine Mikrofabrikationsmethodik, die verwendet wird, um C. elegans in Gegenwart einer kontinuierlichen Nahrungszufuhr für bis zu 36 h zu züchten. Das Wachstums- und Bildgebungsgerät ermöglicht auch eine intermittierende langfristige hochauflösende Bildgebung von zellulären und subzellulären Prozessen während der Entwicklung für mehrere Tage.

Ein einfacher mikrofluidischer Chip für Langzeitwachstum und Bildgebung von Caenorhabditis elegans

Die hochauflösende Mikroskopie kann einen detaillierten Einblick in die Organisation von Komponenten innerhalb des synaptonemalen Komplexes bei der Meiose geben. Hier demonstrieren wir ein Protokoll zur Auflösung einzelner Proteine des Synaptonemalkomplexes Caenorhabditis elegans .

Super-Resolution-Mikroskopie des synaptonemalen Komplexes in der Keimbahn von Caenorhabditis elegans

Lernen Sie eine mikrofluidische Methode zur hochauflösenden Zeitrafferbildgebung von C. elegans über alle Larvenstadien. Dieses Protokoll ermöglicht die Beobachtung dynamischer Entwicklungsprozesse in vivo bei erhaltener Lebensfähigkeit.

Hochauflösende Bildgebung von C. elegans in allen Larvenstadien

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