Name: Im lebenden Organismus Bildgebung der neuronalen Aktivität in nicht anästhesierten erwachsenen Drosophila-Fliegen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Erfahren Sie die bildgebende Darstellung neuronaler Aktivität in nicht anästhesierten erwachsenen Drosophila-Fliegen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Gedächtnisbildung und aktivem Vergessen ohne störende Anästhetika.

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<ol><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+signal-to-noise+Ca2%2B+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high signal-to-noise Ca2+ probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nat Biotechnol. 19 (2), 137-141 (2001).</li>
<li>Chen, T. W., Wardill, T. J., Sun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li>
<li>Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neural+activity+in+worms%2C+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat Methods. 6 (12), 875-881 (2009).</li>
<li>Akerboom, J., Chen, T. W., Wardill, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+a+GCaMP+calcium+indicator+for+neural+activity+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Optimization of a GCaMP calcium indicator for neural activity imaging.</a> J Neurosci. 32 (40), 13819-13840 (2012).</li>
<li>Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca2%2B+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An expanded palette of genetically encoded Ca2+ indicators.</a> Science. 333 (6051), 1888-1891 (2011).</li>
<li>Sun, F., Zeng, J., Jing, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+fluorescent+sensor+enables+rapid+and+specific+detection+of+dopamine+in+flies%2C+fish%2C+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded fluorescent sensor enables rapid and specific detection of dopamine in flies, fish, and mice.</a> Cell. 174 (2), 481-496 (2018).</li>
<li>Li, Y., Tsien, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pHTomato%2C+a+red%2C+genetically+encoded+indicator+that+enables+multiplex+interrogation+of+synaptic+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">pHTomato, a red, genetically encoded indicator that enables multiplex interrogation of synaptic activity.</a> Nat Neurosci. 15 (7), 1047-1053 (2012).</li>
<li>Wang, L., Wu, C., Peng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-performance+genetically+encoded+fluorescent+indicator+for+in+vivo+cAMP+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A high-performance genetically encoded fluorescent indicator for in vivo cAMP imaging.</a> Nat Commun. 13 (1), 5363(2022).</li>
<li>Jing, M., Zhang, P., Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+fluorescent+acetylcholine+indicator+for+in+vitro+and+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded fluorescent acetylcholine indicator for in vitro and in vivo studies.</a> Nat Biotechnol. 36 (8), 723-737 (2018).</li>
<li>Yu, D., Akalal, D. B. G. B., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+alpha%2Fbeta+mushroom+body+neurons+form+a+branch-specific%2C+long-term+cellular+memory+trace+after+spaced+olfactory+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Drosophila alpha/beta mushroom body neurons form a branch-specific, long-term cellular memory trace after spaced olfactory conditioning.</a> Neuron. 52 (5), 845-855 (2006).</li>
<li>Hige, T., Aso, Y., Modi, M. N., Rubin, G. M., Turner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterosynaptic+plasticity+underlies+aversive+olfactory+learning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Heterosynaptic plasticity underlies aversive olfactory learning in Drosophila.</a> Neuron. 88 (5), 985-998 (2015).</li>
<li>Berry, J. A., Phan, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+neurons+mediate+learning+and+forgetting+through+bidirectional+modulation+of+a+memory+trace%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Dopamine neurons mediate learning and forgetting through bidirectional modulation of a memory trace.</a> Cell Rep. 25 (3), 651-662 (2018).</li>
<li>Cervantes-Sandoval, I., Davis, R. L., Berry, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rac1+impairs+forgetting-induced+cellular+plasticity+in+mushroom+body+output+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rac1 impairs forgetting-induced cellular plasticity in mushroom body output neurons.</a> Front Cell Neurosci. 14, 258(2020).</li>
<li>Martinez-Cervantes, J., Shah, P., Phan, A., Cervantes-Sandoval, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+order+unimodal+olfactory+sensory+preconditioning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">High order unimodal olfactory sensory preconditioning in Drosophila.</a> Elife. 11, 79107(2022).</li>
<li>Faber, T., Joerges, J., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+learning+modifies+neural+representations+of+odors+in+the+insect+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Associative learning modifies neural representations of odors in the insect brain.</a> Nat Neurosci. 2 (1), 74-78 (1999).</li>
<li>Yu, D., Baird, G. S., Tsien, R. Y., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+calcium+transients+in+Drosophila+mushroom+body+neurons+with+camgaroo+reporters%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Detection of calcium transients in Drosophila mushroom body neurons with camgaroo reporters.</a> J Neurosci. 23 (1), 64-72 (2003).</li>
<li>Yu, D., Keene, A. C., Srivatsan, A., Waddell, S., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+DPM+neurons+form+a+delayed+and+branch-specific+memory+trace+after+olfactory+classical+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila DPM neurons form a delayed and branch-specific memory trace after olfactory classical conditioning.</a> Cell. 123 (5), 945-957 (2005).</li>
<li>Yu, D., Ponomarev, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+representation+of+the+spatial+code+for+odors+after+olfactory+classical+conditioning%3A+Memory+trace+formation+by+synaptic+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Altered representation of the spatial code for odors after olfactory classical conditioning: Memory trace formation by synaptic recruitment.</a> Neuron. 42 (3), 437-449 (2004).</li>
<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical+conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophilamelanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+A%22%5BJournal%5D)">Classical conditioning and retention in normal and mutant Drosophilamelanogaster.</a> J Comp Physiol A. 157 (2), 263-277 (1985).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophilamelanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophilamelanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 71 (3), 708-712 (1974).</li>
<li>Quinn, W. G., Dudai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+phases+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Memory phases in Drosophila.</a> Nature. 262 (5569), 576-577 (1976).</li>
<li>Tempel, B. L., Bonini, N., Dawson, D. R., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reward+learning+in+normal+and+mutant+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Reward learning in normal and mutant Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 80 (5), 1482-1486 (1983).</li>
<li>Turner, G. C., Bazhenov, M., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+representations+by+Drosophila+mushroom+body+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Olfactory representations by Drosophila mushroom body neurons.</a> J Neurophysiol. 99 (2), 734-746 (2008).</li>
<li>de Belle, J. S., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+odor+learning+in+Drosophila+abolished+by+chemical+ablation+of+mushroom+bodies%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Associative odor learning in Drosophila abolished by chemical ablation of mushroom bodies.</a> Science. 263 (5147), 692-695 (1979).</li>
<li>Schwaerzel, M., Monastirioti, M., Scholz, H., Friggi-Grelin, F., Birman, S., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+and+octopamine+differentiate+between+aversive+and+appetitive+olfactory+memories+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dopamine and octopamine differentiate between aversive and appetitive olfactory memories in Drosophila.</a> J Neurosci. 23 (33), 10495-10502 (2003).</li>
<li>Kim, Y. C., Lee, H. G., Han, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D1+dopamine+receptor+dDA1+is+required+in+the+mushroom+body+neurons+for+aversive+and+appetitive+learning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">D1 dopamine receptor dDA1 is required in the mushroom body neurons for aversive and appetitive learning in Drosophila.</a> J Neurosci. 27 (29), 7640-7647 (2007).</li>
<li>Riemensperger, T., Völler, T., Stock, P., Buchner, E., Fiala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Punishment+prediction+by+dopaminergic+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Punishment prediction by dopaminergic neurons in Drosophila.</a> Curr Biol. 15 (21), 1953-1960 (2005).</li>
<li>Mao, Z., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eight+different+types+of+dopaminergic+neurons+innervate+the+Drosophila+mushroom+body+neuropil%3A+Anatomical+and+physiological+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Eight different types of dopaminergic neurons innervate the Drosophila mushroom body neuropil: Anatomical and physiological heterogeneity.</a> Front Neural Circuits. 3 (5), 1-17 (2009).</li>
<li>Liu, C., Plaçais, P. Y., Yamagata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subset+of+dopamine+neurons+signals+reward+for+odour+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A subset of dopamine neurons signals reward for odour memory in Drosophila.</a> Nature. 488 (7412), 512-516 (2012).</li>
<li>Burke, C. J., Huetteroth, W., Owald, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Layered+reward+signaling+through+octopamine+and+dopamine+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Layered reward signaling through octopamine and dopamine in Drosophila.</a> Nature. 492 (7429), 433-437 (2012).</li>
<li>Tomchik, S. M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+learning-related+cAMP+signaling+and+stimulus+integration+in+the+Drosophila+olfactory+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Dynamics of learning-related cAMP signaling and stimulus integration in the Drosophila olfactory pathway.</a> Neuron. 64 (4), 510-521 (2009).</li>
<li>Gervasi, N., Tchenio, P., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKA+dynamics+in+a+Drosophila+learning+center%3A+Coincidence+detection+by+rutabaga+adenylyl+cyclase+and+spatial+regulation+by+dunce+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">PKA dynamics in a Drosophila learning center: Coincidence detection by rutabaga adenylyl cyclase and spatial regulation by dunce phosphodiesterase.</a> Neuron. 65 (4), 516-529 (2010).</li>
<li>Séjourné, J., Plaçais, P. Y., Aso, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+efferent+neurons+responsible+for+aversive+olfactory+memory+retrieval+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mushroom body efferent neurons responsible for aversive olfactory memory retrieval in Drosophila.</a> Nat Neurosci. 14 (7), 903-910 (2011).</li>
<li>Aso, Y., Sitaraman, D., Ichinose, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+output+neurons+encode+valence+and+guide+memory-based+action+selection+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Mushroom body output neurons encode valence and guide memory-based action selection in Drosophila.</a> Elife. 3, 04580(2014).</li>
<li>Pai, T. P., Chen, C. C., Lin, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+ORB+protein+in+two+mushroom+body+output+neurons+is+necessary+for+long-term+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Drosophila ORB protein in two mushroom body output neurons is necessary for long-term memory formation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (19), 7898-7903 (2013).</li>
<li>Owald, D., Felsenberg, J., Talbot, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+defined+mushroom+body+output+neurons+underlies+learned+olfactory+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Activity of defined mushroom body output neurons underlies learned olfactory behavior in Drosophila.</a> Neuron. 86 (2), 417-427 (2015).</li>
<li>Perisse, E., Owald, D., Barnstedt, O., Talbot, C. B., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aversive+learning+and+appetitive+motivation+toggle+feed-forward+inhibition+in+the+Drosophila+mushroom+body%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Aversive learning and appetitive motivation toggle feed-forward inhibition in the Drosophila mushroom body.</a> Neuron. 90 (5), 1086-1099 (2016).</li>
<li>Aso, Y., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopaminergic+neurons+write+and+update+memories+with+cell-type-specific+rules%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Dopaminergic neurons write and update memories with cell-type-specific rules.</a> Elife. 5, 16135(2016).</li>
<li>Hige, T., Aso, Y., Rubin, G. M., Turner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity-driven+individualization+of+olfactory+coding+in+mushroom+body+output+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Plasticity-driven individualization of olfactory coding in mushroom body output neurons.</a> Nature. 526 (7572), 258-262 (2015).</li>
<li>MacMillan, H. A., Nørgård, M., MacLean, H. J., Overgaard, J., Williams, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+test+of+Drosophila+anaesthetics%3A+Isoflurane+and+sevoflurane+are+benign+alternatives+to+cold+and+CO2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">A critical test of Drosophila anaesthetics: Isoflurane and sevoflurane are benign alternatives to cold and CO2.</a> J Insect Physiol. 101, 97-106 (2017).</li>
<li>Margulies, C., Tully, T., Dubnau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deconstructing+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Deconstructing memory in Drosophila.</a> Curr Biol. 15 (17), R700-R713 (2005).</li>
<li>Amiri, A., Karvandian, K., Ramezani, N., Amiri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+memory+impairment+in+patients+undergoing+general+anesthesia+and+its+contributing+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Saudi+J+Anaesth%22%5BJournal%5D)">Short-term memory impairment in patients undergoing general anesthesia and its contributing factors.</a> Saudi J Anaesth. 14 (4), 454-458 (2020).</li>
<li>Wang, R., Zhang, L., Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+activity+pattern+of+mouse+hippocampal+CA1+and+dentate+gyrus+under+isoflurane+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological activity pattern of mouse hippocampal CA1 and dentate gyrus under isoflurane anesthesia.</a> Front Cell Neurosci. , 18(2024).</li>
<li>Berry, J. A., Cervantes-Sandoval, I., Chakraborty, M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+facilitates+memory+by+blocking+dopamine+neuron-mediated+forgetting%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Sleep facilitates memory by blocking dopamine neuron-mediated forgetting.</a> Cell. 161, 1656-1667 (2015).</li>
<li>Delestro, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+large-scale+analysis+of+Drosophila+neuronal+calcium+traces+by+automated+tracking+of+single+somata%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo large-scale analysis of Drosophila neuronal calcium traces by automated tracking of single somata.</a> Sci Rep. 10, 1-15 (2020).</li>
<li>Moore, R. J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FicTrac%3A+A+visual+method+for+tracking+spherical+motion+and+generating+fictive+animal+paths%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">FicTrac: A visual method for tracking spherical motion and generating fictive animal paths.</a> J Neurosci Methods. 225, 106-119 (2014).</li>
<li>Seelig, J. D., Chiappe, M. E., Lott, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+calcium+imaging+from+head-fixed+Drosophila+during+optomotor+walking+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Two-photon calcium imaging from head-fixed Drosophila during optomotor walking behavior.</a> Nat Methods. 7 (7), 535-540 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,102 mm Platindraht</td><td>Surepure Chemetals</td><td>2690</td><td></td></tr><tr><td>0,25 AD, 0,125 ID, platingehärteter Silikonschlauch</td><td>VWR</td><td>89068-474</td><td></td></tr><tr><td>0,3 mm ID Silikonschlauch&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-189-14</td><td></td></tr><tr><td>Bananenstecker</td><td>Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Schwarze Acrylplatte für Kammer 0,0125 Zoll</td><td>Precision Brand</td><td>44250</td><td></td></tr><tr><td>Calciumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>746495</td><td></td></tr><tr><td>Kupfer-Stoßgitter</td><td>Maßgeschneidertes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gleichstromnetzteil für Platinwiderstand</td><td>Fisher Scientific</td><td>S35740</td><td></td></tr><tr><td>Dremel Werkzeug 3000-1</td><td>Dremel</td><td>3000-N/18</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila melanogaster / ;; uas-tdtom</td><td>BDSC</td><td>36328</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila melanogaster / ; UAS-GCAMP6F;</td><td>BDSC</td><td>42747</td><td>Diese UAS-Linie wurde kombiniert mit ;; uas-td-tom zur Erzeugung eines Bestands, der beide Insertionen</td></tr><tr><td>enthält Drosophila melanogaster/ ;; MB077C-gal4</td><td>BDSC</td><td>68287</td><td></td></tr><tr><td>Epoxid-Kleber &nbsp;</td><td>Gorilla</td><td>4200102</td><td></td></tr><tr><td>Gas-Durchflussmesser 1,5 LPM</td><td>Amazon</td><td>B01N0UWZ2T</td><td></td></tr><tr><td>Glas 1 mL serologische Pipette</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-232-9516</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>Glukose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>Injektionsschlauch 12TW Gauge</td><td>Microgroup</td><td>316H12TW</td><td></td></tr><tr><td>Underdermic 22X Gauge Schlauch</td><td>Microgroup</td><td>304H22X</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid Hexahydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>Myristinsäure</td><td>Acros Organics</td><td>156961000</td><td></td></tr><tr><td>Neodym-Magnete 3X2 mm</td><td>Amazon</td><td>B0CXSQ387M</td><td></td></tr><tr><td>P1000 Spitzen</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>23-165RL</td><td></td></tr><tr><td>P200 Spitzen</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>23-150RL</td><td></td></tr><tr><td>Pneumatischer Steckanschluss 6mm AD</td><td>Amazon</td><td>B07ZHG8Y1Y</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>PTFE-Schlauch 6mm AD</td><td>Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rasierklingen&nbsp;</td><td>Amazon</td><td>B08LYD6645</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-500</td><td></td></tr><tr><td>Natriumphosphat Dibasisch</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>Trehalose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0167</td><td></td></tr></tbody></table>

im lebenden organismus bildgebung der neuronalen aktivität in nicht anästhesierten erwachsenen drosophila-fliegen

In Vivo Imaging of Neural Activity in Unanesthetized Drosophila Adult Flies

Hier wird die in vivo Bildgebung von adulten Drosophila ohne Anästhesie verwendet, um die aversive olfaktorische Konditionierung zu untersuchen, die die Plastizität in einem gut charakterisierten Mushroom Body Output Neuron (MBON γ2α'1)12 induziert. Der Calciumindikator GCaMP6f2 wird zusammen mit dem rot fluoreszierenden Protein TdTom in einem MB-Ausgangsneuron exprimiert, dessen Dendriten das Kompartiment der γ- und α'-Lappen innervieren und genetisch auf das MBON γ2α'1 abzielen, wobei die Split-Gal4-Linie MB077C34 verwendet wird (Abbildung 2A,B).
Um die Plastizität nach der aversiven olfaktorischen Konditionierung zu beobachten, wird die Fliege unter das konfokale Mikroskop gelegt, wobei ihr Hinterleib und ihre Beine in der Mitte des Schockgitters ausgerichtet sind und die Pipette der Geruchsabgabe auf die Antenne der Fliege gerichtet ist. Zuerst wurden Calcium-Geruchsreaktionen auf einen 5-s-Puls von 4-Methylcyclohexanol (MCH) aufgezeichnet, gefolgt von einem 5-s-Puls von 3-Octanol (OCT), getrennt durch ein 30-s-Interstimulus-Intervall. Fünf Minuten später wurden die Fliegen durch die gleichzeitige Präsentation eines 1-minütigen OCT-Impulses (CS+) zusammen mit 12, 90-V-Schocks trainiert. Dieser assoziative Konditionierungsplan erzeugt ein robustes verhaltensaversives Gedächtnis. 5 Minuten und 15 Minuten nach der Konditionierung wurden schließlich die Kalziumreaktionen auf MCH und OCT wie vor dem Training aufgezeichnet. MBON γ2α'1 reagiert vor der Konditionierung robust durch Kalziumtransienten sowohl auf MCH als auch auf OCT (Abbildung 2D-F). Nichtsdestotrotz sind die Calciumreaktionen auf CS+ (OCT) in Übereinstimmung mit früheren Befunden12 Minuten nach der Konditionierung vollständig reduziert (Abbildung 2D-F). Zusätzlich wurden die Reaktionen auf die CS- (MCH) signifikant potenziert. Eine Viertelstunde nach dem Training zeigte ähnliche Ergebnisse, da die Kalziumreaktion auf das CS+ signifikant unterdrückt und CS- potenziert wurde. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die bei beiden Gerüchen beobachtete Gedächtnisspur mindestens 15 Minuten anhält (Abbildung 2D-F). Diese Reaktionen wurden anhand der durchschnittlichen Geruchsreaktion während des 5-s-Pulses quantifiziert und innerhalb der Fliege verglichen. Diese Veränderungen der Geruchsreaktionen können auch durch eine Pseudofarbdarstellung der Veränderung der GCaMP6-Fluoreszenz vor und nach dem aversiven Training visualisiert werden (Abbildung 2E). Im Gegensatz dazu zeigt die Betäubung der Fliege während der Präparation eine verminderte Plastizität sowohl für CS+ als auch für CS-. Bei anästhesierten Tieren wird nur eine partielle Depression von CS+ beobachtet, da die Reaktionen nach dem Training noch vorhanden sind. Darüber hinaus unterscheiden sich die CS-Reaktionen nach dem Training nicht signifikant (Abbildung 2G,H). Um dies besser beobachten zu können, berechneten wir die induzierte Plastizität als Verhältnis von CS+/CS- und zeigten, dass nicht-anästhesierte Fliegen im Vergleich zu anästhesierten Tieren eine signifikant erhöhte Plastizität aufweisen (Abbildung 2I). Diese repräsentativen Ergebnisse deuten darauf hin, dass dieses Protokoll für die Untersuchung von Lernen und Gedächtnis unter dem Mikroskop geeignet ist und die Gesundheit der Fliege während der Bildgebung von Neuronen über einen langen Zeitraum sicherstellt. Dieses Protokoll ist vielseitig genug und kann auf andere Arten der In-vivo-Bildgebung und andere Neuronen von Interesse angewendet werden.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68332/68332fig01.jpg"> 
Abbildung 1: In-vivo-Bildgebung von Drosophila ohne Anästhesie. (A) Oberes Bild: Diagramm, das die Schritte der Aspiratorvorbereitung veranschaulicht. Unterseite: Das Diagramm zeigt die Kammer, die während der Fliegenpositionierung in einem Mikromanipulator gehalten wird. Der Rüssel der Fliege wird an der Öffnung von Metallschläuchen platziert, die mit einem Aspirator mit einem Vakuum von 500 mL/min verbunden sind. Anschließend wird die Kammer über der Flyer positioniert. (B) Die Seiten der Augen und des Thorax werden mit Myristinsäure unter Verwendung eines speziell angefertigten Platinwiderstands verklebt. (C) Der Rüssel der Fliege wird aus dem Metallrohr entfernt und die Kammer wird umgedreht, damit der Rüssel an Ort und Stelle geklebt werden kann, wodurch die Bewegung während der Aufnahme minimiert wird. (D) Die Kammer ist an einem Glasschiebeboden befestigt. Das Klebeband wird an der Oberseite der Kammer, die die Antennen abdeckt, und an der Rückseite angebracht, um ein Auslaufen von Kochsalzlösung zu verhindern. (E) Zwei vertikale Schnitte werden entlang der Kutikula in der Nähe der Facettenaugen gemacht, gefolgt von einem dritten Schnitt durch die Nagelhaut in der Nähe des Thorax, wodurch ein "Fenster" zum Gehirn entsteht. (F) Zwischen 100 und 200 μl Kochsalzlösung werden dem Kopf der Fliege an der Stelle der Schnitte zugesetzt. (G) Das Nagelhautfenster wird mit einer scharfen, feinen Pinzette angehoben, gezogen und gelöst, um das Gehirn freizulegen. (H) Fett und Luftröhrengewebe werden entfernt, um eine klare Visualisierung der Gehirnzellen unter dem Mikroskop zu ermöglichen. (I) Die präparierte Fliege wird unter das Mikroskop gelegt und so positioniert, dass ihr Körper auf dem Schockgitter ausgerichtet ist. (J) Pseudo-Farbbild, das das Expressionsmuster von MBON γ2α′1 zeigt. Der interessierende Bereich ist mit einer gestrichelten Linie umrandet, die den dendritischen Dorn umgibt. Maßstab: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/68332fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68332/68332fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Lerninduzierte Plastizität in MBON γ2α′1 nach aversiver olfaktorischer Konditionierung. (A) Expressionsmuster des MB077C-splitGal4-Treibers, der GCaMP exprimiert. Die Gehirne wurden präpariert und mit Anti-GFP gefärbt und mit Anti-nc82 gegengefärbt. Maßstabsbalken: 50 μm. (B) Pseudofarbbild von MBON γ2α′1, das den Zellkörper, den Verlängerungsprozess und den dendritischen Dorn hervorhebt. Die dendritische Region stellt den Bereich dar, aus dem die Kalziumreaktionen gesammelt wurden. Maßstabsbalken: 50 μm. (C) Schematische Darstellung des aversiven Trainingsprotokolls. Die Fliegen wurden 5-s-Impulsen von MCH und OCT mit 30 s sauberer Luft dazwischen ausgesetzt. Nach einem 5-minütigen Intervall wurden die Fliegen darauf trainiert, OCT mit zwölf 90-V-Elektroschocks zu assoziieren. Aufzeichnungen der Kalziumreaktionen auf MCH und OCT wurden 5 Minuten und 15 Minuten nach dem Training durchgeführt. (D) Die Spuren der Geruchsreaktion auf MCH (oberes Feld) und OCT (unteres Feld) werden vor dem Training und 5 Minuten und 15 Minuten nach dem Training gezeigt. Dicke schwarze Balken zeigen den Zeitpunkt der Geruchsbildung an. (E) Pseudofarbenbilder des dendritischen Dorns von MBON γ2α′1 vor dem Training und 5 min und 15 min nach dem Training, als Reaktion auf MCH und OCT. Die Potenzierung der Fluoreszenz wird für den CS- (MCH) beobachtet, während die Fluoreszenz für den CS+ (OCT) aufgehoben ist. Skalenbalken: 20 μm. (F) Die mittlere Geruchsreaktion auf MCH ist 5 min und 15 min nach dem Training signifikant potenziert, während die Reaktionen auf OCT (CS+) signifikant unterdrückt werden. Nichtparametrischer Wilcoxon-Paartest, N = 12. (G) Geruchsreaktionsspuren zu MCH (oberes Bild) und OCT (unteres Bild) sind für anästhesierte Fliegen vor und 5 Minuten nach dem Training dargestellt. Dicke schwarze Balken zeigen die Geruchsabgabe an. (H) Bei anästhesierten Tieren zeigen die mittleren Geruchsreaktionen auf MCH nach dem Training keine signifikante Potenzierung, und die Reaktionen auf OCT zeigen im Vergleich zu nicht anästhesierten Tieren nur eine teilweise Suppression. (I) Die trainingsinduzierte Plastizität, berechnet als CS+/CS-Verhältnis, ist bei anästhesierten Fliegen signifikant geringer als bei solchen, die ohne Anästhesie hergestellt wurden. Nichtparametrischer Wilcoxon-Paartest, N = 8-12. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/68332fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Ergänzende Akte 1: Grid_holder (STL). STL-Datei der kundenspezifischen Komponente, die zur Aufnahme des Stromnetzes verwendet wird. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Grid_Holder.stl" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Zusatzdatei 2: Grid_holder (OBJ). OBJ-Datei der kundenspezifischen Komponente, die zur Aufnahme des Stromnetzes verwendet wird. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Grid_holder.obj" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Zusatzdatei 3: Chamber_LaserCut. Adobe Illustrator-Datei, die zum Laserschneiden der oberen Komponente der Aufnahmekammern für männliche und weibliche Fliegen verwendet wird. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Chamber_laserCut.ai" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Zusatzdatei 4: Recording_chamber (SEAF). STL-Datei der speziell entwickelten Aufnahmekammer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recording_chamber.stl" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Zusatzdatei 5: Recording_chamber (OBJ). OBJ-Datei der speziell entwickelten Aufnahmekammer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recording_chamber.obj" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Zusatzakte 6: Recording_chamber_animation. MP4-Video, das eine Animation der zusammengebauten Aufnahmekammer zeigt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recordig_chamber_animation.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>

Im lebenden Organismus Bildgebung der neuronalen Aktivität in nicht anästhesierten erwachsenen Drosophila-Fliegen

In vivo imaging is crucial for studying neurobiology in Drosophila as it allows real-time visualization of neuronal activity, development, and plasticity ...

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Wir präsentieren eine Methode, die speziell auf das Bild des gesamten Gehirns von erwachsenen Drosophila während des Verhaltens und als Reaktion auf Reize zugeschnitten ist. Der Kopf ist positioniert, um den optischen Zugang zum gesamten Gehirn zu ermöglichen, während die Fliege ihre Beine und die Antennen, die Spitze des Proboscis bewegen kann, und die Augen sensorische Reize empfangen können.

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