Name: Expansionsmikroskopie: Hochauflösende fluoreszierende Bildgebung mit einem herkömmlichen Mikroskop (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Lernen Sie die Kombination aus Kryofixierung und Expansionsmikroskopie für hochauflösende Bildgebung zellulärer Strukturen. Diese Methode bewahrt nahezu native Zellstrukturen und ermöglicht kostengünstige Superauflösung.

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<ol><li>Jacquemet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+biologist%27s+guide+to+super-resolution+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The cell biologist's guide to super-resolution microscopy.</a> J Cell Sci. 133 (11), jcs240713(2020).</li>
<li>Chen, F., Tillberg, P. W., Boyden, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging%3A+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical imaging: expansion microscopy.</a> Science. 347 (6221), 543-548 (2015).</li>
<li>Laporte, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-series+reconstruction+of+the+molecular+architecture+of+human+centriole+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Time-series reconstruction of the molecular architecture of human centriole assembly.</a> Cell. 187 (9), 2158-2174 (2024).</li>
<li>Steib, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WDR90+is+a+centriolar+microtubule+wall+protein+important+for+centriole+architecture+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">WDR90 is a centriolar microtubule wall protein important for centriole architecture integrity.</a> Elife. 9, e57205(2020).</li>
<li>Le Borgne, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolutionary+conserved+proteins+CEP90%2C+FOPNL%2C+and+OFD1+recruit+centriolar+distal+appendage+proteins+to+initiate+their+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">The evolutionary conserved proteins CEP90, FOPNL, and OFD1 recruit centriolar distal appendage proteins to initiate their assembly.</a> PLoS Biol. 20 (9), e3001782(2022).</li>
<li>Bertiaux, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+provides+new+insights+into+the+cytoskeleton+of+malaria+parasites+including+the+conservation+of+a+conoid%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy provides new insights into the cytoskeleton of malaria parasites including the conservation of a conoid.</a> PLoS Biol. 19 (3), e3001020(2021).</li>
<li>Liffner, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atlas+of+Plasmodium+falciparum+intraerythrocytic+development+using+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Atlas of Plasmodium falciparum intraerythrocytic development using expansion microscopy.</a> Elife. 12, RP88088(2023).</li>
<li>Amodeo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+novel+mitochondrial+genome+segregation+factor+TAP110+in+Trypanosoma+brucei%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of the novel mitochondrial genome segregation factor TAP110 in Trypanosoma brucei.</a> J Cell Sci. 134 (5), jcs254300(2021).</li>
<li>Corrales, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tubulin+detyrosination+shapes+Leishmania+cytoskeletal+architecture+and+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Tubulin detyrosination shapes Leishmania cytoskeletal architecture and virulence.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 122 (3), e2415296122(2025).</li>
<li>Brunet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Alms1+proteins+regulate+centriolar+cartwheel+assembly+by+enabling+Plk4-Ana2+amplification+loop%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Drosophila Alms1 proteins regulate centriolar cartwheel assembly by enabling Plk4-Ana2 amplification loop.</a> EMBO J. 44 (8), 2396(2025).</li>
<li>Langner, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+expansion+microscopy+%28U-ExM%29+of+mouse+and+human+kidneys+for+analysis+of+subcellular+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Cytoskeleton+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure expansion microscopy (U-ExM) of mouse and human kidneys for analysis of subcellular structures.</a> Cytoskeleton (Hoboken). 81 (11), 618-638 (2024).</li>
<li>Mercey, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+connecting+cilium+inner+scaffold+provides+a+structural+foundation+that+protects+against+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">The connecting cilium inner scaffold provides a structural foundation that protects against retinal degeneration.</a> PLoS Biol. 20 (6), e3001649(2022).</li>
<li>Steib, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TissUExM+enables+quantitative+ultrastructural+analysis+in+whole+vertebrate+embryos+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">TissUExM enables quantitative ultrastructural analysis in whole vertebrate embryos by expansion microscopy.</a> Cell Rep Methods. 2 (10), 100311(2022).</li>
<li>Freifeld, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+of+zebrafish+for+neuroscience+and+developmental+biology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy of zebrafish for neuroscience and developmental biology studies.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (50), E10799-E10808 (2017).</li>
<li>Yu, C. J., Orozco Cosio, D. M., Boyden, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ExCel%3A+super-resolution+imaging+of+C.+elegans+with+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">ExCel: super-resolution imaging of C. elegans with expansion microscopy.</a> Methods Mol Biol. 2468, 141-203 (2022).</li>
<li>Tillberg, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein-retention+expansion+microscopy+of+cells+and+tissues+labeled+using+standard+fluorescent+proteins+and+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Protein-retention expansion microscopy of cells and tissues labeled using standard fluorescent proteins and antibodies.</a> Nat Biotechnol. 34 (9), 987-992 (2016).</li>
<li>Gambarotto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+cellular+ultrastructures+using+expansion+microscopy+%28U-ExM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging cellular ultrastructures using expansion microscopy (U-ExM).</a> Nat Methods. 16 (1), 71-74 (2019).</li>
<li>Ku, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+and+scalable+super-resolution+imaging+of+three-dimensional+protein+localization+in+size-adjustable+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiplexed and scalable super-resolution imaging of three-dimensional protein localization in size-adjustable tissues.</a> Nat Biotechnol. 34 (9), 973-981 (2016).</li>
<li>Schnell, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunolabeling+artifacts+and+the+need+for+live-cell+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Immunolabeling artifacts and the need for live-cell imaging.</a> Nat Methods. 9 (2), 152-158 (2012).</li>
<li>Dubochet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-EM-the+first+thirty+years%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">Cryo-EM-the first thirty years.</a> J Microsc. 245 (3), 221-224 (2012).</li>
<li>Neuhaus, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethane-freezing%2Fmethanol-fixation+of+cell+monolayers%3A+a+procedure+for+improved+preservation+of+structure+and+antigenicity+for+light+and+electron+microscopies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Ethane-freezing/methanol-fixation of cell monolayers: a procedure for improved preservation of structure and antigenicity for light and electron microscopies.</a> J Struct Biol. 121 (3), 326-342 (1998).</li>
<li>Kellenberger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+cryofixation+and+freeze+substitution%3A+observations+and+theoretical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">The potential of cryofixation and freeze substitution: observations and theoretical considerations.</a> J Microsc. 161 (Pt 2), 183-203 (1991).</li>
<li>Laporte, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+native+cellular+organization+by+coupling+cryofixation+with+expansion+microscopy+%28Cryo-ExM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Visualizing the native cellular organization by coupling cryofixation with expansion microscopy (Cryo-ExM).</a> Nat Methods. 19 (2), 216-222 (2022).</li>
<li>Hinterndorfer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+expansion+microscopy+reveals+the+cellular+architecture+of+budding+and+fission+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure expansion microscopy reveals the cellular architecture of budding and fission yeast.</a> J Cell Sci. 135 (24), jcs260240(2022).</li>
<li>Mikus, F., Dey, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+expansion+microscopy+%28U-ExM%29+of+the+fission+yeast+Schizosaccharomyces+pombe%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure expansion microscopy (U-ExM) of the fission yeast Schizosaccharomyces pombe.</a> Methods Mol Biol. 2862, 47-59 (2025).</li>
<li>Ben Chaabene, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxoplasma+gondii+rhoptry+discharge+factor+3+is+essential+for+invasion+and+microtubule-associated+vesicle+biogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Toxoplasma gondii rhoptry discharge factor 3 is essential for invasion and microtubule-associated vesicle biogenesis.</a> PLoS Biol. 22 (8), e3002745(2024).</li>
<li>Shah, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life-cycle-coupled+evolution+of+mitosis+in+close+relatives+of+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Life-cycle-coupled evolution of mitosis in close relatives of animals.</a> Nature. 630 (8015), 116-122 (2024).</li>
<li>Klena, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in-depth+guide+to+the+ultrastructural+expansion+microscopy+%28U-ExM%29+of+Chlamydomonas+reinhardtii%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">An in-depth guide to the ultrastructural expansion microscopy (U-ExM) of Chlamydomonas reinhardtii.</a> Bio Protoc. 13 (17), e4792(2023).</li>
<li>van den Hoek, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+architecture+of+the+ciliary+base+reveals+the+stepwise+assembly+of+intraflagellar+transport+trains%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In situ architecture of the ciliary base reveals the stepwise assembly of intraflagellar transport trains.</a> Science. 377 (6605), 543-548 (2022).</li>
<li>Mikus, F., et al. Charting the landscape of cytoskeletal diversity in microbial eukaryotes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMikus%2C+F+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2024).</li>
<li>Petrich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+insights%3A+harnessing+expansion+microscopy+for+super-resolution+analysis+of+HIV-1-cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Expanding insights: harnessing expansion microscopy for super-resolution analysis of HIV-1-cell interactions.</a> Viruses. 16 (10), 1610(2024).</li>
<li>Louvel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((iU-ExM%3A+nanoscopy+of+organelles+and+tissues+with+iterative+ultrastructure+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">iU-ExM: nanoscopy of organelles and tissues with iterative ultrastructure expansion microscopy.</a> Nat Commun. 14 (1), 7893(2023).</li>
<li>Lemaître, F., et al. Unveiling the molecular architecture of T cells and immune synapses with cryo-expansion microscopy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLema%C3%AEtre%2C+F+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2025).</li>
<li>Millierioux, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+biosynthesis+of+sterols+and+fatty+acids+in+the+Trypanosoma+brucei+procyclic+form%3A+carbon+source+preferences+and+metabolic+flux+redistributions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">De novo biosynthesis of sterols and fatty acids in the Trypanosoma brucei procyclic form: carbon source preferences and metabolic flux redistributions.</a> PLoS Pathog. 14 (5), e1007116(2018).</li>
<li>Bangs, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning+and+cellular+localization+of+a+BiP+homologue+in+Trypanosoma+brucei%3A+divergent+ER+retention+signals+in+a+lower+eukaryote%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning and cellular localization of a BiP homologue in Trypanosoma brucei: divergent ER retention signals in a lower eukaryote.</a> J Cell Sci. 105 (Pt 4), 1101-1113 (1993).</li>
<li>Dolgin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Expansion+microscopy%27+turns+ten%3A+how+a+tissue-swelling+method+brought+super-resolution+imaging+to+the+masses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">'Expansion microscopy' turns ten: how a tissue-swelling method brought super-resolution imaging to the masses.</a> Nature. 637 (8046), 752-754 (2025).</li>
<li>Tosetti, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+function+of+the+alveolin+network+in+the+subpellicular+microtubules+and+conoid+assembly+in+Toxoplasma+gondii%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Essential function of the alveolin network in the subpellicular microtubules and conoid assembly in Toxoplasma gondii.</a> Elife. 9, e56635(2020).</li>
<li>Gorilak, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+facilitates+quantitative+super-resolution+studies+of+cytoskeletal+structures+in+kinetoplastid+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy facilitates quantitative super-resolution studies of cytoskeletal structures in kinetoplastid parasites.</a> Open Biol. 11 (9), 210131(2021).</li>
<li>Halpern, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+structured+illumination+expansion+microscopy+reveals+microbial+cytoskeleton+organization%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Hybrid structured illumination expansion microscopy reveals microbial cytoskeleton organization.</a> ACS Nano. 11 (12), 12677-12686 (2017).</li>
<li>Gao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+stimulated+emission+depletion+microscopy+%28ExSTED%29%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Expansion stimulated emission depletion microscopy (ExSTED).</a> ACS Nano. 12 (5), 4178-4185 (2018).</li>
<li>Zwettler, F. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+resolution+imaging+by+post-labeling+expansion+single-molecule+localization+microscopy+%28Ex-SMLM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Molecular resolution imaging by post-labeling expansion single-molecule localization microscopy (Ex-SMLM).</a> Nat Commun. 11 (1), 3388(2020).</li>
<li>Daetwyler, S., Fiolka, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-sheets+and+smart+microscopy%2C+an+exciting+future+is+dawning%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Light-sheets and smart microscopy, an exciting future is dawning.</a> Commun Biol. 6 (1), 502(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>5-ml-Röhrchen-Metallhalter</td><td>Dominique Dutscher</td><td>QB-E5</td><td>Freeze-Substitutionsschritt</td></tr><tr><td>620 Manueller Kryo-Kolben</td><td>RHOST</td><td>https://rhost-em.com/</td><td>Kryofixierungsschritt</td></tr><tr><td>Aceton 99,8 % AcroSeal</td><td>Acros Organics</td><td>Katze. Nr. 67-64-1 &NBSP;</td><td>Freeze-Substitutionsschritt</td></tr><tr><td>Acrylamyd 40 % (AA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4058</td><td>Expansionsverfahren&nbsp; (Ankern)</td></tr><tr><td>Acrylsäure &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>8.00181&nbsp;</td><td>Expansionsverfahren (Polymer)</td></tr><tr><td>Ammoniumpersulfat (APS)</td><td>Thermo Fisher</td><td>17874</td><td>Expansionsverfahren (Polymer)</td></tr><tr><td>Biopsie-Schlag</td><td>Dominique Dutscher</td><td>PUK-40</td><td>Benötigt zum Schneiden des Gels vor der Denaturierung&nbsp;</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td>Immunfärbung&nbsp;</td></tr><tr><td>Zellkammer Attofluor</td><td>Invitrogen</td><td>A7816</td><td>Bildaufnahmekammer, angepasst an 24-mm-Überdeckungen für die Bildgebung</td></tr><tr><td>Zellkammer</td><td>Lebenslanger Dienst im Magning</td><td>10900</td><td>Bildgerätekammer, angepasst an 18-mm-Abdeckungen für die Bildgebung</td></tr><tr><td>Deckfolien 12 mm&nlffel;</td><td>Dominique Dutscher</td><td>100040</td><td>Zellwachstum / Anbindung von T. brucei</td></tr><tr><td>Coverslips 24 mm & nbsp;</td><td>Dominique Dutscher</td><td>900547</td><td>Imaging&nbsp;</td></tr><tr><td>Deckfolien 18mm</td><td>VWR</td><td>631-0153</td><td>Imaging&nbsp;</td></tr><tr><td>Ethane gaz&nbsp;</td><td>Linde Gaz</td><td>88888DE</td><td>Benötigt für die Kryofixierung</td></tr><tr><td>Formaldehyd 36.5&ndash; 38 % (FA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; F8775</td><td>Expansionsverfahren&nbsp; (Ankern)</td></tr><tr><td>Glutaraldhehyd 25 % (GA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; G5882</td><td>Freeze-Substitutionsschritt</td></tr><tr><td>Glycerol&nbsp;</td><td>Euromedex&nbsp;</td><td>EU3550</td><td>Langzeit-Gelspeicherung&nbsp;</td></tr><tr><td>Flüssiger Stickstoff&nbsp;</td><td>Linde Gaz</td><td>2200975</td><td>Benötigt für die Kryofixierung (Abkühlung des Systems)</td></tr><tr><td>Mikroröhren-Clear-Lock 5 ml&nbsp;</td><td>Dominique Dutscher</td><td>390932A</td><td>Benötigt für die Gefriersubstitution</td></tr><tr><td>Nadel 18G</td><td>Dominique Dutscher</td><td>050123B</td><td>Musste Aceton sammeln</td></tr><tr><td>N,N-Methylbisacrylamid 2% (BIS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1533, SIGMA</td><td>Expansionsverfahren (Polymer)</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd 16 % (PFA)</td><td>EMS</td><td>Katze. Nr. 15710</td><td>Freeze-Substitutionsschritt</td></tr><tr><td>Poly-D-Lysin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1024</td><td>Beschichtung von Coverslips für Proben/Bildgebung&nbsp;</td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1274</td><td>Beschichtung von Coverslips für Proben/Bildgebung&nbsp;</td></tr><tr><td>Druckreduicer&nbsp;</td><td>Linde Gaz</td><td>CPLH0SJ-LIN224</td><td>Druckreduicer ermöglicht Ethan-Diffusion (Kryofixierung)</td></tr><tr><td>Seringe Terumo 10 ml</td><td>Dominique Dutscher</td><td>50132</td><td>Musste Aceton sammeln</td></tr><tr><td>Silikon-Elastomer-Kit</td><td>Dow</td><td>4001834</td><td>Kit zur Herstellung von silionierten Bohrlochplatten (Immunfärbung)&nbsp;</td></tr><tr><td>Natriumacrylat 97-99 % (SA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>408220</td><td>Expansionsverfahren (Polymer)</td></tr><tr><td>AK Scientific</td><td>R624</td><td>Expansionsverfahren (Polymer)</td><td></td></tr><tr><td>Natriumdodecylsulfat</td><td>Euromedex</td><td>EU0660</td><td>Expansionsverfahren (Denaturierung)</td></tr><tr><td>Tetramethylethylendiamin (TEMED)</td><td>Thermo Fisher</td><td>17919</td><td>Expansionsverfahren (Polymer)</td></tr><tr><td>Schläuche&nbsp;</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>8060-0060</td><td>Schläuche für Ethan-Störung (Kryofixierung)</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Euromedex</td><td>1005-7</td><td>Immunfärbung&nbsp;</td></tr><tr><td>Pinzette Dumont n&deg; 5&nbsp;</td><td>FineScienceTools</td><td>11255-20</td><td>Manipulation der Coverzettel&nbsp;</td></tr></tbody></table>

expansionsmikroskopie: hochauflösende fluoreszierende bildgebung mit einem herkömmlichen mikroskop

Expansion Microscopy: High-Resolution Fluorescent Imaging with a Conventional Microscope

Expansionsmikroskopie: Hochauflösende fluoreszierende Bildgebung mit einem herkömmlichen Mikroskop

Expansion microscopy (ExM) is an innovative super-resolution fluorescence microscopy technique that physically enlarges biological specimens, enabling ...

expansion-microscopy-high-resolution-fluorescent-imaging-with

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In vielen biologischen und klinischen Situationen ist es vorteilhaft, zelluläre Prozesse zu untersuchen, wie sie sich entwickeln in ihrer Muttersprache Mikroumgebung. Hier beschreiben wir die Montage und die Verwendung eines Low-Cost-Glasfaser-Mikroskop, das Echtzeit-Bildgebung in der Zellkultur, Tierversuche und klinische Patientenstudien bieten kann.

Hochauflösende LWL-Mikroendoskopiesysteme für In situ Cellular Imaging

Raumzeitliche Informationen über dynamische Proteine in lebenden Zellen sind entscheidend für das Verständnis der Biologie. Eine Art von hochauflösender Mikroskopie, die als schnelle 3D-strukturierte Beleuchtungsmikroskopie (f3D-SIM) bezeichnet wird, enthüllt einzigartige Informationen über den zytokinetischen Z-Ring in Bakterien: sowohl sein kügelchenartiges Aussehen als auch die schnelle Dynamik von FtsZ innerhalb des Rings.

Super-Resolution Imaging der zytokinetischen Z-Ring im Live-Bakterien mit Schnelle 3D-Structured Illumination Microscopy (F3D-SIM)

Hier präsentieren wir Ihnen eine praktische Anleitung für eine integrierte Mikroskopie Bausystem, das konventionelle Epi-fluoreszierende Bildgebung, Einzelmolekül-Erkennung-basierte Höchstauflösung Bildgebung und Multi-Color Einzelmolekül-Erkennung übergeht, einschließlich Einzelmolekül-Fluoreszenz Resonanz Energietransfer imaging, in einer Aufspannung auf kostengünstige Weise.

Durchführung von mehreren Imaging-Modi mit einem Fluoreszenzmikroskop

Nanoskalige Bildgebung klinischer Gewebeproben kann das Verständnis der Krankheitspathogenese verbessern. Expansionspathologie (ExPath) ist eine Version der Erweiterungsmikroskopie (ExM), modifiziert für die Kompatibilität mit Standard-Klinischen Gewebeproben, um die nanoskalige Konfiguration von Biomolekülen mit herkömmlichen Beugungsmikroskopen zu untersuchen.

Nanoskopische Bildgebung menschlicher Gewebeabschnitte über physikalische und isotrope Expansion

Die vorgestellte Methode ermöglicht die Visualisierung fluoreszierend markierter zellulärer Proteine mit Erweiterungsmikroskopie, die zu einer Auflösung von 70 nm auf einem herkömmlichen Mikroskop führt.

Bildgebung der podozytischen Proteine Nephrin, Actin und Podocin mit Erweiterungsmikroskopie

In dieser Arbeit wird ein Protokoll für die Implementierung der Expansionsmikroskopie in frühen Drosophila-Embryonen vorgestellt, um eine hochauflösende Bildgebung mit einem konventionellen konfokalen Laser-Scanning-Mikroskop zu erreichen.

Verwendung von Expansionsmikroskopie zur physikalischen Vergrößerung ganzer Drosophila-Embryonen für hochauflösende Bildgebung

Hier wird eine neue Version der Expansionsmikroskopie (ExM), Magnify, vorgestellt, die für eine bis zu 11-fache Expansion modifiziert wurde, eine umfassende Palette von Biomolekülklassen bewahrt und mit einer Vielzahl von Gewebetypen kompatibel ist. Es ermöglicht die Untersuchung der nanoskaligen Konfiguration von Biomolekülen mit herkömmlichen beugungsbegrenzten Mikroskopen.

Universelle molekulare Retention mit 11-facher Expansionsmikroskopie

Diese Studie zeigt ein detailliertes Protokoll zur Durchführung der Ultrastrukturexpansionsmikroskopie in drei in vitro Lebenszyklusstadien von Trypanosoma cruzi, dem Erreger, der für die Chagas-Krankheit verantwortlich ist. Wir schließen die optimierte Technik für Zytoskelettproteine und die Pan-Proteom-Markierung ein.

Ultrastrukturelle Expansionsmikroskopie in drei in vitro Lebenszyklusstadien von Trypanosoma cruzi

Hier schlagen wir ein einfaches Protokoll vor, das metabolisches Oligosaccharid-Engineering, Click-Chemie und Expansionsmikroskopie kombiniert und die Biobildgebung von intrazellulären sialylierten N-Glykoproteinen mit verbesserter Auflösung unter Verwendung von Routinemikroskopiegeräten ermöglicht.

Visualisierung der intrazellulären Sialylierung mit Click-Chemie und Expansionsmikroskopie

Dieses Protokoll beschreibt die fortschrittlichen Bildgebungsanwendungen und das gemeinsame Ressourcenmanagement eines laserabtastenden konfokalen Mikroskopsystems, das mit einem multiplexierten Array-Detektor für hochauflösende zelluläre und subzelluläre Bildgebung integriert ist. Der Workflow ermöglicht multimodale Bildgebung von Konfokal bis Superauflösung (~120 nm) innerhalb einer einzigen Plattform und macht die Visualisierung im Nanomaßstab zugänglicher.

Superauflösende Bildgebung und gemeinsames Management: Ein Protokoll für konfokale Mikroskopie mit Multiplex-Detektion

Lernen Sie die Kombination aus Kryofixierung und Expansionsmikroskopie für hochauflösende Bildgebung zellulärer Strukturen. Diese Methode bewahrt nahezu native Zellstrukturen und ermöglicht kostengünstige Superauflösung.

Expansionsmikroskopie: Hochauflösende fluoreszierende Bildgebung mit einem herkömmlichen Mikroskop

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