Name: Auswahl und No-Choice Tests zur Prüfung der Beständigkeit von A. thaliana zu Fraßinsekten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie Auswahl- und No-Choice-Tests mit Arabidopsis thaliana durchführen, um die Resistenz gegen Pieris rapae zu untersuchen. Diese Methode zeigt die Rolle von Jasmonat und Glucosinolaten in der Pflanzenabwehr.

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No Choice Experiment: <ol><li> Vorsichtig umschließen das Arabidopsis-Pflanze von Interesse in einen Plastikbecher. In diesem Fall: Col-0 (WT) und eine Mutante in der Produktion von JA beeinträchtigt. Achten Sie darauf, den Schaden begrenzen, um die Blätter. Dafür verwende ich die Rückseite dieses Pinsels. </li><li> Verwenden Sie einen feinen Pinsel auf einem frisch geschlüpften Larven aus der Kolonie auf Kohl nehmen. </li><li> Vorsichtig die Larve auf der Arabidopsis-Pflanzen. </li><li> Gewicht Larve am Tag 4, 7, 10. TIP: Erweitern Sie Ihre Pflanzen unter Kurztagbedingungen (8 Stunden Licht), um das vegetative Wachstum (1 Larve kann seinen gesamten Lebenszyklus auf 1 Pflanze erfüllen) zu erhöhen. </li></ol> Wahl Experiment: <ol><li> Zwei Pflanzen ausgewählt sind, eins von jedem Genotyp. Am besten ist es für die Pflanzen in den gleichen Topf wachsen, auf andere Faktoren, wie zum Beispiel Fach-Effekte, etc. einschränken </li><li> Setzen Sie die Pflanzen in einen Schmetterling Käfig. </li><li> Wählen Sie ein fruchtbares Weibchen. Ich in der Regel fangen einen weiblichen, die aktiv die Verlegung Eier in die Aufzucht Kolonie. </li><li> Lassen Sie die Frau in den Käfig mit der Wahl von zwei Anlagen für 24 Stunden. </li></ol> TIPP 1: Um einen Einfluss des Lernens zu beseitigen, nicht wiederverwenden Frauen für nachfolgende Choice-Tests. TIPP 2: Man kann nur vergleichen, Pflanzen, die ein ähnliches Wachstum Phänotyp haben. Alternativ können Sie ein Blatt von jedem Genotyp Montage auf einem Erlenmeyerkolben und vergleichen ihre Attraktivität für ein Weibchen. Bitte besuchen Sie <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">Annual Reviews of Plant Biology</a> , um weitere Informationen über dieses Protokoll und pflanzliche Immunität zu Raupenfraß.

auswahl und no-choice tests zur prüfung der beständigkeit von a. thaliana zu fraßinsekten

Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects

Die Larven der kleinen weißen Kohlkopfschmetterling sind ein Schädling in der Landwirtschaft Einstellungen. Diese Raupe Arten Feeds von Pflanzen in der Kohl-Familie, die viele Kulturen wie Kohl gehören, nimmt Brokkoli, Rosenkohl etc. Aufzucht der Insekten am Kohlpflanzen im Gewächshaus. Mindestens zwei Käfige sind für die Aufzucht von Pieris rapae benötigt. Einer für die Larven und die andere für die Erwachsenen, die Schmetterlinge enthalten. Um die Rolle von pflanzlichen Hormonen und giftige Pflanzen Chemikalien in Widerstand gegen diese Schadinsekten zu untersuchen, zeigen wir zwei Experimente. Zunächst Bestimmung der Rolle der Jasmonsäure (JA - ein Pflanzenhormon oft in Resistenz gegen Insekten angegeben) im Widerstand gegen das Kauen Insekten Pieris rapae. Caterpillar Wachstum kann auf Wildtyp-und mutierten Pflanzen in der Produktion von JA beeinträchtigt verglichen werden. Dieses Experiment wird als &quot;No Choice&quot;, weil Larven gezwungen sind, auf einer einzigen Pflanze, die oder synthetisiert ist mangelhaft in JA bestehen. Zweitens zeigen wir ein Experiment, das die Rolle der Glucosinolate, die als Eiablage (Eiablage) Signale verwendet werden untersucht. Hier verwenden wir WT und Mutante Arabidopsis in Glucosinolat Produktion in einer &quot;Choice&quot; Experiment, bei dem weiblichen Schmetterlinge erlaubt zu wählen, um ihre Eier auf Pflanzen entweder Genotyp lag beeinträchtigt werden. Dieses Video zeigt den Versuchsaufbau für beide Assays sowie repräsentative Ergebnisse.

Pflanzenstärkungsmittel zu kauen pflanzenfressenden Insekten kann auf verschiedene Weise getestet werden. Hier zeigen wir, wie Set-up eine Wahl und ein no-Wahl Experiment mit der Modellpflanze Arabidopsis thaliana, um Widerstand gegen die Schädlinge Pieris rapae identifizieren.

Auswahl und No-Choice Tests zur Prüfung der Beständigkeit von A. thaliana zu Fraßinsekten

Larven des Kleinen Kohlweißlings sind in der Landwirtschaft ein Schädling. Diese Raupenart ernährt sich von Pflanzen aus der Familie der Kreuzblütler, welche ...

Die Larven des kleinen Kohlweißlings sind in landwirtschaftlichen Betrieben Schädlinge. Diese Raupe ernährt sich von Pflanzen der Kohlfamilie, zu der viele Kulturpflanzen wie Kohl, Brokkoli und Rosenkohl sowie viele andere gehören. Interessanterweise können Pflanzen Resistenzen gegen Herbivore entwickeln, wie beispielsweise gegen den Kohlweißling, und in diesem Video werden wir die Resistenz der Modellpflanzenart Arabidopsis thaliana gegenüber diesem Schadinsekt mit zwei Methoden testen.Hallo, ich bin Martin Navos, Postdoktorand im Labor von George Jander am Bo Thompson Institute for Planned Research. Heute möchte ich Ihnen zeigen, wie man ein Choice- und ein No-Choice-Experiment mit Arabidopsis thaliana als Modellpflanze zur Erforschung der Resistenz gegen Schädlingsbefall durchführt.Die Aufzucht der Raupen erfolgt an Kohlpflanzen im Gewächshaus. Für die Aufzucht von Peter werden mindestens zwei Käfige benötigt. Ein Käfig dient den Larven, der andere enthält die erwachsenen Schmetterlinge, um die Beteiligung von Pflanzenhormonen und toxischen Pflanzenstoffen zu demonstrieren.Bei der Widerstandsprüfung gegen diesen Insektenversuch möchte ich zwei Experimente demonstrieren. Im ersten wird die Bestimmung der Rolle von Jasmonsäure erfolgen, einer Pflanzenhormon, das häufig im Zusammenhang mit Widerstand gegen Insekten steht.In einem No-Choice-Experiment kann das Wachstum von Raupen an Wildtyp- und Mutantenpflanzen verglichen werden, die in der Produktion von Monosäure beeinträchtigt sind. Die Hypothese lautet, dass die Larven an der Mutantenpflanze mehr Gewicht zunehmen. Beginnen wir also mit dem ersten Experiment.Wir werden also ein No-Choice-Experiment mit den Pflanzen, einer Revit opsis elliana, durchführen, um die Gewichtszunahme von Piers rapha-Larven zu messen. Zunächst müssen wir diese Pflanzen vorsichtig einschließen. Dazu schneiden wir den Boden eines dieser Plastikbecher ab.Um die Pflanzen einzuschließen, verwende ich das hintere Ende dieses feinen Pinsels. So können wir die Pflanzen einschließen, ohne die Blätter zu beschädigen. Hier haben wir also einen No-Choice-Versuch zwischen den Kaninchenopss, der Wildtyp-Pflanze und der Mutante.Der Mutant ist ein Jasmonsäure-defizienter Mutant und wahrscheinlich anfälliger für Fraßschäden. Dies ist ein Experiment ohne Wahlmöglichkeit, da eine Larve nur aus einem Genotyp von Pflanzen wählen kann. Daher werden wir je eine Larve in jedes Gefäß geben.Es ist wichtig, mit Larven zu beginnen, die gerade geschlüpft sind. Diese werden L1-Larven genannt. Hier sehen Sie eine, die gerade geschlüpft ist.Also, ich werde jetzt vorsichtig diese Larve auf das Testband setzen. Der nächste Schritt besteht darin, diese Pflanzen mit jeweils einer Larve einzuschließen, wozu ich ein feines Netz und ein oleinsäurehaltiges Band verwende, um sie abzudichten, damit sie nicht herauskriechen können. Danach warten wir einige Tage, normalerweise sieben Tage, bevor wir den Gewichtszuwachs der Larve messen.Nach sieben Tagen Fütterung nehmen wir die Larven heraus, wiegen sie auf dieser Waage ab und heben sie vorsichtig mit der flexiblen Pinzette auf, um ihr Gewicht zu erfassen. Dieser hier wiegt beinahe 250 Milligramm. Ich werde das Gewicht dieser Raupe, die sich auf der Mutante befand, mit dem Gewicht der Raupe vergleichen, die sich auf der Wildtyp-Pflanze befand.Wie Sie sofort erkennen können, ist bei der Wildtyp-Pflanze deutlich mehr Pflanzengewebe vorhanden. Wir nehmen daher an, dass die Larve weniger Gewicht zugenommen hat. Die Larve auf der Wildtyp-Pflanze wiegt nur etwa hundert Milligramm.Es gibt also einen enormen Unterschied sowohl hinsichtlich der Menge an Gewebe, die gefressen wurde, als auch bezüglich des Gewichtszuwachses der Larven. Damit ist das Experiment ohne Auswahlmöglichkeit abgeschlossen. Kommen wir nun zum Experiment mit Auswahlmöglichkeit, wollen wir?Fachspezifische Schädlinge erkennen und werden durch Wirtssignale angezogen, die für Generalisten oderbi force toxisch sind. Im Fall von pi werden schnelle Glucosinolate als Überposition-lene-Signal verwendet. Hier werde ich Wildtyp- und Mutanten-Hasen-Augen, die in der Glucosinolatproduktion beeinträchtigt sind, verwenden.Um ein Wahlversuchsexperiment zu demonstrieren, muss man vor Beginn des Experiments in der Lage sein, männliche und weibliche Schmetterlinge zu unterscheiden. Hier ist ein Beispiel: Weibliche Exemplare des Bläulings haben zwei Punkte auf jedem Flügel, während Männchen nur einen tragen; manchmal können Männchen fälschlicherweise für Weibchen gehalten werden, wenn sie eine zweite, oft schwache Markierung aufweisen. Richten wir also das Wahlversuchsexperiment ein.In diesem Fall verfügen wir sowohl über die Wildtyp- als auch über eine Mutante der Pflanze. Die Mutante ist in der Produktion von Glucosinolaten beeinträchtigt. Glucosinolate sind toxisch für unspezialisierte Schadinsekten, während Spezialisten wie das hier verwendete Pra von Lucas-Simulationen angezogen werden.Das sind also die fünf Larvenstadien der Penis-Affe, beginnend mit der kleinsten L1-Larve, die dann an Gewicht zunimmt, bis sie das fünfte Larvenstadium erreicht. Danach verwandelt sie sich in eine Puppe, und die vollständige Metamorphose findet statt, wodurch aus diesen Larven erwachsene Schmetterlinge entstehen. Für diesen Wahlversuch verwenden wir diesen Käfig, in den sowohl die Wildform als auch die mutierte Pflanze eingefügt wurden; nun werde ich ein weibliches Exemplar des Schmetterlings hinzufügen.Um die Acai zu bewerten, fange ich normalerweise Weibchen, die fruchtbar sind. Um sicherzustellen, dass sie fruchtbar sind, fange ich Weibchen, die aktiv Eier legen, lege vorsichtig meine Hand darum und übertrage sie in den Versuchskäfig. Wir lassen den Schmetterling also 24 Stunden lang darin und zählen anschließend die Anzahl der auf jedem dieser Genotypen abgelegten Eier. Einige nützliche Tipps bei der Durchführung dieser Art von Experimenten sind: Verwenden Sie zunächst nach der Auswahl eines weiblichen Schmetterlings dieses Individuum nicht für nachfolgende Experimente, da ein Lerneffekt vorliegen könnte. Zweitens können nur Pflanzen miteinander verglichen werden, die ähnliche Wachstumsphänotypen aufweisen. Wenn Sie also Pflanzen mit unterschiedlichen Wachstumsphänotypen haben, können Sie Blätter ähnlicher Größe entnehmen und diese auf einem LMI-Fläschchen befestigen.Also, nachdem 24 Stunden vergangen sind, können wir zuerst die Pflanzen herausnehmen. Die Wildtyp-Pflanze weist, wie Sie sehen können, viele Eier auf, und die Mutante, der Mangel an Glucosinolaten aufweist. Sie fehlt also an einer Überposition oder Acai-Stimulus.Wie Sie sehen, gibt es auf der Mutante praktisch keine Eier oder zumindest nur sehr wenige, während auf der Wildtyp-Pflanze viele Eier vorhanden sind. Soeben habe ich Ihnen gezeigt, wie man Experimente einrichtet, um die Resistenz gegen Insekten zu bestimmen.Das erste Experiment war ein No-Choice-Experiment. Experimente, bei denen wir den Gewichtszuwachs der Larven an mutierten gegenüber Wildtyp-Pflanzen verglichen. Das zweite Experiment war ein Choice-Experiment.Wir verglichen die Acla durch einen weiblichen Schmetterling ebenfalls an einer mutierten gegenüber einer Wildtyp-Pflanze. Vielen Dank. Das war's.Ich hoffe, es ist nützlich für Ihre Experimente.

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Forschung

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Biology

Biologie

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