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Methodenartikel

Nachweis von Mycoplasma pneumoniae , Nukleinsäure- und Arzneimittelresistenzgen

826 Aufrufe

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DOI:

10.3791/68500

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19. September 2025

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In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll bietet eine schnelle und zuverlässige Möglichkeit, Mycoplasma pneumoniae-Infektionen zu erkennen und Antibiotikaresistenzen zu identifizieren. Es hilft Ärzten, schneller die richtigen Behandlungen auszuwählen, die Versorgung von Patienten mit Lungenentzündung zu verbessern und einen besseren Einsatz von Antibiotika zu unterstützen

Zusammenfassung

Mycoplasma pneumoniae (Mp) ist einer der am weitesten verbreiteten Erreger, der für ambulant erworbene Lungenentzündungen (CAP) in pädiatrischen Populationen verantwortlich ist. Der Nachweis von Mycoplasma pneumoniae-Resistenzgenen bietet eine solide technische Unterstützung und eine theoretische Grundlage für die präzise klinische Diagnose und Behandlung von MP-Infektionen. Eine genaue Diagnose und Bewertung der Arzneimittelresistenz bei Mp-Infektionen sind für die klinische Behandlung unerlässlich. Zu den gängigen Nachweismethoden für Mycoplasma pneumoniae gehören Kultur, Antikörpernachweis und molekularbiologisch basierte Assays. Die Mp-Kultur ist der Goldstandard für die Diagnose, erfordert jedoch ein spezielles Medium, ist zeitaufwändig und hat eine geringe Sensitivität. Der Antikörper-basierte Nachweis von Mp ist weit verbreitet; Im Frühstadium der Infektion kann es jedoch zu falsch negativen Ergebnissen kommen. Der molekularbiologisch basierte Nachweis bietet eine schnelle Durchlaufzeit, ein geringes Kontaminationsrisiko, eine hohe Sensitivität, eine hohe Spezifität und ist nicht durch den Zeitpunkt der Probenentnahme oder den Immunstatus begrenzt. Es wurde daher als neuer Goldstandard für die Diagnose von Mycoplasma pneumoniae-Infektionen anerkannt. Makrolid-Wirkstoffe sind die Behandlung der ersten Wahl bei Mp-Infektionen bei Kindern. Mit dem extensiven Einsatz von Makroliden bei Atemwegsinfektionen bei Kindern hat jedoch die Inzidenz von arzneimittelresistenten Mycoplasma pneumoniae-Infektionen zugenommen. Patienten, die mit resistenten Stämmen infiziert waren, erlebten nach der Verabreichung im Vergleich zu Patienten, die mit empfindlichen Stämmen infiziert waren, eine signifikant längere Fieberdauer, einen längeren Krankenhausaufenthalt und ein verlängertes Fieber. Zu den bisher identifizierten Mutationsstellen gehören 2063, 2064, 2067 und 2617. In China sind Punktmutationen nur an den Positionen 2063 und 2064 dokumentiert, wobei eine A-zu-G-Substitution an Position 2063 am häufigsten ist. Für diese Stellen wurde die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) in Kombination mit der Fluoreszenzsondentechnologie eingesetzt, um die Nukleinsäuren und Arzneimittelresistenzmutationen von Mycoplasma pneumoniae in menschlichen Sputumproben nachzuweisen. Der Nachweis von Mycoplasma pneumoniae-Resistenzgenen bietet eine entscheidende technische Unterstützung und eine theoretische Grundlage für eine genaue Diagnose und effektive Behandlung von Mp-Infektionen.

Einleitung

Mycoplasma pneumoniae (Mp) ist der kleinste pathogene Mikroorganismus, der in der Lage ist, unabhängig zu überleben und sich in einer Zwischenposition zwischen Bakterien und Viren befindet. Es wird hauptsächlich durch Atemtröpfchen oder Aerosole verbreitet und ist mit 20 % bis 40 %der CAP-Fälle der zweithäufigste Erreger der ambulant erworbenen Lungenentzündung (CAP)bei Kindern 1. Mp zeigt eine inhärente Resistenz gegen β-Lactam-Antibiotika wie Penicillin und Cephalosporine, da es keine Zellwand hat, auf die diese Antibiotika abzielen, indem sie die Zellwandsynthese behindern. Z....

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Protokoll

Alle Studienprotokolle wurden von der medizinischen Ethikkommission des Heyuan People's Hospital geprüft und genehmigt (Zulassungs-Nr. YXYJLL-LW2025001). Alle Patienten gaben vor der Teilnahme eine schriftliche Einverständniserklärung ab.

1. Entnahme von Proben

HINWEIS: Seien Sie vorsichtig bei der Aufrechterhaltung der aseptischen Technik während der Probenentnahme.

  1. Entnehmen Sie Sputumproben des Patienten oder des Verdachtspatienten. Entnehmen Sie Proben innerhalb von 3 Tagen nach Ausbruch der Krankheit des Patienten.
  2. Weisen Sie den Patienten an, den Mund ....

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Ergebnisse

Nach der Verflüssigung, Nukleinsäureextraktion und Fluoreszenz-PCR-Amplifikation von Sputumproben wurden der Startwert, der Endwert und der Schwellenwert der Baseline nach der Analyse der Amplifikationskurve modifiziert. Der Startwert war 3 und der Endwert 20.

Die repräsentativen Ergebnisse dieses Experiments waren positiv für die Mp-Nukleinsäure, und eine A: G-Resistenzmutation trat an 2063 oder 2064 Stellen auf, was auf eine M.......

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Diskussion

Die PCR und ihre abgeleiteten Techniken zeigen im Vergleich zu serologischen Methoden eine überlegene Sensitivität und Spezifität bei der Identifizierung, Typisierung und dem Nachweis von Arzneimittelresistenz bei Mycoplasma pneumoniae (MP). Darüber hinaus bieten PCR-basierte Techniken eine einfache Bedienung und geringere Kosten, was sie zu einer praktikablen Alternative für die klinische Routinediagnostik macht36. Mp ist ein bemerkenswerter Erreger, der.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.

Danksagungen

Die experimentellen Reagenzien werden vom Heyuan Key Laboratory of Molecular Diagnosis & Disease Prevention and Treatment, Doctors Station in der Provinz Guangdong, unterstützt.

....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Automatisiertes Nukleinsäure-ExtraktionsgerätGuangzhou Da 'an Gene Co., Ltd.Smart 32
Filter-TippsCoring Life Science Co., Ltd.298220010-10&Mikro; L
Filter-TippsCoring Life Science Co., Ltd.030230011-50&Mikro; L
Filter-TippsCoring Life Science Co., Ltd.056230015-300 & Mikro; L
MikroröhrchenCoring Life Science Co., Ltd.141249341,5 ml
Mycoplasma pneumoniae Kit zum Nachweis der Nukleinsäure- und Arzneimittelresistenz-Mutationsstelle ( Fluoreszenz-PCR-Methode )Jiangsu Mole Biotechnology Co., Ltd.20241111
Reagenz zur Extraktion von Kernsäuren (Methode der magnetischen Beads)Shengxiang Biotechnology Co., Ltd.Nr. G24004
PCR-RöhrchenDN Biotech (Hongkong) Co., Ltd.61210030,2 ml
Echtzeit-Fluoreszenz-PCR-InstrumentBIO-RADCFX96

Referenzen

  1. Waites, K. B., Xiao, L., Liu, Y., Balish, M. F., Atkinson, T. P. Mycoplasma pneumoniae from the Respiratory Tract and Beyond. Clin Microbiol Rev. 30 (3), 747-809 (2017).
  2. Leal, S. M., et al. Evaluation of C....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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