Schnelle Diagnose von Mycobacterium tuberculosis-Infektionen und Arzneimittelresistenzen auf der Grundlage von Echtzeit-Fluoreszenz-PCR

Zusammenfassung

Hier wird ein Protokoll zum Nachweis von Mycobacterium tuberculosis und seiner Arzneimittelresistenz mittels der quantitativen Echtzeit-Fluoreszenz-PCR (qPCR)-Technologie vorgestellt.

Zusammenfassung

Tuberkulose (TB) ist ein großes Gesundheitsproblem, von dem gefährdete Bevölkerungsgruppen unverhältnismäßig stark betroffen sind. Das Auftreten und die Ausbreitung arzneimittelresistenter Tuberkulose stellen eine ernsthafte Bedrohung für die globale öffentliche Gesundheit dar. Traditionelle Diagnosemethoden für Mycobacterium tuberculosis (MTB), wie z. B. Abstrichmikroskopie und Kultur, haben erhebliche Einschränkungen und führen oft zu einer verzögerten klinischen Behandlung. Um dieser Herausforderung zu begegnen, wurde ein effizientes diagnostisches Verfahren entwickelt, das auf Echtzeit-Fluoreszenz-PCR basiert. Aus Testproben können hochwertige MTB-Nukleinsäuren extrahiert werden, und der Resistenzstatus kann an wichtigen Resistenzstellen identifiziert werden. Im Vergleich zu herkömmlichen Methoden reduziert dieser Ansatz die Nachweiszeit erheblich auf nur wenige Stunden, so dass der Infektions- und Resistenzstatus kurz nach dem ersten Besuch eines Patienten bestimmt werden kann. Die Nachweissensitivität liegt bei über 85 % und die Spezifität bei 95 %. Diese nicht-invasive Technologie minimiert nicht nur die Beschwerden der Patienten, sondern unterstützt aufgrund ihrer geringen Kosten und hohen Effizienz auch eine genaue Diagnose in medizinischen Einrichtungen an der Basis. Insgesamt stellt der Ansatz eine deutliche Verbesserung der TB-Diagnostik dar.

Einleitung

Tuberkulose (TB), eine chronische Infektionskrankheit, die durch Mycobacterium tuberculosis (MTB) verursacht wird, gehört zu den zehn häufigsten Todesursachen weltweit¹. Arzneimittelresistente Tuberkulose (DR-TB) stellt eine große Herausforderung für die Bemühungen zur Bekämpfung der Tuberkulose dar. Der Aktionsplan für den Aufbau TB-freier Gemeinschaften (2022-2027), der vom chinesischen Zentrum für die Kontrolle und Prävention von Krankheiten (China CDC) herausgegeben wurde, betont die Notwendigkeit eines frühzeitigen Screenings auf Arzneimittelresistenzen bei allen bakteriologisch bestätigten Lungen....

Protokoll

Diese Forschung wurde von der Ethikkommission des Fünften Divisionskrankenhauses des Produktions- und Baukorps von Xinjiang genehmigt. Die Ethikzahl ist LLWYH2025001, und es gibt keinen ethischen Konflikt. Die verwendeten Reagenzien und die verwendeten Geräte sind in der Materialtabelle aufgeführt.

1. Probenentnahme

1. Verwenden Sie international standardisierte Sputumflaschen mit Schraubverschluss, die von der Weltgesundheitsorganisation (WHO) empfohlen werden, oder versiegelte Plastikboxen und Wachspapierboxen, um Sputumproben zu entnehmen.
2. Beschriften ....

Ergebnisse

In dieser Studie wurden Echtzeit-Fluoreszenz-PCR und Schmelzkurvenanalyse verwendet, um Sputumproben von 17 Tuberkulosepatienten zu testen. Darüber hinaus wurden 30 Patienten auf Rifampicin-Resistenztests getestet und 20 auf Resistenz gegen Isoniazid und Ethambutol getestet. Die real-time Fluoreszenz-PCR-Methode zeigte eine positive Nachweisrate von 88,2 % für den Mycobacterium tuberculosis-Komplex .

Diskussion

Das Auftreten von arzneimittelresistenten Mycobacterium tuberculosis-Komplex-Stämmen (MTBC) auf globaler Ebene hat die Behandlung von Tuberkulose-Patienten (TB) erheblich erschwert. Insbesondere die multiresistente (MDR) und extensiv resistente (XDR) Tuberkulose stellt die Tuberkulosebekämpfung vor gewaltige Herausforderungen¹². Der schnelle Nachweis von Arzneimittelresistenzen ist entscheidend für die Entwicklung geeigneter Behandlungsschemata, die Verhi.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Hochgeschwindigkeitszentrifuge
Lysepuffer	Xiamen Zhishan Biotechnology Co., Ltd.
Mycobacterium tuberculosis Ethambutol Resistance Mutation Detection Kit	Xiamen Zhishan Biotechnology Co., Ltd.
Mycobacterium tuberculosis Isoniazid-Resistenz-Mutationsnachweis-Kit	Xiamen Zhishan Biotechnology Co., Ltd.
Mycobacterium tuberculosis Nachweis von Rifampicin-Resistenzmutationen Ki	Xiamen Zhishan Biotechnology Co., Ltd.
SLAN-96P Real-Time-PCR-System	Shanghai Hongshi Medical Technology Co., Ltd.	SLAN-96P
Lösung zur Sputumverarbeitung	Xiamen Zhishan Biotechnology Co., Ltd.
TopPette Pipettierer

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