Name: Krebsassoziierte Fibroblasten aus Mammatumoren der Maus als Werkzeuge für molekulare und computergestützte Studien (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Erfahren Sie molekulare und computergestützte Methoden zur Untersuchung krebsassoziierter Fibroblasten in Mammatumoren der Maus. Diese Techniken ermöglichen die Analyse von Tumor-Stroma-Interaktionen und die Identifizierung therapeutischer Ziele.

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<table><tbody><tr><td>1Kb plus DNA-Leiter</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10787018</td><td></td></tr><tr><td>24-Well-Platte</td><td>Sarstedt</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Platte</td><td>Sarstedt</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>Essigsäure</td><td>Sigma Aldirch</td><td>695092</td><td></td></tr><tr><td>AlterI-HF</td><td>Neuengland Biolabore</td><td>Nr. R3552</td><td>Bei -20 Grad lagern; C</td></tr><tr><td>Betadin</td><td>Meda Pharma</td><td>23907076</td><td></td></tr><tr><td>B&uuml; rker Zählkammer&nbsp;</td><td>VWR</td><td>40443703</td><td></td></tr><tr><td>Kauter Low Temp FineTip Disp</td><td>Keeler</td><td>AX10339KL</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>Konisches Röhrchen 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>Konisches Röhrchen 50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Cryopure 2 mL Mikroröhrchen</td><td>Sarstedt</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>Kristallviolett</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Nr. C0775</td><td>Bei RT lagern, in einem Abzug verwenden&nbsp;</td></tr><tr><td>Kulturplatte mit 100 mm Durchmesser</td><td>Sarstedt</td><td>833902</td><td></td></tr><tr><td>Kulturplatte mit 60 mm Durchmesser</td><td>Sarstedt</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>ddH20</td><td>Selbstgemacht</td><td></td><td>Bei RT lagern, in einer biologischen Haube verwenden</td></tr><tr><td>Digitaler Messschieber</td><td>Preciva</td><td>02-301-2</td><td></td></tr><tr><td>Digitales Mikroskop</td><td>Leica</td><td>DM6B</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Nr. D8418</td><td>Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modifizierter Adler" s Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>EcoRI-HF</td><td>Neuengland Biolabore</td><td>Nr. R3101</td><td>Bei -20 Grad lagern; C</td></tr><tr><td>Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Nr. E6758</td><td>Bei RT lagern, in einer biologischen Haube verwenden</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Gefilterte Spitzen 10 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>Gefilterte Spitzen 100 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>Gefilterte Spitzen 1000 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>Gefilterte Spitzen 20 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>Gefilterte Spitzen 200 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,20 &micro; M&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,45 &micro; M&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826</td><td></td></tr><tr><td>Feine Schere</td><td>2Biol</td><td>1406009</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>Geneticin</td><td>Gibco</td><td>10131035</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 Transfektionsreagenz</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11668019</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Matrigel-Invasionskammern mit 8 &mu; m PET-Membran&nbsp;</td><td>Corning</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplatten-Reader (600 nm Absorption)</td><td>Promega</td><td>GM3500</td><td></td></tr><tr><td>Mikroröhrchen 1,5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Optimem</td><td>Gibco</td><td>31985047</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>158127</td><td>Bei RT lagern, in einem Abzug verwenden</td></tr><tr><td>pBABE-neo largeTcDNA&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>1780</td><td>Bei -20 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>pCL-Ampho</td><td>Novus Biological&nbsp;</td><td>18746853</td><td>Bei -20 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>pCMV-R8.74</td><td>Addgene</td><td>22036</td><td>Bei -20 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>pCMV-VSVG&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>8454</td><td>Bei -20 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (Pen Strepto, 10.000 &mu; g/mL)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Phasenkontrast-Mikroskop&nbsp;</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Selbstgemacht</td><td></td><td>Bei RT lagern, in einer biologischen Haube verwenden</td></tr><tr><td>pLKO.1-Puro&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>10878</td><td>Bei -20 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin-Lösung</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Nr. P8920</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Puromycin-Dihydrochlorid aus&nbsp; Streptomyces alboniger</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Nr. P8833</td><td></td></tr><tr><td>rCutSmart Puffer&nbsp;</td><td>Neuengland Biolabore</td><td>Nr. B6004</td><td>Bei -20 Grad lagern; C</td></tr><tr><td>Nagetier-Rasierer</td><td>Äskulap</td><td>GT416</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institut (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>61870010</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Dursttupfer mit runder Spitze</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z744127</td><td></td></tr><tr><td>Skalpell</td><td>Gima</td><td>27041</td><td></td></tr><tr><td>Secura Semi Micro Waage</td><td>Schneidermuskel</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>Serologische Pipette 10 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>Serologische Pipette 2 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>Serologische Pipette 25 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>Serologische Pipette 5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>Maschen 5-0</td><td>Ethikon</td><td>Nr. 1866G</td><td></td></tr><tr><td>Spritze 10 mL</td><td>Pentaferte</td><td>00202250E14</td><td></td></tr><tr><td>Spritze 5 mL</td><td>Pentaferte</td><td>00202250E12</td><td></td></tr><tr><td>Spritze Omnican Insulin 1 mL</td><td>Braun</td><td>9151125S</td><td></td></tr><tr><td>Gewebe adesiv</td><td>3M Vetbond</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Transwell-Einsätze 8 & Mikro; m pore&nbsp;</td><td>Falke</td><td>353097</td><td></td></tr><tr><td>Transwell Matrigel Einsätze 8 & micro; m pore&nbsp;</td><td>Corning</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,5%), kein Phenolrot</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Vivaspin 20 Zentrifugalkonzentrator MWCO 10.000 Da&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z614602</td><td></td></tr></tbody></table>

krebsassoziierte fibroblasten aus mammatumoren der maus als werkzeuge für molekulare und computergestützte studien

Cancer-Associated Fibroblasts from Mouse Mammary Tumors as Tools for Molecular and Computational Studies

In-vitro-Bewertung der Aktivitäten von CAFs Der Beitrag von krebsassoziierten Fibroblasten (CAFs) aus Mammatumoren zu den aggressiven Merkmalen von Brustkrebs (BC) wurde mit immortalisierten CAFs (iCAFs) untersucht, die gemäß Schritt 3 erzeugt wurden. iCAFs wurden wie in Schritt 6 beschrieben superaktiviert und dann in sDMEM ausgehungert, um ihr CM zu sammeln, das zur Behandlung von 4T1-Zellen für 48 Stunden verwendet wurde (siehe Schritt 7.1). Im Anschluss an diese Behandlun...

Krebsassoziierte Fibroblasten aus Mammatumoren der Maus als Werkzeuge für molekulare und computergestützte Studien

A compelling body of research has confirmed the critical role of the tumor microenvironment (TME) in the growth and aggressiveness of breast cancer (BC). ...

cancer-associated-fibroblasts-from-mouse-mammary-tumors-as-tools-for

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

In diesem Bericht zeigen wir ein System zur Isolierung und Kultur Spenderzellen von der Maus Brustdrüse und orthotop Transplantation dieser Zellen in Empfängermäuse zu Stromatumoren analysieren: epitheliale Interaktionen während Mammatumor Entwicklung.

Mammary Transplantation von Stromazellen und Carcinoma Cells in C57BL/6J-Mäuse

Karzinom-assoziierte Fibroblasten (CAF) reichen in Myofibroblasten innerhalb des Tumorstroma, spielen eine wichtige Rolle bei der Vertreibung der Tumorprogression. Wir entwickelten ein coimplantation Tumor xengraft Modell für experimentell erzeugen CAF von der menschlichen Brustdrüse Fibroblasten. Das Protokoll beschreibt, wie CAF Myofibroblasten, dass die Fähigkeit zur Tumorentstehung fördern erwerben zu etablieren.

Experimentelle Erzeugung von Karzinom-assoziierte Fibroblasten (CAF) von menschlichen Brustkrebszellen Fibroblasten

Krebs Fibroblasten (CAF) zu erleichtern Tumorinitiation, Wachstum und die Progression durch signalisiert, dass es fördert die Proliferation, Angiogenese und Entzündung. Hier beschreiben wir ein Verfahren, um reine Populationen normalen Fibroblasten und CAF aus frischen Maus und menschlichen Geweben isolieren durch Zellsortierung unter Verwendung PDGFRα als Oberflächen-Marker.

Isolation von Normal und Krebs-assoziierte Fibroblasten von Fresh Gewebe durch Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Hier beschreiben wir das Modell und den Ansatz zur Untersuchung der Funktionen von Lungenalveolarmakrophagen bei der Metastasierung von Krebs. Um die Rolle dieser Zellen bei der Metastasierung zu demonstrieren, wurde das syngene (4T1) Modell des Brustkrebses in Verbindung mit der Depletion von Alveolarmakrophagen mit Clodronat-Liposomen verwendet.

Untersuchung der Rolle von Alveolarmakrophagen in Metastasierung von Brustkrebs

Ein Protokoll zur Co-Injektion von Krebszellen und Fibroblasten und zur Überwachung des Tumorwachstums im Laufe der Zeit wird bereitgestellt. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um die molekularen Grundlagen für die Rolle von Fibroblasten als Regulatoren des Tumorwachstums zu verstehen.

Ein Mausmodell zur Untersuchung der Rolle krebsassoziierter Fibroblasten beim Tumorwachstum

Diese Arbeit zielt darauf ab, ein Protokoll für die Isolierung und Kultur von primären krebsassoziierten Fibroblasten aus einem syngenen murinen Modell von dreifach negativem Brustkrebs und deren Anwendung für die präklinische Untersuchung neuartiger Nanopartikel bereitzustellen, die auf die Tumormikroumgebung abzielen.

Isolierung primärer krebsseziensässiger Fibroblasten aus einem syngenen murinen Modell von Brustkrebs zur Untersuchung gezielter Nanopartikel

Multizelluläre 3D-Tumorsphäroide wurden mit Lungenadenokarzinomzellen, Fibroblasten und Monozyten hergestellt, gefolgt von der Isolierung von Krebs-assoziierten Fibroblasten (CAFs) aus diesen Sphäroiden. Isolierte CAFs wurden mit normalen Fibroblasten verglichen, um die mitochondriale Gesundheit zu beurteilen, indem das mitochondriale Transmembranpotential, reaktive Sauerstoffspezies und enzymatische Aktivitäten untersucht wurden.

Bewertung der mitochondrialen Gesundheit in krebsassoziierten Fibroblasten, die aus 3D-multizellulären Lungentumor-Sphäroiden isoliert wurden

Wir entwickelten eine Methode zur erfolgreichen Entfernung, Verarbeitung, Sektion und Flecken, zur histopathologischen Auswertung, Mammagewebe, das ursprünglich auf Rutschen als ganze Reittiere fixiert worden war. Diese Methode kann die Sammlung und Auswertung von Brustdrüsen-Vollbehältern in Reproduktions- und Entwicklungsprüfungsstudien fördern.

Sektion Mammary Gland Ganze Mounts für Läsion Identifizierung

Ziel dieser Methodik ist es, Krebsstammzellen (CSC) in Krebszelllinien und primären menschlichen Tumorproben mit dem kugelbildenden Protokoll auf robuste Weise zu identifizieren, wobei funktionelle Assays und phänotypische Charakterisierung mit Durchflusszytometrie und western Fleck.

Beschaffung von Krebsstammzellkugeln aus gynäkologischen und Brustkrebstumoren

Ziel dieses Protokolls ist es, ein 3D-In-vitro-Modell zu etablieren, um die Differenzierung krebsassoziierter Fibroblasten (CAFs) in einer tumormassenähnlichen Umgebung zu untersuchen, die in verschiedenen Analysesystemen wie Immunfluoreszenz, Transkription behandelt werden kann. Analyse und Lebenszellbildung.

Ein 3D-Spheroid-Modell als physiologischeres System für krebsassoziierte Fibroblasten Differenzierung und Invasion In Vitro-Studien

Erfahren Sie molekulare und computergestützte Methoden zur Untersuchung krebsassoziierter Fibroblasten in Mammatumoren der Maus. Diese Techniken ermöglichen die Analyse von Tumor-Stroma-Interaktionen und die Identifizierung therapeutischer Ziele.

Krebsassoziierte Fibroblasten aus Mammatumoren der Maus als Werkzeuge für molekulare und computergestützte Studien

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