Name: Isolierung, Kultur und Charakterisierung von Prostatakrebs-assoziierten Fibroblasten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung, Kultur und Charakterisierung von Prostatakrebs-assoziierten Fibroblasten aus Prostatektomiepräparaten. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Tumor-Stroma-Interaktionen und therapeutischen Zielen.

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<table><tbody><tr><td>12-Well-Platte</td><td>Sarstedt</td><td>833921</td><td></td></tr><tr><td>24-Well-Platte</td><td>Sarstedt</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>6-Well-Platte</td><td>Sarstedt</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Platte</td><td>Sarstedt</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>Anti-GAPDH Maus mAb (6C5)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CB1001</td><td>Quelle: Maus; Verdünnung für WB: 1:1000</td></tr><tr><td>aSMA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Nr. A5228&nbsp;</td><td>Quelle: Maus; Verdünnung für WB: 1:3000</td></tr><tr><td>Caveolin</td><td>Zellsignaltechnik</td><td>CST3267</td><td>Quelle: Kaninchen; Verdünnung für WB: 1:1000</td></tr><tr><td>CD31-VioBlue</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-119-980</td><td>Durchflusszytometrie Ab, Marker für Endothelzellen</td></tr><tr><td>CD326-PE (EpCAM)</td><td>Milteny Biotec</td><td>130113-826</td><td>Durchflusszytometrie Ab, Epithelzellmarker</td></tr><tr><td>CD45-FITC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-110769</td><td>Durchflusszytometrie Ab, Pan-Leukozyten-Marker</td></tr><tr><td>CD90-APC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-114-903</td><td>Durchflusszytometrie Ab, Fibroblasten-Marker</td></tr><tr><td>Kollagen VI (COL6A1)</td><td>Abcam (Englisch)</td><td>Artikel-Nr.: ab182744</td><td>Quelle: Kaninchen; Verdünnung für WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Konisches Röhrchen 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>Konisches Röhrchen 50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Cryopure 2 mL Mikroröhrchen</td><td>Sarstedt</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>Kulturplatte mit 100 mm Durchmesser</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Kulturplatte mit 100 mm Durchmesser</td><td>Corning</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>Kulturplatte mit 60 mm Durchmesser</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid (DMSO)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Nr. D8418</td><td>Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modifizierter Adler" s Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>FAP</td><td>Abcam (Englisch)</td><td>AB53066</td><td>Quelle: Kaninchen; Verdünnung für WB: 1:500</td></tr><tr><td>FcR Blockierungsreagenz, menschlich</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-059-901</td><td>Fc-Blocker</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Gefilterte Spitzen 10 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>Gefilterte Spitzen 100 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>Gefilterte Spitzen 1000 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>Gefilterte Spitzen 20 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>Gefilterte Spitzen 200 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,20 &micro; M&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>FSP1/S100A4</td><td>Zellsignaltechnik</td><td>D9F9D (13018)</td><td>Quelle: Kaninchen; Verdünnung für WB: 1:2000</td></tr><tr><td>IL6</td><td>Abklonale Technologie</td><td>Nr. A0286</td><td>Quelle: Kaninchen; Verdünnung für WB: 1:1000</td></tr><tr><td>BildJ</td><td>Nationales Institut für Gesundheit</td><td>Version 1.53c</td><td>Software zur Bildanalyse</td></tr><tr><td>Incucyte ImageLock 96-Well-Platte</td><td>Sartorisch</td><td>BA-04857</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte&reg; SX5</td><td>Sartorisch</td><td>SX5</td><td>Instrument zur Analyse lebender Zellen</td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 Transfektionsreagenz</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11668019</td><td>Kationen-Lipid-vermitteltes Transfektionsreagenz</td></tr><tr><td>MACS&reg; Lösung zur Aufbewahrung von Gewebe</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplatten-Reader (600 nm Absorption)</td><td>Promega</td><td>GM3500</td><td></td></tr><tr><td>Mikroröhrchen 1,5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Ncad</td><td>Abcam (Englisch)</td><td>AB18203</td><td>Quelle: Kaninchen; Verdünnung für WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Nitro Blue Tetrazolium&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Nr. N5514</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>HS234526B</td><td></td></tr><tr><td>pBABE-puro-hTERT</td><td>Addgene</td><td>1771</td><td>Bei -20 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>pCL-Ampho</td><td>Novus Biological&nbsp;</td><td>NBP2-29541</td><td>Bei -20 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>PDGFRB</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-432</td><td>Quelle: Kaninchen; Verdünnung für WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (PS, 10.000 &mu; g/mL)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Phasenkontrast-Mikroskop&nbsp;</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Selbstgemacht</td><td></td><td>NaCl, 137 mM; KCl, 2,7 mM; Na2HPO4, 10 mM; KH2PO4, 1,8 mM. Autoklav und Lagerung bei RT</td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin-Lösung</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Nr. P8920</td><td>Bei 4 Grad lagern; C, Verwendung in einer biologischen Haube</td></tr><tr><td>Puromycin-Dihydrochlorid</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Nr. P8833</td><td></td></tr><tr><td>Secura Semi Micro Waage</td><td>Schneidermuskel</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>Serologische Pipette 10 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>Serologische Pipette 2 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>Serologische Pipette 25 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>Serologische Pipette 5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>STATISTIK3</td><td>CST</td><td>9139</td><td>Quelle: Maus; Verdünnung für WB: 1:1000</td></tr><tr><td>STAT3 Y705</td><td>CST</td><td>9131</td><td>Quelle: Kaninchen; Verdünnung für WB: 1:1000</td></tr><tr><td>stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>MZ125</td><td></td></tr><tr><td>Spritze 10 mL</td><td>Pentaferte</td><td>00202260D12</td><td></td></tr><tr><td>TermoMischer</td><td>Eppendorph</td><td>22331</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,5%), kein Phenolrot</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Schwung</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-6260</td><td>Quelle: Maus; Verdünnung für WB: 1:2000</td></tr><tr><td>Vivaspin 20 Zentrifugalkonzentrator&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z614602</td><td>MWCO 10.000 Da&nbsp;</td></tr><tr><td>Wagner Schere</td><td>2Biol</td><td>14070-12</td><td></td></tr></tbody></table>

isolierung, kultur und charakterisierung von prostatakrebs-assoziierten fibroblasten

Isolation, Culture, and Characterization of Prostate Cancer-Associated Fibroblasts

CAF- und NF-Paare von 7 hochgradigen PCa-Patienten wurden mit diesem Protokoll erfolgreich isoliert. Das Alter der Patienten bei der Operation und die Gleason-Werte sind in Tabelle 3 zusammengefasst. Um die Reinheit der abgeleiteten Fibroblastenpopulationen zu bewerten, wurden zwei primäre CAFs und NFs abgetrennt und mit den angegebenen fluoreszierenden Antikörpern oder mit Propidiumiodid gefärbt, um die Apoptose zu beurteilen. Repräsentative Ergebnisse der anschließende...

Isolierung, Kultur und Charakterisierung von Prostatakrebs-assoziierten Fibroblasten

Tumor stroma can be actively shaped by tumor cells to adopt pro-tumorigenic properties, making it a focal point of cancer research. Among the stromal ...

isolation-culture-characterization-prostate-cancer-associated

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Krebs Fibroblasten (CAF) zu erleichtern Tumorinitiation, Wachstum und die Progression durch signalisiert, dass es fördert die Proliferation, Angiogenese und Entzündung. Hier beschreiben wir ein Verfahren, um reine Populationen normalen Fibroblasten und CAF aus frischen Maus und menschlichen Geweben isolieren durch Zellsortierung unter Verwendung PDGFRα als Oberflächen-Marker.

Isolation von Normal und Krebs-assoziierte Fibroblasten von Fresh Gewebe durch Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Die Isolierung von Krebsstammzellen (KSZ), die direkt aus menschlichen Geweben ist Voraussetzung für ihre biologische Charakterisierung. Dieses Manuskript beschreibt eine Methode zur Isolierung von Prostata-Krebsstammzellen aus menschlichen Geweben, aber auch mit Tipps zur Fehlerbehebung schwierige Schritte.

Isolierung von Krebs Stammzellen aus menschlichen Prostatakrebs-Proben

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Co-Kultur in drei Dimensionen, das nützlich ist, um multizelluläre Interaktionen und extrazelluläre Matrix-abhängige Modulation des Verhaltens von Krebszellen zu untersuchen. In diesem experimentellen Modell werden Krebszellen auf Kollagengelen kultiviert, die in humane krebsassoziierte Fibroblasten eingebettet sind.

Dreidimensionale Co-Kultur-Modell für Tumor-Stroma-Interaktion

Das Verhalten von Fibroblasten liegt einem Spektrum klinischer Entitäten zugrunde, aber sie bleiben schlecht charakterisiert, hauptsächlich aufgrund ihrer inhärenten Heterogenität. Die traditionelle Fibroblastenforschung beruht auf In-vitro-Manipulation, um das Verhalten von Fibroblasten in vivo zu maskieren. Wir beschreiben ein FACS-basiertes Protokoll für die Isolierung von Hautfibroblasten der Maus, das keine Zellkultur erfordert.

Murine Hautfibroblasten-Isolation durch FACS

Hier stellen wir eine Methode zur Etablierung eines schnellen in vitro Systems vor, das die dreidimensionale Kultivierung und anschließende luminale Differenzierung von primären Prostataepithelzellen unterstützt.

Ein Rapid-Filtereinsatz-basierte 3D-Kultursystem für die primäre Prostata Zelldifferenzierung

Dieses Manuskript beschreibt ein FACS-basiertes Protokoll zur Isolierung von papillären und Netzfibroblasten von der menschlichen Haut. Sie umgeht in der vitro-Kultur, die mit dem häufig verwendeten Isolationsprotokoll über Explantationskulturen unvermeidlich war. Die ausstrahlenden fibroblasten Untersätze sind funktional unterscheidbar und zeigen eine differenzierte Genexpression und Lokalisierung innerhalb der Dermis.

Isolierung von papillären und retikulären Fibroblasten aus der menschlichen Haut durch Fluoreszone-aktivierte Zellsortierung

Wir präsentieren ein Protokoll, um primäre erwachsene Fibroblasten auf einfache, schnelle und zuverlässige Weise zu isolieren, die von Anfängern (z. B. Studenten) durchgeführt werden können. Das Verfahren kombiniert enzymatische Gewebeverdauung und mechanische Agitation mit Ultraschallwellen, um primäre Fibroblasten zu erhalten. Das Protokoll kann leicht an spezifische experimentelle Anforderungen (z.B. menschliches Gewebe) angepasst werden.

Ultraschall-augmented Primary Adult Fibroblast Isolation

Unter Verwendung menschlicher primärer Prostataepithelzellen berichten wir über eine neuartige biomarkerfreie Methode der funktionellen Charakterisierung von stammähnlichen Zellen durch einen sphäroidbasierten Labelretentionstest. Für die Beschriftung von BrdU-, CFSE- oder Far Red 2D-Zellen wird ein Schritt-für-Schritt-Protokoll beschrieben. dreidimensionale Sphäroidbildung; kennzeichnungserhaltende stammähnliche Zellidentifikation durch Immunzytochemie; isolierung durch FACS.

Isolierung von Stammzellen aus 3-dimensionalen Sphäroidkulturen

Die Gewinnung einer reinen Population von Fibroblasten ist entscheidend für die Untersuchung ihrer Rolle bei der Wundreparatur und Fibrose. Beschrieben ist eine detaillierte Methode, um Fibroblasten und Myofibroblasten von unverletzten und verletzten Mausherzen zu isolieren, gefolgt von der Charakterisierung ihrer Reinheit und Funktionalität durch Immunfluoreszenz, RTPCR, Fluoreszenz-unterstützte Zellsortierung und Kollagen-Gel-Kontraktion.

Isolierung und Charakterisierung von adulten Herz-Fibroblasten und Myofibroblasten

Diese Arbeit zielt darauf ab, ein Protokoll für die Isolierung und Kultur von primären krebsassoziierten Fibroblasten aus einem syngenen murinen Modell von dreifach negativem Brustkrebs und deren Anwendung für die präklinische Untersuchung neuartiger Nanopartikel bereitzustellen, die auf die Tumormikroumgebung abzielen.

Isolierung primärer krebsseziensässiger Fibroblasten aus einem syngenen murinen Modell von Brustkrebs zur Untersuchung gezielter Nanopartikel

Multizelluläre 3D-Tumorsphäroide wurden mit Lungenadenokarzinomzellen, Fibroblasten und Monozyten hergestellt, gefolgt von der Isolierung von Krebs-assoziierten Fibroblasten (CAFs) aus diesen Sphäroiden. Isolierte CAFs wurden mit normalen Fibroblasten verglichen, um die mitochondriale Gesundheit zu beurteilen, indem das mitochondriale Transmembranpotential, reaktive Sauerstoffspezies und enzymatische Aktivitäten untersucht wurden.

Bewertung der mitochondrialen Gesundheit in krebsassoziierten Fibroblasten, die aus 3D-multizellulären Lungentumor-Sphäroiden isoliert wurden

Erfahren Sie die Isolierung, Kultur und Charakterisierung von Prostatakrebs-assoziierten Fibroblasten aus Prostatektomiepräparaten. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Tumor-Stroma-Interaktionen und therapeutischen Zielen.

Isolierung, Kultur und Charakterisierung von Prostatakrebs-assoziierten Fibroblasten

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