Entnahme von Nasenspülflüssigkeit an der Maus ohne Blutkontamination

Unsere Forschung konzentriert sich auf die Entwicklung einer Methode zur Gewinnung von Nasenspülflüssigkeit von Mäusen in großen Mengen, die zwei Hauptherausforderungen adressiert: das Erreichen einer hohen Ausbeute und die Vermeidung von Blutkontamination.

Es gibt zwei Ansätze zur Entnahme von Nasenspülflüssigkeit: den pharyngealen Weg, der größere Volumina ergibt, und den trachealen Weg, der die Blutkontamination reduziert.

Unsere Methode ermöglicht die Entnahme eines großen Volumens an Nasenspülflüssigkeit aus dem Rachen, während das Platzieren von Wattebällchen im Maul des Nagetiers hilft, die Blutkontamination zu minimieren. Der Ansatz ist sowohl einfach als auch kostengünstig.

Um Blutverunreinigungen in der Probe nachzuweisen, verwenden wir die forensische Methode, die als Luminol-Reaktion bekannt ist. Die Luminol-Reaktion ist einfach und empfindlicher als andere Methoden.

Die Konzentration von IgG im Blut ist viel höher als die in der Nasenspülflüssigkeit. Unsere Methode, die Blutkontaminationen vermeidet, ist in der immunologischen Forschung von entscheidender Bedeutung. Es eignet sich auch für die Analyse anderer Moleküle, wie z. B. des Mikrobioms, bei denen eine Blutkontamination die Genauigkeit beeinträchtigen kann.

[Erzähler] Legen Sie zunächst die euthanasierte Maus auf den Rücken auf eine chirurgische Platte und fixieren Sie alle vier Gliedmaßen mit Stecknadeln. Entnehmen Sie mit einer Ein-Milliliter-Spritze Blut aus dem Herzen. Öffnen Sie mit einer Schere die Bauchhöhle, um die viszeralen Organe und das Zwerchfell freizulegen. Schneiden Sie das Zwerchfell und die Rippen ein, um den rechten Vorhof freizulegen. Punktieren Sie dann den rechten Vorhof mit einer Schere, um das restliche Blut abzulassen. Legen Sie drei Wattebäusche in das Maul des Tieres, während Sie die Zunge nach vorne ziehen. Heben Sie dann den Kopf in eine Position mit der Nase nach oben und trennen Sie den Unterkiefer mit einer Schere, um eine Blutkontamination in der Nasenspülflüssigkeit zu verhindern. Ersetzen Sie die Wattebällchen durch frische, um eine Blutkontamination zu vermeiden. Nachdem die Blutung aufgehört hat, injizieren Sie 200 Mikroliter steriles PBS in die Choana und sammeln Sie die aus den Nasenlöchern ausgestoßene Nasenspülflüssigkeit in einem 1,5-Milliliter-Röhrchen. Um die Stammlösung für den Chemilumineszenznachweis vorzubereiten, lösen Sie ein Milligramm Luminol und fünf Milligramm Natriumperoxid in einem Milliliter sterilem Wasser in einem 1,5-Milliliter-Röhrchen auf. Decken Sie die Tube mit Alufolie ab und lagern Sie sie bis zur Verwendung bei vier Grad Celsius. Bereiten Sie anschließend eine Arbeitslösung vor, indem Sie die Stammlösung zehnfach mit entionisiertem Wasser verdünnen. Pipettieren Sie zwei Mikroliter der Nasenspülflüssigkeitsprobe in Vertiefungen einer 96-Well-Platte. Geben Sie 100 Mikroliter der verdünnten Luminollösung in jede Vertiefung und schütteln Sie die 96-Well-Platte kurz, um den Inhalt zu mischen. Beobachten Sie die Chemilumineszenzreaktion direkt im Dunkeln. Diese Abbildung zeigt einen Vergleich der Immunglobulin-A-Konzentrationen über verschiedene Probentypen hinweg. In der Nasenspülflüssigkeit ist die Konzentration von Immunglobulin A in Proben, die mit der neuartigen Methode entnommen wurden, im Vergleich zur herkömmlichen Methode niedriger, während Serum- und bronchoalveoläre Spülflüssigkeitsproben keine wesentlichen Unterschiede zwischen den beiden Methoden aufweisen. Diese Daten deuten darauf hin, dass die neuartige Methode die Kontamination in Nasenproben reduziert, was zu genaueren Immunglobulin-A-Messungen führt. Ein ähnliches Muster wird für Immunglobulin G beobachtet, wobei die Konzentrationen in der Nasenspülflüssigkeit, die mit der neuartigen Methode im Vergleich zur konventionellen Methode entnommen wurde, signifikant niedriger waren. Im Gegensatz dazu zeigen Serum- und bronchoalveoläre Lavage-Flüssigkeitsproben wiederum keine signifikanten Unterschiede zwischen den beiden Methoden, was darauf hindeutet, dass der neuartige Ansatz die Kontamination in Nasenproben konsequent reduziert und die Zuverlässigkeit von Immunglobulin-G-Messungen verbessert.