Im lebenden Organismus Konfokale Mikroskopie: Ein Standardverfahren zum Nachweis von Demodex-Milben am Lidrand

Wir entwickeln ein standardisiertes konfokales In-vivo-Mikroskopieprotokoll zum Nachweis des Augenlids von Demodex-Milben, um die klinische Akzeptanz zu erweitern. Wir passen das letztere des standardisierten IVCM-Protokolls an, das den Nachweis von Demodexmilben in vivo in der klinischen Praxis einschränkt. Es bietet einen nicht-invasiven, schmerzfreien und schnellen In-vivo-Nachweis mit einfacher Nachverfolgung, wodurch Schmerzen bei der Appellation und leichte Rückstandsprobleme vermieden werden.

[Erzähler] Reinigen Sie zunächst die Linse des Geräts mit Linsenreinigungstüchern. Verwenden Sie in Alkohol getränkte Wattebällchen, um die Kopfstütze und den Kinnhalter gründlich zu desinfizieren. Drücken Sie die beiden schwarzen Hebel zusammen und ziehen Sie den Kinnhalter nach vorne, bis er einrastet, um sicherzustellen, dass er sich in der richtigen horizontalen Position befindet. Drehen Sie nun die Einstellschraube, um die Kamera vor der Untersuchung vom Patienten weg zu bewegen. Tragen Sie ca. 0,02 Milliliter ophthalmisches Gel auf Carbomerbasis auf die Vorderseite der Mikroskoplinse des Geräts auf. Entfernen Sie anschließend eine sterile Einwegkappe aus Polymethylmethacrylat aus der Schutzhülle. Drücken Sie die Seiten der Kappe fest auf die Mikroskoplinse, ohne die vordere Oberfläche zu berühren. Tragen Sie dann einen Tropfen Gel-Tränenersatz auf die Vorderseite der Kappe auf. Erstellen Sie eine neue Patientenakte in der Software. Tragen Sie nun einen Tropfen Proparacainhydrochlorid auf den Rand des zu untersuchenden Augenlids auf. Bewegen Sie die Scankamera aus der Sicht des Bedieners nach links. Drehen Sie dann das Objektiv der CCD-Kamera, um das Kontrollbild senkrecht zur optischen Achse der Laserkamera des Scanners einzustellen. Starten Sie eine neue Untersuchung mit der Software. Wählen Sie auf der Registerkarte Untersuchungsdaten in der Dropdown-Liste Gerät die Option Heidelberg Retina Tomograph Cornea aus und beachten Sie das Dialogfeld Einstellungen des Hornhautmoduls. Wählen Sie FOV 400 aus der Dropdown-Liste Field Lens und klicken Sie zur Bestätigung auf OK. Warten Sie dann, bis sich das Erfassungsfenster öffnet, und überprüfen Sie die Anzeige des Live-Bildes und des Kontrollbildes der Scan-Laserkamera. Legen Sie als Nächstes die Faktoren im Erfassungsfenster fest. Wählen Sie 1x aus der Dropdown-Liste CCD-Zoomfaktor, um die Größe des Steuerungsbilds festzulegen. Aktivieren Sie die Kontrollkästchen Automatische Helligkeit und Automatik, um die automatische Helligkeitsregelung zu aktivieren. Stellen Sie sicher, dass der Schnittscantyp ausgewählt ist. Um ein Referenzbild aufzunehmen, deaktivieren Sie die automatische Helligkeitssteuerung. Stellen Sie dann die Fokusebene mit dem Einstellstift ein, bis das Livebild dunkler wird und anschließend eine helle Reflexion erscheint, die auf die vordere Oberfläche der Polymethylmethacrylat-Kappe hinweist. Klicken Sie im Abschnitt Fokuspositionsmikrometer auf Zurücksetzen und warten Sie, bis der Wert 0 erreicht. Aktivieren Sie dann das Kontrollkästchen Automatische Helligkeit und deaktivieren Sie den automatischen Reset. Stellen Sie nun die Höhe der Untersuchungsliege ein. Legen Sie das Kinn des Patienten auf den Kinnhalter und die Stirn gegen die Stirnstütze. Stellen Sie die Höhe der Kinnstütze mit der schwarzen Schraube so ein, dass die oberen Augenlider des Patienten mit den roten Markierungen auf der Kopfstützensäule übereinstimmen. Weisen Sie den Patienten an, nach unten auf die feste Lichtquelle zu schauen und einen festen Blick zu wahren. Drehen Sie mit einem Wattestäbchen das obere Augenlid um und legen Sie die Wimpernwurzel und den Lidrand vollständig frei. Drehen Sie die Einstellschraube, um die Reflexion des Laserstrahls auf Höhe des oberen Augenlids auszurichten. Bewegen Sie dann die Scanning-Laserkamera, bis der obere Lidrand sanft die Mitte der Polymethylmethacrylat-Kappe berührt. Scannen Sie die Wimpernwurzel vorsichtig von der Schläfen- zur Nasenseite mit winzigen horizontalen Bewegungen des Lidrandes. Drehen Sie das Mikroskopobjektiv im oder gegen den Uhrzeigersinn, um den Fokus zu verändern und ganze Follikel und Wurzeln zu beobachten. Nehmen Sie alle verdächtigen Demodex-Bilder mit dem Fußpedal auf. Nachdem Sie die Untersuchung beendet haben, wählen Sie im Optionen-Dialog die Option Nach Aufnahmezeit schnell sortieren, um Bilder von der Schläfen- bis zur Nasenseite anzuzeigen. Im Jahr 2024 stieg die Zahl der Probanden, die sich einer konfokalen In-vivo-Mikroskopie zum Demodex-Nachweis unterzogen, im Vergleich zu 2023 in allen Altersgruppen deutlich an, wobei die höchste Zahl in der Altersgruppe der 21- bis 30-Jährigen zu verzeichnen war. Die im Jahr 2024 eingeführte Standardarbeitsanweisung ermöglichte die Einbeziehung von Probanden im Alter von vier Jahren bis über 90 Jahren.