Name: Messung von zyklischem Guanosinmonophosphat (cGMP) in festen Geweben mittels Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Erfahren Sie die Messung von zyklischem GMP in festen Geweben mittels kompetitivem ELISA. Diese Methode ermöglicht die Quantifizierung von cGMP-Konzentrationen und liefert Einblicke in Stickstoffmonoxid-Signalwege.

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<ol><li>Dierks, E. A., Burstyn, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+%28NO%29%2C+the+only+nitrogen+monoxide+redox+form+capable+of+activating+soluble+guanylyl+cyclase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide (NO), the only nitrogen monoxide redox form capable of activating soluble guanylyl cyclase.</a> Biochem Pharmacol. 51 (12), 1593-1600 (1996).</li>
<li>Koglin, M., Behrends, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+domain+of+the+alpha1+subunit+of+soluble+guanylyl+cyclase+is+necessary+for+activation+of+the+enzyme+by+nitric+oxide+and+YC-1+but+is+not+involved+in+heme+binding%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A functional domain of the alpha1 subunit of soluble guanylyl cyclase is necessary for activation of the enzyme by nitric oxide and YC-1 but is not involved in heme binding.</a> J Biol Chem. 278 (14), 12590-12597 (2003).</li>
<li>Olson, L. J., Knych, E. T., Herzig, T. C., Drewett, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+guanylyl+cyclase+inhibitor+reverses+nitric+oxide-induced+vasorelaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Selective guanylyl cyclase inhibitor reverses nitric oxide-induced vasorelaxation.</a> Hypertension. 29 (1), 254-261 (1997).</li>
<li>Bailey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+supplementation+reduces+the+O2+cost+of+low-intensity+exercise+and+enhances+tolerance+to+high-intensity+exercise+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate supplementation reduces the O2 cost of low-intensity exercise and enhances tolerance to high-intensity exercise in humans.</a> J Appl Physiol (1985). 107 (4), 1144-1155 (2009).</li>
<li>Vanhatalo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+effects+of+dietary+nitrate+supplementation+on+blood+pressure+and+the+physiological+responses+to+moderate-intensity+and+incremental+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic effects of dietary nitrate supplementation on blood pressure and the physiological responses to moderate-intensity and incremental exercise.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 299 (4), R1121-R1131 (2010).</li>
<li>Qin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+role+of+nitric+oxide+in+complement-mediated+activation+of+platelets+from+mcd59a+and+mcd59b+double-knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hematol%22%5BJournal%5D)">Balancing role of nitric oxide in complement-mediated activation of platelets from mcd59a and mcd59b double-knockout mice.</a> Am J Hematol. 84 (4), 221-227 (2009).</li>
<li>Radomski, M. W., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+l-arginine%2Fnitric+oxide+pathway+present+in+human+platelets+regulates+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">An l-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation.</a> PNAS. 87 (13), 5193-5197 (1990).</li>
<li>Thomas, D. D., Liu, X., Kantrow, S. P., Lancaster, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+lifetime+of+nitric+oxide%3A+Implications+for+the+perivascular+dynamics+of+NO+and+O2%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">The biological lifetime of nitric oxide: Implications for the perivascular dynamics of NO and O2.</a> PNAS. 98 (1), 355-360 (2001).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rat+skeletal+muscle+homogenates+for+nitrate+and+nitrite+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of rat skeletal muscle homogenates for nitrate and nitrite measurements.</a> J Vis Exp. (173), e62427(2021).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+roles+of+nitrate+and+nitrite+in+nitric+oxide+metabolism+in+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Potential roles of nitrate and nitrite in nitric oxide metabolism in the eye.</a> Sci Rep. 10 (1), 13166(2020).</li>
<li>Srihirun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+uptake+and+metabolism+in+human+skeletal+muscle+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">Nitrate uptake and metabolism in human skeletal muscle cell cultures.</a> Nitric Oxide. 94, 1-8 (2020).</li>
<li>Montoliu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+nitric+oxide+and+atrial+natriuretic+peptide+changes+with+altered+cGMP+homeostasis+in+liver+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Correlation of nitric oxide and atrial natriuretic peptide changes with altered cGMP homeostasis in liver cirrhosis.</a> Liver Int. 25, 787-795 (2005).</li>
<li>Origlia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+cGMP+inversely+correlates+with+age+in+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol+Invest%22%5BJournal%5D)">Platelet cGMP inversely correlates with age in healthy subjects.</a> J Endocrinol Invest. 27 (2), RC1-RC4 (2004).</li>
<li>Calamera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fret-based+cyclic+GMP+biosensors+measure+low+cGMP+concentrations+in+cardiomyocytes+and+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Fret-based cyclic GMP biosensors measure low cGMP concentrations in cardiomyocytes and neurons.</a> Commun Biol. 2, 394(2019).</li>
<li>Rutkowski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+cGMP+signaling+shows+pronounced+differences+between+glomerular+endothelial+cells+and+podocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of cGMP signaling shows pronounced differences between glomerular endothelial cells and podocytes.</a> Sci Rep. 14, 26099(2024).</li>
<li>Straub, A. C., Beuve, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primer+for+measuring+cGMP+signaling+and+cGMP-mediated+vascular+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">A primer for measuring cGMP signaling and cGMP-mediated vascular relaxation.</a> Nitric Oxide. 117, 40-45 (2021).</li>
<li>Huang, K. T., Lin, T. J., Hsu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+cyclic+GMP+concentration+using+a+gold+nanoparticle-modified+optical+fiber%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Determination of cyclic GMP concentration using a gold nanoparticle-modified optical fiber.</a> Biosens Bioelectron. 26 (1), 11-15 (2010).</li>
<li>Cyclic gmp elisa kit. , 
 <a target="_blank" href="https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf">https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf</a> (2024).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+metabolism+in+porcine+ocular+tissues+determined+using+15N-labeled+sodium+nitrate+supplementation%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate metabolism in porcine ocular tissues determined using 15N-labeled sodium nitrate supplementation.</a> Nutrients. 16 (8), 1154(2024).</li>
<li>Cgmp enzyme immunoassay kit, direct technical bulletin. , 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V">https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V</a> (2025).</li>
<li>Cyclic gmp competitive elisa lysate and homogenate samples. , 
 <a target="_blank" href="https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf">https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf</a> (2025).</li>
<li>Hamad, A. M., Range, S., Holland, E., Knox, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cGMP+by+soluble+and+particulate+guanylyl+cyclases+in+cultured+human+airway+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cGMP by soluble and particulate guanylyl cyclases in cultured human airway smooth muscle.</a> Am J Physiol. 273 (4), L807-L813 (1997).</li>
<li>Mo, E., Amin, H., Bianco, I. H., Garthwaite, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+a+cellular+nitric+oxide%2FcGMP%2Fphosphodiesterase-5+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Kinetics of a cellular nitric oxide/cGMP/phosphodiesterase-5 pathway.</a> J Biol Chem. 279 (25), 26149-26158 (2004).</li>
<li>Corbin, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B3h%5Dsildenafil+binding+to+phosphodiesterase-5+is+specific%2C+kinetically+heterogeneous%2C+and+stimulated+by+cGMP%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">[3h]sildenafil binding to phosphodiesterase-5 is specific, kinetically heterogeneous, and stimulated by cGMP.</a> Mol Pharmacol. 63 (6), 1364-1372 (2003).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL BD durchsichtige Spritze zum Einnehmen</td><td>Becton Dickinson</td><td>50382903052177</td><td></td></tr><tr><td>14 mL Reagenzglas mit rundem Boden</td><td>Falke</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>2,0 ml Mikroröhrchen, sortiert</td><td>Olympus Kunststoffe</td><td>24-283A</td><td></td></tr><tr><td>30-300 & Mikro; L Mehrkanalpipette&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Essigsäureanhydrid (im cGMP-Kit)</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>400031</td><td>98% pure Hazard: Entzündlich, Korrosiv: schwere Verbrennungen der Haut, Augenschäden, Akute Toxcitity Sichere Handhabung: Von Zündquellen fernhalten, in belüfteten Räumen arbeiten, Handschuhe tragen</td></tr><tr><td>cGMP Acetylcholinesterase Tracer (im cGMP-Kit)</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>481020</td><td>zweibasisches Kaliumphosphat, Natriumchlorid &nbsp; Kaliumphosphat einbasisch, Rinderalbumin, Natriumazid, EDTA, cGMP AChE tracer Gefahr: Gesundheitsgefahr: Organtoxizität bei wiederholter Exposition, Ätzend: Augenschäden, Haut- und Atemwegsreizend Sichere Handhabung: Arbeiten in belüftetem Bereich, Tragen Sie Handschuhe</td></tr><tr><td>cGMP ELISA Antiserum (im cGMP-Kit)</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>481022</td><td>zweibasisches Kaliumphosphat, Natriumchlorid &nbsp; Kaliumphosphat monobasisch, Rinderalbumin, &nbsp; Natriumazid, EDTA, Kaninchen Anti-cGMP polyklonales Antiserum Hazard: Gesundheitsgefahr: Organtoxizität bei wiederholter Exposition, Ätzend: Augenschäden, Haut- und Atemwegsreizend, akute Toxizität Sichere Handhabung: Arbeiten Sie in belüfteten Bereichen, tragen Sie Handschuhe</td></tr><tr><td>cGMP ELISA-Standard (im cGMP-Kit)</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>481024</td><td>zweibasisches Kaliumphosphat, Natriumchlorid &nbsp; Kaliumphosphat monobasisch, Rinderalbumin, &nbsp; Natriumazid, EDTA, cGMP-Standard Hazard: Gesundheitsgefahr: Organtoxizität bei wiederholter Exposition, Ätzend: Augenschäden, Haut- und Atemwegsreizend Sichere Handhabung: Arbeiten Sie in belüfteten Bereichen, tragen Sie Handschuhe</td></tr><tr><td>Zyklisches GMP-ELISA-Kit</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>581021</td><td></td></tr><tr><td>ELISA-Puffer-Konzentrat 10X (im cGMP-Kit)</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>400060</td><td>1 M Phosphat, 1 % BSA, 4 M Natriumchlorid, 10 mM EDTA, 0,1 % Natriumazid Hazard: Gesundheitsgefahr: Organtoxizität bei wiederholter Exposition, Ätzend: Augenschäden, Haut- und Atemwegsreizend Sichere Handhabung: Arbeiten Sie in einem belüfteten Bereich, lagern Sie in einem Behälter mit verschließbarem Deckel, tragen Sie Handschuhe</td></tr><tr><td>ELISA-Reagenz-Reservoir</td><td>Pierce (jetzt Thermo Fisher Scientific)</td><td>15075</td><td></td></tr><tr><td>Ellman-Reagenz (im cGMP-Kit)</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>400050</td><td>Kaliumphosphat zweibasisch, Natriumchlorid, Kaliumphosphat monobasisch, Acetylthiocholin (iodid), 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoesäure) Gefahr: Akute Toxizität, Gesundheitsgefahr: Organtoxizität, Ätzend: Augenschäden, Hautreizend, Reizstoff für die Atemwege Sichere Handhabung: Arbeiten Sie in einem belüfteten Bereich, tragen Sie Handschuhe</td></tr><tr><td>Salzsäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320331</td><td><stark>Gefahr</stark>: Ätzend: korrodiert Metall, verbrennt schwer die Haut, Augenschäden, Reizstoff für die Atemwege <stark>Sichere Handhabung</stark>: Arbeiten Sie in einem belüfteten Bereich, tragen Sie Handschuhe</td></tr><tr><td>Flüssigstickstoff</td><td>Roberts Sauerstoff</td><td></td><td>Nitrogen Hazard: Compressed Gas: Gefahr von kryogenen Verbrennungen, Frosbite, Erstickungsgefahr Sichere Handhabung: Arbeiten Sie in einem belüfteten Bereich, tragen Sie Handschuhe</td></tr><tr><td>Maus Anti-Kaninchen IgG beschichtete Platte (im cGMP-Kit)</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>400006</td><td> Gefahr: Keine</td></tr><tr><td>Neue Classic MF Balance</td><td>Mettler Toledo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Orbitalschüttler&nbsp;</td><td>Stovall Life Science Inc. (jetzt IBI Scientific)</td><td>15-453-211 (abweichend)</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis Company, Inc.</td><td>3023-4526 (variiert)</td><td></td></tr><tr><td>Polysorbat 20 (im cGMP-Kit)</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>400035</td><td> Gefahr: Keine</td></tr><tr><td>Kaliumhydroxid (im cGMP-Kit)</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>400029</td><td>85% rein <stark>Gefahr</stark>: Ätzend: korrodiert Metalle und Haut, Augenschäden, akute Toxizität <stark>Sichere Handhabung</stark>: Arbeiten Sie in einem belüfteten Bereich, tragen Sie Handschuhe</td></tr><tr><td>Precellys Evolution Homogenisator</td><td>Bertin Technologies</td><td>PE000062-PEVO0-A</td><td></td></tr><tr><td>Precellys Lysing Kit Homogenisierung von Hartgewebe</td><td>Bertin Technologies</td><td>P000911-LYSK0-A</td><td></td></tr><tr><td>Sense Mikroplatten-Reader</td><td>HIDEX</td><td>425-301</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall Legend Micro 17R Zentrifuge</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>75002441</td><td></td></tr><tr><td>Gewebe-Pulverisierer</td><td>Zellenbrecher</td><td>Cellcrusher-Bausatz</td><td></td></tr><tr><td>Vortex Genie 2</td><td>Wissenschaftliche Industrie&nbsp;</td><td>SI-0246</td><td></td></tr><tr><td>Waschflasche</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z423092</td><td></td></tr><tr><td>Waschpuffer Konzentrat 400X (im cGMP-Kit)</td><td>Cayman Chemieunternehmen</td><td>400062</td><td>Kaliumphosphat zweibasisch, Kaliumphosphat einbasisch, Wasser <stark>Gefahr</stark>: Ätzend: Augenschäden, akute Toxizität, hautreizend, Organtoxizität <stark>Sichere Handhabung</stark>: Arbeiten Sie in einem belüfteten Bereich, tragen Sie Handschuhe</td></tr></tbody></table>

messung von zyklischem guanosinmonophosphat (cgmp) in festen geweben mittels competitive enzyme-linked immunosorbent assay (elisa)

Measurement of Cyclic Guanosine Monophosphate (cGMP) in Solid Tissues using Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Yorkshire-Hausschweine, die mit Natriumchlorid (0,15 mmol/kg) oder 15N-markiertem Nitrat (0,15 mmol/kg) behandelt wurden, das einmal täglich an fünf aufeinanderfolgenden Tagen als Bolus in der Nahrung verabreicht wurde, wurden vor der Gewebeentnahme mit einer Heparinnatriumlösung (0,9 % Natriumchlorid) perfundiert; Alle Details zur Sammlung wurden zuvor veröffentlicht19. Die cGMP-Konzentrationen in den Gesäßmuskeln und in der Leber von vier Yorkshire-Hausschweinen wurden gemäß dem beschriebenen ELISA-Protokoll gemessen. Das Lebergewebe wurde in einem Verdünnungsverhältnis von 1:5 und die Gesäßmuskulatur in einem Verdünnungsverhältnis von 1:10 mit 0,1 N Salzsäure (HCl) verdünnt, um Proteine auszufällen. Die HCl-verdünnten Homogenate wurden acetyliert und dann mit ELISA-Puffer in einem Verdünnungsverhältnis von 1:2 und 1:3 sowohl für Leber- als auch für Gesäßmuskelproben verdünnt. Die cGMP-Konzentrationen wurden wie oben beschrieben gemessen. Die Absorptionen wurden in Picomole cGMP pro Milliliter der vorbereiteten Probe und dann in Nanomol cGMP pro Gramm Gewebe (nmol/g Gewebe) umgewandelt, wie im obigen Protokoll angegeben.
Die in Lebergeweben gemessenen cGMP-Konzentrationen führten unter den oben genannten Bedingungen zu optimalen experimentellen Ergebnissen. Die cGMP-Konzentrationen in der Kontroll- und in der mit Nitrat behandelten Gruppe betragen in der Schweineleber 0,0202 nmol/g ± 0,003 nmol/g Gewebe bzw. 0,0364 nmol/g ± 0,011 nmol/g Gewebe (Abbildung 3). Mehrere Werte bestätigen die Zuverlässigkeit der Ergebnisse. Die Extinktionen der B0-Wells mit abgezogenen Leerproben, die zwischen 0,466 und 0,475 liegen, liegen im Bereich von 0,3 AE bis 1,0 AE, was eine ausreichende Mikroplattenentwicklung mit dem Ellman-Reagenz bestätigt. Die hohe Qualität der Standardkurve zeigt sich sowohl in der inkrementellen Erhöhung der Extinktionen von Standard 1 auf Standard 8 als auch in der Linearität der Standardkurve, die durch einen Bestimmungskoeffizienten von 0,99 verifiziert wird. Der Prozentsatz <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> für jede gemessene Vertiefung (31,5 %-71,2 %) liegt zwischen 20 % und 80 %, was bestätigt, dass alle Proben auf die Standardkurve fallen. Proben, die die angegebenen Eigenschaften aufweisen, sind für die Interpretation geeignet.
Die im Gesäßmuskelgewebe gemessenen cGMP-Konzentrationen führten zu suboptimalen experimentellen Ergebnissen. Die suboptimale Markierung wird den Ergebnissen des Gesäßmuskels zugewiesen, da die meisten Prozentwerte <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> der Gesäßmuskelvertiefungen (3,69 %-27,3 %) unter 20 % fielen, was darauf hindeutet, dass mehr verdünnte Proben benötigt wurden, damit die Absorptionen auf die Standardkurve fielen. Die cGMP-Konzentrationen in der Kontrollgruppe und in der mit Nitrat behandelten Gruppe im Gesäßmuskel des Schweins betragen 1,22 nmol/g ± 0,49 nmol/g Gewebe bzw. 0,732 nmol/g ± 0,18 nmol/g Gewebe (Grafik nicht gezeigt). Die Proben des Gesäßmuskels teilen sich die Absorptionen der B0-Vertiefungen und -Standards der Leberproben. Die Verwendung dieser suboptimalen Stichproben kann zu falschen Schlussfolgerungen führen. Daher ist die Aufbereitung von stärker verdünnten Proben und eine erneute Messung der cGMP-Konzentrationen erforderlich.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2.jpg"> 
Abbildung 3: cGMP-Konzentration im Lebergewebe. Die durchschnittliche cGMP-Konzentration von Schweineleber, die mit Natriumchlorid (0,15 mmol/kg) oder 15N-markiertem Nitrat (0,15 mmol/kg) behandelt wurde, in nmol/g Gewebe. n = 4; Die Fehlerbalken zeigen die Standardabweichung an. Die Daten wurden mit dem Welch-t-Test analysiert; NS steht für No Significance. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Messung von zyklischem Guanosinmonophosphat (cGMP) in festen Geweben mittels Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

A major pathway that produces cyclic guanosine monophosphate (cGMP) is the nitric oxide (NO)-cGMP pathway. In this pathway, NO stimulates the catalytic ...

measurement-cyclic-guanosine-monophosphate-cgmp-solid-tissues-using

Research

Forschung

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Biology

Biologie

Die Untersuchung in vitro β-Zell-Funktion mit isolierten Maus-Langerhans-Inseln ist ein wichtiger Bestandteil in der Studie der Diabetes Pathophysiologie und Therapie. Während viele Downstream-Anwendungen zur Verfügung stehen, dieses Protokoll beschreibt speziell die Messung der intrazellulären zyklischen Adenosinmonophosphat (cAMP) als wesentlicher Parameter, der β-Zellfunktion.

Eine Methode zur Maus-Inselzellen der Bauchspeicheldrüse Isolation und intrazellulären cAMP-Bestimmung

Wir genetisch kodieren die unnatürliche Aminosäure, p-Azido-L-Phenylalanin in verschiedenen gezielten Positionen in GPCRs und zeigen die Vielseitigkeit der Azidogruppe in verschiedenen Anwendungen. Dazu gehören eine gezielte Photo Technologie, um Rückstände in der Ligandenbindungstasche eines GPCR identifizieren und ortsspezifische Modifikation von GPCRs bioorthogonale mit einem Peptid-Epitop-Tag oder fluoreszierende Sonde.

Genetisch kodierte Molecular Probes, um G-Protein-gekoppelte Rezeptoren Studieren

Messung von Biomarkern in komplexen biologischen Proben wird zunehmend Führung klinische Entscheidungsfindung. Wir beschreiben eine sehr empfindliche Methode, um gleichzeitig die Herzmyosin bindendes Protein-C, Creatin-Kinase-MB und Troponin I im Serum von Patienten mit Myokardinfarkt und gesunden Kontrollpersonen.

Eine empfindliche und spezifische Quantifizierung Methode zur Bestimmung der Serum Cardiac Myosin Binding Protein-C durch Elektrochemilumineszenz Immunoassay

Persistent Aktivierung inhibierenden G-Protein-gekoppelten Rezeptoren führt Sensibilisierung von Adenylylcyclase-Signalisierung. Um die wesentlichen molekularen Signalwege zu identifizieren, sind nonbiased Ansätze notwendig, aber diese Strategie erfordert die Entwicklung einer skalierbaren zellbasierten Assay-cAMP-Sensibilisierung. Hier beschreiben wir eine Sensibilisierung Assay für Kleinmolekül-und siRNA-Screening.

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Der allgegenwärtige Botenstoff c-di-GMP steuert das Wachstum und Verhalten vieler Bakterien. Wir haben eine neuartige, auf der Capture Compound-Massenspektrometrie basierende Technologie entwickelt, um c-di-GMP-bindende Proteine in praktisch jeder Bakterienspezies biochemisch zu identifizieren und zu charakterisieren.

Capture Compound Mass Spectrometry - Ein leistungsfähiges Tool zum Identifizieren Novel c-di-GMP Effektorproteinen

S1P entfaltet seine vielfältigen physiologischen Wirkungen über die Unterfamilie der S1P-Rezeptoren (S1PRs). Hier wird eine Pipeline beschrieben, um die Strukturen und Funktionen von S1PRs zu erläutern.

Eine Pipeline zur Untersuchung der Strukturen und Signalwege von Sphingosin-1-phosphat-Rezeptoren

Publizierte Daten zu Calcitonin-Gen-Related Peptide (CGRP)-Konzentrationen im menschlichen Plasma sind widersprüchlich. Diese Inkonsistenzen könnten auf das Fehlen einer standardisierten, validierten Methodik zur Quantifizierung dieses Neuropeptids zurückzuführen sein. In dieser Arbeit beschreiben wir ein validiertes ELISA-Protokoll (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) zur Aufreinigung und Quantifizierung von CGRP in humanem Plasma.

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Das in dieser Studie vorgestellte Protokoll veranschaulicht die Wirksamkeit des cAMP Difference Detector In Situ  bei der Messung von cAMP durch zwei Methoden. Bei einer Methode wird ein 96-Well-Plattenablese-Spektralphotometer mit HEK-293-Zellen verwendet. Die andere Methode zeigt einzelne HASM-Zellen unter einem Fluoreszenzmikroskop.

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Wir präsentieren einen validierten Sandwich-ELISA-Assay mit neuartigen monoklonalen Anti-HER2-Antikörpern. Dieser Assay ermöglicht die präzise Quantifizierung von zellgebundenem und freigesetztem HER2-Protein aus in vitro kultivierten Zellen und anderen Proben, einschließlich Blut und Geweben.

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Messung von zyklischem Guanosinmonophosphat (cGMP) in festen Geweben mittels Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) (Video) | JoVE Journal

Messung von zyklischem Guanosinmonophosphat (cGMP) in festen Geweben mittels Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

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