Name: Arbeitsablauf mit einem kryogenen Koinzidenz-Fluoreszenz-, Elektronen- und Ionenstrahlmikroskop zur gezielten Fräsung von Zellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Erfahren Sie, wie kryogene Lamellen mit integrierter Fluoreszenz- und Ionenstrahlmikroskopie präzise hergestellt werden. Diese Methode ermöglicht die gezielte Analyse zellulärer Strukturen durch Kryo-Elektronentomographie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Komeili, A., Li, Z., Newman, D. K., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetosomes+are+cell+membrane+invaginations+organized+by+the+actin-like+protein+MamK%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Magnetosomes are cell membrane invaginations organized by the actin-like protein MamK.</a> Science. 311 (5758), 242-245 (2006).</li>
<li>Bykov, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+COPI+coat+determined+within+the+cell%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">The structure of the COPI coat determined within the cell.</a> eLife. 6, e32493(2017).</li>
<li>Mahamid, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+molecular+sociology+at+the+HeLa+cell+nuclear+periphery%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Visualizing the molecular sociology at the HeLa cell nuclear periphery.</a> Science. 351 (6276), 969-972 (2016).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+translation+dynamics+at+atomic+detail+inside+a+bacterial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Visualizing translation dynamics at atomic detail inside a bacterial cell.</a> Nature. 610 (7930), 205-211 (2022).</li>
<li>Hampton, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlated+fluorescence+microscopy+and+cryo-electron+tomography+of+virus-infected+or+transfected+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Correlated fluorescence microscopy and cryo-electron tomography of virus-infected or transfected mammalian cells.</a> Nat Protoc. 12 (1), 150-167 (2017).</li>
<li>Oikonomou, C. M., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+electron+cryotomography%3A+Toward+structural+biology+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biochem%22%5BJournal%5D)">Cellular electron cryotomography: Toward structural biology in situ.</a> Annu Rev Biochem. 86 (1), 873-896 (2017).</li>
<li>Grimm, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+tomography+of+ice-embedded+prokaryotic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Electron tomography of ice-embedded prokaryotic cells.</a> Biophys J. 74 (2), 1031-1042 (1998).</li>
<li>Medalia, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+architecture+in+eukaryotic+cells+visualized+by+cryoelectron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Macromolecular architecture in eukaryotic cells visualized by cryoelectron tomography.</a> Science. 298 (5596), 1209-1213 (2002).</li>
<li>Tamborrini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+native+myosin+filament+in+the+relaxed+cardiac+sarcomere%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structure of the native myosin filament in the relaxed cardiac sarcomere.</a> Nature. 623 (7988), 863-871 (2023).</li>
<li>Kaplan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bdellovibrio+predation+cycle+characterized+at+nanometre-scale+resolution+with+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bdellovibrio predation cycle characterized at nanometre-scale resolution with cryo-electron tomography.</a> Nat Microbiol. 8 (7), 1267-1279 (2023).</li>
<li>Schur, F. K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+atomic+model+of+HIV-1+capsid-SP1+reveals+structures+regulating+assembly+and+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An atomic model of HIV-1 capsid-SP1 reveals structures regulating assembly and maturation.</a> Science. 353 (6298), 506-508 (2016).</li>
<li>Arnold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-specific+cryo-focused+ion+beam+sample+preparation+guided+by+3D+correlative+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Site-specific cryo-focused ion beam sample preparation guided by 3D correlative microscopy.</a> Biophys J. 110 (4), 860-869 (2016).</li>
<li>Lam, V., Villa, E. Practical approaches for cryo-FIB milling and applications for cellular cryo-electron tomography. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLam%2C+V+%22cryoEM%3A+Methods+and+Protocols%22">cryoEM: Methods and Protocols</a>. , Springer. 49-82 (2020).</li>
<li>Rigort, A., Plitzko, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-focused-ion-beam+applications+in+structural+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Cryo-focused-ion-beam applications in structural biology.</a> Arch Biochem Biophys. 581, 122-130 (2015).</li>
<li>Noble, A. J., de Marco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-focused+ion+beam+for+in+situ+structural+biology%3A+State+of+the+art%2C+challenges%2C+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Cryo-focused ion beam for in situ structural biology: State of the art, challenges, and perspectives.</a> Curr Opin Struct Biol. 87, 102864(2024).</li>
<li>Rigort, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focused+ion+beam+micromachining+of+eukaryotic+cells+for+cryoelectron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Focused ion beam micromachining of eukaryotic cells for cryoelectron tomography.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (12), 4449-4454 (2012).</li>
<li>Iancu, C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+cryotomography+sample+preparation+using+the+Vitrobot%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Electron cryotomography sample preparation using the Vitrobot.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2813-2819 (2006).</li>
<li>Dobro, M. J., Melanson, L. A., Jensen, G. J., McDowall, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plunge+freezing+for+electron+cryomicroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Plunge freezing for electron cryomicroscopy.</a> Methods Enzymol. 481, 63-82 (2010).</li>
<li>Chang, Y. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlated+cryogenic+photoactivated+localization+microscopy+and+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Correlated cryogenic photoactivated localization microscopy and cryo-electron tomography.</a> Nat Methods. 11 (7), 737-739 (2014).</li>
<li>Wu, G. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-scale+3D+cryo-correlative+microscopy+for+vitrified+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Structure%22%5BJournal%5D)">Multi-scale 3D cryo-correlative microscopy for vitrified cells.</a> Structure. 28 (11), 1231-1237.e3 (2020).</li>
<li>Lin, C., Zhang, L., Zhang, Z., Jiang, Y., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locating+cellular+contents+during+cryo-FIB+milling+using+cellular+secondary-electron+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Locating cellular contents during cryo-FIB milling using cellular secondary-electron imaging.</a> J Struct Biol. 215 (3), 108005(2023).</li>
<li>Wagner, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparing+samples+from+whole+cells+using+focused-ion-beam+milling+for+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparing samples from whole cells using focused-ion-beam milling for cryo-electron tomography.</a> Nat Protoc. 15 (6), 2041-2070 (2020).</li>
<li>Carter, S. D., Mamede, J. I., Hope, T. J., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlated+cryogenic+fluorescence+microscopy+and+electron+cryo-tomography+shows+that+exogenous+TRIM5%CE%B1+can+form+hexagonal+lattices+or+autophagy+aggregates+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Correlated cryogenic fluorescence microscopy and electron cryo-tomography shows that exogenous TRIM5α can form hexagonal lattices or autophagy aggregates in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (47), 29702-29711 (2020).</li>
<li>Guo, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+structure+of+neuronal+C9orf72+poly-GA+aggregates+reveals+proteasome+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">In situ structure of neuronal C9orf72 poly-GA aggregates reveals proteasome recruitment.</a> Cell. 172 (4), 696-705.e12 (2018).</li>
<li>Perez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+demonstration+of+roGFP2+as+an+environmental+sensor+for+cryogenic+correlative+light+and+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification and demonstration of roGFP2 as an environmental sensor for cryogenic correlative light and electron microscopy.</a> J Struct Biol. 214 (3), 107881(2022).</li>
<li>Sartor, A. M., Dahlberg, P. D., Perez, D., Moerner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mApple+as+a+red+fluorescent+protein+for+cryogenic+single-molecule+imaging+with+turn-off+and+turn-on+active+control+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Characterization of mApple as a red fluorescent protein for cryogenic single-molecule imaging with turn-off and turn-on active control mechanisms.</a> J Phys Chem B. 127 (12), 2690-2700 (2023).</li>
<li>Sexton, D. L., Burgold, S., Schertel, A., Tocheva, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+confocal+cryo-CLEM+with+cryo-FIB+milling+for+in+situ+imaging+of+Deinococcus+radiodurans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Res+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution confocal cryo-CLEM with cryo-FIB milling for in situ imaging of Deinococcus radiodurans.</a> Curr Res Struct Biol. 4, 1-9 (2022).</li>
<li>Dahlberg, P. D., Moerner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryogenic+super-resolution+fluorescence+and+electron+microscopy+correlated+at+the+nanoscale%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phys+Chem%22%5BJournal%5D)">Cryogenic super-resolution fluorescence and electron microscopy correlated at the nanoscale.</a> Annu Rev Phys Chem. 72 (1), 253-278 (2021).</li>
<li>Perez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+transient+states+of+PAmKate+to+enable+improved+cryogenic+single-molecule+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Exploring transient states of PAmKate to enable improved cryogenic single-molecule imaging.</a> J Am Chem Soc. 146 (42), 28707-28716 (2024).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ELI+trifocal+microscope%3A+A+precise+system+to+prepare+target+cryo-lamellae+for+in+situ+cryo-ET+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">ELI trifocal microscope: A precise system to prepare target cryo-lamellae for in situ cryo-ET study.</a> Nat Methods. 20 (2), 276-283 (2023).</li>
<li>Loginov, S. V., Boltje, D. B., Hensgens, M. N. F., Hoogenboom, J. P., vander Wee, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depth-dependent+scaling+of+axial+distances+in+light+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optica%22%5BJournal%5D)">Depth-dependent scaling of axial distances in light microscopy.</a> Optica. 11 (4), 553-568 (2024).</li>
<li>Petrov, P. N., Moerner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addressing+systematic+errors+in+axial+distance+measurements+in+single-emitter+localization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Addressing systematic errors in axial distance measurements in single-emitter localization microscopy.</a> Opt Express. 28 (13), 18616-18632 (2020).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+3D+localization+by+integrated+fluorescence+microscopy+%28iFLM%29+for+cryo-FIB-milling+and+in+situ+cryo-ET%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">Precise 3D localization by integrated fluorescence microscopy (iFLM) for cryo-FIB-milling and in situ cryo-ET.</a> Microsc Microanal. 29 (Suppl. 1), 1055-1057 (2023).</li>
<li>Perton, E., Boltje, D., Jakobi, A., Hoogenboom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Workflow+for+fluorescence-targeted+lamella+milling+from+vitrified+cells+with+a+coincident+fluorescence%2C+electron%2C+and+ion+beam+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Workflow for fluorescence-targeted lamella milling from vitrified cells with a coincident fluorescence, electron, and ion beam microscope.</a> Bio Protoc. 15 (14), e5390(2025).</li>
<li>Boltje, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cryogenic%2C+coincident+fluorescence%2C+electron%2C+and+ion+beam+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">A cryogenic, coincident fluorescence, electron, and ion beam microscope.</a> eLife. 11, e82891(2022).</li>
<li>Sica, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+interference+for+the+guidance+of+cryogenic+focused+ion+beam+milling+beyond+the+axial+diffraction+limit%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Optical interference for the guidance of cryogenic focused ion beam milling beyond the axial diffraction limit.</a> bioRxiv. , (2024).</li>
<li>Dahlberg, P. D., Perez, D., Hecksel, C. W., Chiu, W., Moerner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metallic+support+films+reduce+optical+heating+in+cryogenic+correlative+light+and+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Metallic support films reduce optical heating in cryogenic correlative light and electron tomography.</a> J Struct Biol. 214 (4), 107901(2022).</li>
<li>Lukinavicius, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorogenic+probes+for+live-cell+imaging+of+the+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fluorogenic probes for live-cell imaging of the cytoskeleton.</a> Nat Methods. 11 (7), 731-733 (2014).</li>
<li>Wang, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWang%2C+J+%22Direct+visualization+of+cellular+protein+complexes+in+situ+by+fluorescence-guided+cryo-FIB-SEM+and+cryo-ET%22">Direct visualization of cellular protein complexes in situ by fluorescence-guided cryo-FIB-SEM and cryo-ET</a>. , California Institute of Technology. (2025).</li>
<li>Last, M. G., Tuijtel, M. W., Voortman, L. M., Sharp, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selecting+optimal+support+grids+for+super-resolution+cryogenic+correlated+light+and+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Selecting optimal support grids for super-resolution cryogenic correlated light and electron microscopy.</a> Sci Rep. 13 (1), 8270(2023).</li>
<li>Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+electron+microscope+tomography+using+robust+prediction+of+specimen+movements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated electron microscope tomography using robust prediction of specimen movements.</a> J Struct Biol. 152 (1), 36-51 (2005).</li>
<li>Mastronarde, D. N., Held, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+tilt+series+alignment+and+tomographic+reconstruction+in+IMOD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated tilt series alignment and tomographic reconstruction in IMOD.</a> J Struct Biol. 197 (2), 102-113 (2017).</li>
<li>Kremer, J. R., Mastronarde, D. N., McIntosh, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+visualization+of+three-dimensional+image+data+using+IMOD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Computer visualization of three-dimensional image data using IMOD.</a> J Struct Biol. 116 (1), 71-76 (1996).</li>
<li>Meng, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UCSF+ChimeraX%3A+Tools+for+structure+building+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">UCSF ChimeraX: Tools for structure building and analysis.</a> Protein Sci. 32 (11), e4792(2023).</li>
<li>Heebner, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+learning-based+segmentation+of+cryo-electron+tomograms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Deep learning-based segmentation of cryo-electron tomograms.</a> J Vis Exp. (189), e64435(2022).</li>
<li>Klumpe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modular+platform+for+automated+cryo-FIB+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">A modular platform for automated cryo-FIB workflows.</a> eLife. 10, e70506(2021).</li>
<li>Li, Y., Kang, D. -D., Dai, J. -Y., Wang, L. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cage+effect+of+electron+beam+irradiation+damage+in+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22npj+Comput+Mater%22%5BJournal%5D)">The cage effect of electron beam irradiation damage in cryo-electron microscopy.</a> npj Comput Mater. 10 (1), 115(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Aquilos 2 Kryo-FIB</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td>https://www.thermofisher.com/us/en/home/electron-microscopy/products/dualbeam-fib-sem-microscopes/aquilos-cryo-fib.html?cid=msd_ls_xseg_xmkt_sdb-aquilos_285811_na_pso_gaw_pei90m & gad_source=1& gad_campaignid=12 764255901& gbraid=0AAAAADxi_GS s7OvZmg4cgCUm0PjSiq9X9& gclid= Cj0KCQjwh5vFBhCyARIsAHBx2w xlIfYHMvqY3sSWu6oEAdUynCSf9 KRg9Jhjp7l0Dot9qTl6GyQaEo8aAiy 2EALw_wcB</td></tr><tr><td>Autogrid-kompatible Kryo-Gridbox</td><td>Elektronenmikroskopiewissenschaften</td><td></td><td>https://www.emsdiasum.com/autogrid -compatible-cryo-grid-box?srsltid= AfmBOorQAd3esD8fLmnDDO2TvrNk cj4UINXFnPSMgrpEmkWd0H7ImUq7</td></tr><tr><td>Autogitterringe und C-Clips</td><td>Nanosoft</td><td></td><td>https://www.nanosoftmaterials.com/product-page/100-pack-autogrid-rings-c-clips</td></tr><tr><td>CLEM-Softwaresuite</td><td>Dahlberg-Forschungsgruppe an der Stanford/SLAC</td><td></td><td>https://github.com/pdahlb/CLEM_software_suite.git</td></tr><tr><td>Libelle 2022.1</td><td>Objektforschungssysteme</td><td></td><td>https://dragonfly.comet.tech/</td></tr><tr><td>ENZEL</td><td>Delmic B. V.</td><td></td><td>Das ENZEL-System ist ein maßgeschneidertes Instrument und derzeit nicht kommerziell erhältlich</td></tr><tr><td>IMOD 4.12</td><td>Universität von Colorado</td><td></td><td>https://bio3d.colorado.edu/imod/</td></tr><tr><td>LD4 flüssiger Stickstoff-Dewar</td><td>Nanosoft</td><td></td><td>https://www.nanosoftmaterials.com/product-page/ld4-liquid-dewar-4-liters</td></tr><tr><td>MATLAB 2023</td><td>MathWorks</td><td></td><td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td></tr><tr><td>Pindeckel-Manipulatorwerkzeug</td><td>Nanosoft</td><td></td><td>https://www.nanosoftmaterials.com/product-page/pin-lid-manipulator-tool</td></tr><tr><td>Python-Toolkit</td><td>Dahlberg-Forschungsgruppe an der Stanford/SLAC</td><td></td><td>https://github.com/pdahlb/trico_softwaresuite</td></tr><tr><td>Quantifoil R2/2, LF, 200 Mesh, Au EM Gitter</td><td>Elektronenmikroskopiewissenschaften</td><td></td><td>https://www.emsdiasum.com/quantifoil-r-22-lf-200-mesh-gold</td></tr><tr><td>Seriell-EM</td><td>Universität von Colorado Boulder</td><td></td><td>https://bio3d.colorado.edu/SerialEM/</td></tr><tr><td>Spearlab-Standardschiff (Transfer-Dewar)</td><td>Nanosoft</td><td></td><td>https://www.nanosoftmaterials.com/product-page/spearlab-standard-vessel</td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>Elektronenmikroskopiewissenschaften</td><td></td><td>https://www.emsdiasum.com/style-3sa</td></tr></tbody></table>

arbeitsablauf mit einem kryogenen koinzidenz-fluoreszenz-, elektronen- und ionenstrahlmikroskop zur gezielten fräsung von zellen

Workflow Using a Cryogenic Coincident Fluorescence, Electron, and Ion Beam Microscope for Targeted Milling of Cells

Arbeitsablauf mit einem kryogenen Koinzidenz-Fluoreszenz-, Elektronen- und Ionenstrahlmikroskop zur gezielten Fräsung von Zellen

Cryogenic focused ion beam milling with scanning electron microscopy (CryoFIB-SEM) has become the&#160;dominant approach for preparing sub-200-nm thick ...

workflow-using-cryogenic-coincident-fluorescence-electron-ion-beam

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wir zeigen hier, wie Elektronen cryotomography (ECT) zu verwenden, um auf die Ultrastruktur von Bakterienzellen in nahezu native Staaten zu studieren, "makromolekularen" (~ 4 nm) Auflösung.

Electron Cryotomography von Bakterienzellen

Cryo Elektronenmikroskope, entweder Scanning (SEM) oder Transmission (TEM), werden häufig für die Charakterisierung von biologischen Proben oder anderen Materialien mit einem hohen Wassergehalt 1 verwendet wird. Eine SEM / Focused Ion Beam (FIB) wird verwendet, um Merkmale von Interesse in Proben zu identifizieren und extrahieren eine dünne, elektronentransparenten Lamellen für die Übertragung auf eine Kryo-TEM.

Cryo-Elektronen-Mikroskopie-Probenvorbereitung mit Hilfe eines Focused Ion Beam

Hier beschreiben wir Protokolle Säugerzellen durch Solid-State-Fräsen bei einer kryogenen Temperatur zu stören, um einen Zellextrakt aus der resultierenden Zelle Pulver produzieren, und Proteinkomplexe von Interesse durch Affinitätseinfangen auf Antikörper-gekoppelten Mikrometer-Maßstab paramagnetischen Perlen zu isolieren.

Protein Complex Affinity Capture von Cryomilled Mammalian Cells

Hier wird ein Protokoll zur Zellkultur auf Siliziumnitridmembranen und zum Einfrieren vor der Röntgenfluoreszenz-Bildgebung mit einer synchromtronen kryogenen Röntgensonde vorgestellt. Wenn nur raumtemperaturnano-analyse zur Verfügung gestellt wird, können die gefrorenen Proben weiter gefriergetrocknet werden. Dies sind wichtige Schritte, um Informationen über die intrazelluläre elementare Zusammensetzung zu erhalten.

Zellkultur auf Siliziumnitridmembranen und Kryovorbereitung für Synchrotron-Röntgenfluoreszenz Nano-Analyse

Kryogene fokussierte Ionenstrahl- (FIB) und Rasterelektronenmikroskopie (REM) können wichtige Einblicke in die Chemie und Morphologie intakter Fest-Flüssig-Grenzflächen liefern. Methoden zur Erstellung hochwertiger spektroskopischer EDX-Karten (Energy Dispersive X-ray) solcher Grenzflächen werden detailliert beschrieben, wobei der Schwerpunkt auf Energiespeichergeräten liegt.

Nanoskalige Charakterisierung von Flüssig-Fest-Grenzflächen durch Kopplung von kryofokussiertem Ionenstrahlfräsen mit Rasterelektronenmikroskopie und Spektroskopie

Das hier vorgestellte Protokoll beschreibt die Verwendung von Spotiton, einem neuartigen Robotersystem, um zwei interessante Proben auf ein selbstableitendes Nanodrahtgitter zu liefern, das sich vor der Vitrifikation in flüssigem Kryogen mindestens 90 ms vermischt.

Kryo-elektronenmikroskopische Gittervorbereitung für zeitaufgelöste Studien mit einem neuartigen Robotersystem, Spotiton

Dieses Protokoll zeigt, wie biologische kryokonservierte Proben mit kryostrukturierter Beleuchtungsmikroskopie abgebildet werden können. Wir demonstrieren die Methodik, indem wir das Zytoskelett von U2OS-Zellen abbilden.

Kryostrukturierte Beleuchtung Mikroskopische Datenerfassung von kryogen konservierten Zellen

Fokussiertes Ionenstrahlfräsen zur Herstellung von glasartigen On-Grid-Lamellen aus tiefgefrorenen biologischen Proben für die Kryo-Elektronentomographie.

Präparation von Lamellen aus glasartigen biologischen Proben mit einem Zweistrahl-Rasterelektronenmikroskop für die Kryo-Elektronentomographie

Wir präsentieren ein Protokoll zur Lamellenpräparation von gefrorenen biologischen Proben mittels kryofokussiertem Ionenstrahl-Mikrobearbeitung für hochauflösende Strukturstudien von Makromolekülen in situ mit Kryo-Elektronentomographie. Das vorgestellte Protokoll enthält Richtlinien für die Herstellung von hochwertigen Lamellen mit hoher Reproduzierbarkeit zur strukturellen Charakterisierung von Makromolekülen innerhalb der Saccharomyces cerevisiae.

Herstellung und Kryo-FIB-Mikrobearbeitung von Saccharomyces cerevisiae für die Kryo-Elektronentomographie

Hier stellen wir eine Pipeline für das 3D-korrelative fokussierte Ionenstrahlfräsen vor, um die Präparation zellulärer Proben für die Kryo-Elektronentomographie zu steuern. Die 3D-Position von fluoreszenzmarkierten Proteinen von Interesse wird zunächst durch Kryo-Fluoreszenzmikroskopie bestimmt und dann gezielt gemahlen. Das Protokoll eignet sich für Säugetier-, Hefe- und Bakterienzellen.

Probenvorbereitung durch 3D-korrelatives fokussiertes Ionenstrahlfräsen für die hochauflösende Kryo-Elektronentomographie

Dieses Protokoll standardisiert die Kryo-Elektronen-Tomographie (Kryo-ET) für dickes Gewebe, indem es Hochdruck-Gefrieren (HPF) mit der Waffelmethode, kryogenen Fokusionenstrahl (Cryo-FIB) Lift-out und dosissymmetrische, parallele Aufnahme integriert, wodurch gleichmäßig dünne Lamellen und vitrifizierte Proben für eine reproduzierbare In-situ-Analyse im Maus-Hippocampus entstehen.

Kryo-Elektronen-Tomographie-Workflow für dickes Gewebe demonstriert im Maus-Hippocampus

Erfahren Sie, wie kryogene Lamellen mit integrierter Fluoreszenz- und Ionenstrahlmikroskopie präzise hergestellt werden. Diese Methode ermöglicht die gezielte Analyse zellulärer Strukturen durch Kryo-Elektronentomographie.

Arbeitsablauf mit einem kryogenen Koinzidenz-Fluoreszenz-, Elektronen- und Ionenstrahlmikroskop zur gezielten Fräsung von Zellen (Video) | JoVE Journal

Arbeitsablauf mit einem kryogenen Koinzidenz-Fluoreszenz-, Elektronen- und Ionenstrahlmikroskop zur gezielten Fräsung von Zellen

Weitere Videos entdecken